【摘要】：目的:建立腸套疊缺血再灌注損傷動(dòng)物模型,通過免疫組織化學(xué)染色,探索TLR4分子是否參與腸缺血再灌注損傷,運(yùn)用TLR4量子點(diǎn)探針進(jìn)行近紅外光活體示蹤和體外細(xì)胞成像實(shí)驗(yàn),從分子影像水平實(shí)現(xiàn)腸缺血再灌注損傷的診斷,為防治腸缺血再灌注損傷提供理論依據(jù)。方法:1、收集因腸套疊導(dǎo)致的腸壞死組織標(biāo)本,通過免疫組織化學(xué)染色觀察壞死腸組織中TLR4和p38MAPK分子的表達(dá)情況。2、62只BALB/c小鼠中,隨機(jī)選取36只用于觀察病理學(xué)過程,16只作為對(duì)照組,剩余10只作為腸套疊缺血再灌注組。建立腸套疊動(dòng)物模型并使用Micro-CT進(jìn)行驗(yàn)證;采用H-E染色評(píng)估腸套疊的動(dòng)態(tài)變化,同時(shí)采用免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)TLR4和p38MAPK分子在缺血再灌注損傷的腸組織中的表達(dá)情況。3、將18只裸鼠隨機(jī)分為3組,分別為正常對(duì)照組、腸套疊缺血再灌注組、腸套疊缺血再灌注加抑制劑組。建立腸套疊缺血再灌注損傷模型和腸上皮細(xì)胞缺氧復(fù)氧模型,運(yùn)用TLR4量子點(diǎn)探針,通過活體和體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn),探索量子點(diǎn)探針在腸套疊缺血再灌注損傷模型中以及在腸上皮細(xì)胞缺氧復(fù)氧模型中的顯像作用。結(jié)果:1、對(duì)于人體標(biāo)本,TLR4在腸套疊壞死腸組織中的表達(dá)明顯增強(qiáng),呈棕褐色彌漫或顆粒狀分布于細(xì)胞膜和細(xì)胞漿中。p38MAPK在壞死腸組織中呈高表達(dá),其定位以胞漿為主。2、在46只小鼠中成功建立了回結(jié)腸套疊模型。在腸套疊發(fā)病開始和第5分鐘,沒有明顯血供障礙。第15分鐘,在腸套疊模型中可見血供障礙。第30分鐘,發(fā)現(xiàn)血供障礙或靜脈淤血。隨著時(shí)間的推移,血供障礙和小腸梗阻加劇。腸套疊120分鐘時(shí),6只小鼠有腸壞死,2例腸穿孔。在Micro-CT上,46只小鼠可見套塊。這些套塊中,36個(gè)呈同心圓征和10個(gè)呈假腎形。在增強(qiáng)CT上,腸套疊30分鐘時(shí)發(fā)現(xiàn)小腸梗阻。60分鐘后,腸套疊腸壁增厚,小腸因充滿液體而擴(kuò)張。組織學(xué)證實(shí)46例腸套疊。在≤30分鐘組,沒有明顯的炎癥變化,提示腸套疊在急性期和早期階段,但在30分鐘組,腸套疊模型中發(fā)現(xiàn)炎癥性改變和壞死區(qū)域。TLR4主要在上皮細(xì)胞胞膜和胞漿表達(dá)。在腸套疊IR模型組織中,腸黏膜上皮細(xì)胞中TLR4的MQS評(píng)分為5.189±2.483;對(duì)照組中為1.186±1.171,兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。p38MAPK主要在腸上皮細(xì)胞胞漿表達(dá)。在腸套疊IR模型組織中,腸黏膜上皮細(xì)胞中p38MAPK的MQS評(píng)分為8.712±0.920;對(duì)照組中為2.109±0.109,兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。3、活體實(shí)驗(yàn)中,在IR組,腹部腸管可見明顯TLR4熒光信號(hào);在正常對(duì)照組中,腹部腸管未見TLR4熒光信號(hào);在IR+TAK-242組中,腹部腸管亦未見明顯TLR4熒光信號(hào)。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中,TLR4在腸上皮細(xì)胞缺氧復(fù)氧+Anti-TLR4-QDs組中顯示為強(qiáng)烈的紅色熒光信號(hào),呈彌漫或顆粒狀分布于細(xì)胞膜和胞漿中,細(xì)胞核上無紅色熒光信號(hào);在單純量子點(diǎn)對(duì)照組、正常腸上皮細(xì)胞+Anti-TLR4-QDs組和缺氧復(fù)氧+TLR4預(yù)處理組中均未見明顯紅色熒光信號(hào)。結(jié)論:1、TLR4在腸套疊壞死腸組織中呈高表達(dá),呈彌漫或顆粒狀分布于細(xì)胞膜和胞漿中。p38MAPK在壞死腸組織中呈高表達(dá),其定位以胞漿為主。2、在小鼠腸套疊模型中,隨著時(shí)間的推移,腸道血供有惡化趨勢(shì)。腸套疊期間發(fā)生缺血再灌注損傷,并發(fā)現(xiàn)腸套疊缺血再灌注損傷與TLR4和p38MAPK上調(diào)有關(guān)。3、TLR4量子點(diǎn)探針可以特異性地與腸缺血再灌注損傷中高表達(dá)的TLR4分子結(jié)合,為急性腸套疊缺血再灌注損傷早期活體顯像的有效手段。
【圖文】：

TLR4在腸套疊壞死腸組織細(xì)胞的胞膜和胞漿內(nèi)強(qiáng)表達(dá)

圖 2 p38MAPK 在腸套疊壞死腸組織細(xì)胞的胞漿內(nèi)強(qiáng)表達(dá)。討 論套疊是指某一段腸管及系膜套入其相連的腸管內(nèi)引起的腸梗腹癥之一。隨著套疊時(shí)間的延長(zhǎng)，會(huì)使原來套疊的腸管受壓壓引起腸管的痙攣，，致使套疊部位的腸管發(fā)生血液循環(huán)障礙靜脈受壓迫導(dǎo)致血液回流受限引起腸壁充血水腫及靜脈曲張淋巴、靜脈回流障礙加重，就會(huì)造成動(dòng)脈供血不足以至于引起長(zhǎng)時(shí)間套疊，使套疊部位的腸管缺血，會(huì)引起腸管的缺血壞血，部分腸套疊復(fù)位后腸組織會(huì)出現(xiàn)缺血再灌注損傷。小腸缺a Reperfusion Injury，IRI）是小腸發(fā)生缺血后再灌注加重存結(jié)構(gòu)損傷的現(xiàn)象[19]。最常見的表現(xiàn)為腹痛、血便和腹部腫塊。病理分為三期：腸
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R725.7

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2596781