【摘要】： 目的 建立套式逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Nested RT-PCR)檢測臨床樣本副流感3型病毒(HPIV3)基因的方法，并進(jìn)一步對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行序列分析，結(jié)合臨床資料，分析蘭州地區(qū)HPIV3的感染現(xiàn)狀及特征。 方法 1．收集2005年7月～12月，2006年10月～2007年3月蘭州地區(qū)的呼吸道感染患兒的300份鼻咽部分泌物(NPS)標(biāo)本。其中男性162例，女性138例。年齡4天～14歲。 2．根據(jù)HPIV3血凝素蛋白(HN)的基因保守區(qū)設(shè)計(jì)引物，用套式RT-PCR檢測NPS里的HPIV3基因。 3．對HPIV3在小兒ARI(acute respiratory tract infection)中所占的比例、性別、年齡、季節(jié)分布及臨床特點(diǎn)進(jìn)行分析。 4．隨機(jī)選取11份HPIV3陽性序列，與Genebank上的已知序列進(jìn)行比對，繪制遺傳進(jìn)化樹，從基因進(jìn)化角度對蘭州地區(qū)HPIV3的進(jìn)化特征進(jìn)行初步探討。 結(jié)果 1．300例標(biāo)本用套式RT-PCR檢測出HPIV3陽性46例，占總檢測標(biāo)本的15.33％(46／300)。 2．在HPIV3陽性46例中，男性26例，，感染率為16.04％(26／162)，女性20例，，感染率為14.49％(20／138)，男性比女性略高。年齡小于3歲的有42例，占總檢出率的91.30％(42／46)，其中1歲以下的有17例，占總檢出率的36.96％(17／46)。急性上呼吸道感染(URI)患兒標(biāo)本192例，其中HPIV3檢測陽性標(biāo)本32例，(陽性率為16.67％)，急性下呼吸道標(biāo)本108例，其中HPIV3陽性14例(陽性率為12.96％)。 3．在所收集標(biāo)本月份中，每個月份均有HPIV3的檢出，其中2005年11月，2007年1月，2月為高峰期。 4．隨機(jī)選取11份陽性標(biāo)本送檢測序，測得的核苷酸序列經(jīng)過blast軟件比較，與GeneBlank中的已知的HPIV3序列同源性在91.0％～99.6％之間。序列結(jié)果分析提示，隨機(jī)選取的RT-PCR陽性的11例標(biāo)本是HPIV3陽性�！　� 5．基因進(jìn)化樹分析顯示，11份陽性樣本序列屬同一進(jìn)化枝，6份2006年，10月～2007年，3月的樣本序列除145SEQ外屬同一進(jìn)化分枝。而5份2005年的樣本序列除1630SEQ外，與日本分離株同屬同一進(jìn)化分枝。 結(jié)論：　　 1．HPIV3在蘭州地區(qū)呼吸道感染患兒中占較高的比例，是引起小兒呼吸道感染的重要呼吸道病原之一，其所致呼吸道感染以3歲以下嬰幼兒多見，尤以1歲以下為多，但男女感染比例無顯著性差異(x~2=0.3956 p＞0.05)，上下呼吸道感染率無顯著差異(x~2=0.7303 P＞0.05)�！　� 2．HPIV3在蘭州地區(qū)2005年，7月～12月，2006年，10月～2007年，3月中每個月均有散發(fā)，但在冬春季形成流行高峰。　　 3．套式RT-PCR檢測方法用于HPIV3的基因診斷具有特異性強(qiáng)，檢出率高的優(yōu)點(diǎn)�！　� 4．通過基因進(jìn)化樹的分析顯示，2005年樣本序列與2006年樣本序列有很近的親緣關(guān)系，但分屬兩個進(jìn)化分支，說明這兩個時(shí)間段的HPIV3流行株在基因進(jìn)化關(guān)系上存在差異，2005年樣本序列與日本的HPIV3分離株同屬同一進(jìn)化分支，顯示了HPIV3流行株可能存在地域相關(guān)性。
【圖文】：

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本文編號：2596049