【摘要】：目的：本研究通過建立新生大鼠缺氧缺血性腦損傷（hypoxic-ischemic braindamage， HIBD）模型，觀察血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)在新生大鼠HIBD模型中穿透血腦屏障(Blood brain barrier，BBB)的時間，探討HIBD時BBB通透性改變的“時間窗”，為VEGF在HIBD中應用提供最佳給藥方法和治療時間的實驗依據(jù)。 方法：將VEGF經(jīng)二種途徑(骨髓腔、鼻腔)在不同時間點同時給予7日齡SD新生大鼠HIBD模型，同時設假手術(shù)組、HIBD組、HIBD骨髓腔注射VEGF組及HIBD鼻腔滴VEGF組，每組各48只。四組根據(jù)處死時間不同又分為6個亞組：2h組、6h組、12h組、24h組、48h組、72h組，每亞組各8只。HIBD模型采用阻斷左側(cè)頸總動脈后置于含8%O292%N2混合氣體的低氧環(huán)境中2h制備而成。HIBD骨髓腔注射VEGF組及HIBD鼻腔滴VEGF組均于處死前半小時給VEGF。在設定時間點觀察各組大鼠運動行為學變化、腦組織外觀、腦組織病理改變及ELISA法檢測腦組織勻漿中VEGF水平。 結(jié)果：（1）7日齡SD大鼠在HIBD后出現(xiàn)不同程度的行為異常。（2）假手術(shù)組腦組織在各時間點外觀正常，兩側(cè)對稱，無水腫、軟化及液化壞死灶。HIBD模型組在12h左側(cè)腦組織出現(xiàn)輕微水腫、體積增大；在24h左側(cè)腦組織水腫明顯，局部可呈蒼白色；在48h、72h左側(cè)腦組織水腫程度加重，局部可見軟化、液化壞死灶。（3）HE染色：假手術(shù)組腦組織在各時間點結(jié)構(gòu)層次清楚、細胞形態(tài)正常。HIBD組在12h左側(cè)腦組織可有細胞水腫；在24h、48h可見細胞不同程度的水腫、變性壞死、溶解、核固縮及核碎裂；72h細胞壞死更明顯。（4）四組新生大鼠在2h、6h、12h、24h、48h、72h ELISA法檢測10%腦組織勻漿VEGF水平分別為，假手術(shù)組：119.7±12.6ng/L、117.6±12.4ng/L、120.9±12.1ng/L、124.1±12.2ng/L、121.3±12.2ng/L、119.3±10.9ng/L，HIBD組：118.9±11.3ng/L、129.7±12.5ng/L、164.1±14.6ng/L、208.5±15.8ng/L、177.6±13.6ng/L、159.3±16.1ng/L，骨髓注射組：121.0±10.2ng/L、132.0±9.9ng/L、213.1±23.4ng/L、523.2±26.6ng/L、463.3±39.4ng/L、371.1±16.7ng/L，鼻腔組：224.5±19.1ng/L、231.9±20.0ng/L、237.6±21.4ng/L、231.3±19.3ng/L、218.6±29.6ng/L、227.9±22.1ng/L。觀察到：假手術(shù)組在各時間點腦組織勻漿中VEGF水平?jīng)]有明顯變化，差異無統(tǒng)計學意義（P0.05），提示假手術(shù)組在各時間點腦組織勻漿中VEGF水平是相對穩(wěn)定的。HIBD組在各時間點腦組織勻漿中VEGF水平有明顯不同，差異有統(tǒng)計學意義（P0.01）；2h與6h之間VEGF水平無明顯變化，差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）；隨著HIBD后時間的延長，在12h、24h、48h、72h VEGF水平均較2h、6h升高，差異均有統(tǒng)計學意義（Pa0.01），尤其在24h腦組織勻漿中VEGF水平較12h、48h、72h均明顯升高，差異均有統(tǒng)計學意義（Pa0.01），72h較48h明顯下降，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05），表明HIBD組腦組織勻漿中VEGF水平在2h至6h沒有升高，在6h后至12h開始升高，于24h達高峰，至48h開始下降，于72h明顯下降。本實驗對HIBD組腦組織免疫組織化學染色在12h染色開始明顯，24h染色達到高峰，，至48h染色開始下降，于72h染色明顯下降，這與ELISA法檢測腦組織勻漿中VEGF水平變化相一致。骨髓注射組在不同時間點間腦組織勻漿中VEGF水平有明顯不同，差異有統(tǒng)計學意義（P0.01），而2h與6h之間VEGF水平無明顯變化，差異無統(tǒng)計學意義（P0.05），但在12h、24h、48h、72h VEGF水平均較2h、6h升高，差異均有統(tǒng)計學意義（Pa0.01），尤其在24h腦組織勻漿中VEGF水平達到高峰較12h、48h、72h均明顯升高，差異均有統(tǒng)計學意義（Pa0.01），72h較48h明顯下降，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05），表明骨髓注射組腦組織勻漿中VEGF水平在12h開始升高，于24h達高峰，至48h開始下降，于72h明顯下降，且在此時間段VEGF水平明顯高于HIBD組，這提示HIBD12h后BBB通透性明顯增加，外周的VEGF可以跨過BBB，在24h通透性最高，于48h通透性開始降低，至72h通透性明顯降低。鼻腔組在不同時間點間腦組織勻漿中VEGF水平?jīng)]有明顯變化，差異無統(tǒng)計學意義（P0.05），表明鼻腔組在不同時間點間腦組織勻漿中VEGF水平是相對穩(wěn)定的。 在相同時間點不同組別間的比較：在2h、6h時間點均可觀察到假手術(shù)組、HIBD組、骨髓注射組各組間腦組織勻漿中VEGF水平均沒有明顯變化，差異均無統(tǒng)計學意義（Pa0.05）；鼻腔組較假手術(shù)組、HIBD組、骨髓注射組腦組織勻漿中VEGF水平均明顯升高，差異均有統(tǒng)計學意義（Pa0.01）。這提示在HIBD后2h、6h，HIBD組腦組織缺氧缺血沒有影響腦組織VEGF水平，骨髓途徑給予VEGF均不能進入腦組織，但鼻腔途徑給予VEGF均可以相對穩(wěn)定的水平進入腦組織。在12h、24h、48h、72h時間點均可觀察到HIBD組、骨髓注射組、鼻腔組腦組織勻漿中VEGF水平均較假手術(shù)組明顯升高，差異均有統(tǒng)計學意義（Pa0.01）；骨髓注射組、鼻腔組腦組織勻漿中VEGF水平均較HIBD組明顯升高，差異均有統(tǒng)計學意義（Pa0.01）。在24h、48h、72h時間點均可觀察到骨髓注射組腦組織勻漿中VEGF水平均較鼻腔組明顯升高，差異均有統(tǒng)計學意義（Pa0.01）。這些提示腦組織缺氧缺血12h、24h、48h、72h可以使腦組織VEGF表達水平升高；在HIBD后12h、24h、48h、72h骨髓途徑給予VEGF均可不同程度地進入腦組織，尤其在HIBD后24h、48h為最明顯，但于72h開始呈下降趨勢，即說明HIBD后12h BBB通透性明顯增加，在24h通透性最高，于48h通透性開始下降，至72h通透性明顯降低。鼻腔組在不同時間點間腦組織勻漿中VEGF水平是相對穩(wěn)定的，且在各時間點VEGF水平都明顯高于HIBD組，這說明在HIBD后各時間點經(jīng)鼻腔途徑給予VEGF均可以相對穩(wěn)定的水平進入腦組織，并說明本組腦組織中VEGF水平與HIBD無關，即與BBB通透性改變無關，提示鼻腔途徑給VEGF不是經(jīng)過BBB進入腦組織，而可能是經(jīng)其它途徑，如嗅覺通路和三叉神經(jīng)通路進入腦組織。 結(jié)論：7日齡SD大鼠HIBD后，其腦組織VEGF表達在12h開始升高，隨著時間的延長，于24h達高峰，至48h開始下降，于72h明顯下降；在HIBD后2h、6h、12h、24h、48h、72h鼻腔途徑給予VEGF均可以相對穩(wěn)定的水平進入腦組織，即提示鼻腔途徑給VEGF不是經(jīng)過BBB進入腦組織，而可能是經(jīng)其它途徑；骨髓途徑給予VEGF在HIBD后2h、6h均不能進入腦組織，而在12h、24h、48h、72h均可不同程度地進入腦組織，尤其在HIBD后24h、48h為最明顯，但于72h開始呈下降趨勢，即說明HIBD后12h BBB通透性明顯增加，在24h通透性最高，于48h通透性開始下降，至72h通透性明顯降低，所以HIBD后12h至72h是BBB開放的“時間窗”。
【圖文】：

成功的重要行為學改變之一。實驗前各組新生大鼠行為能力正常，HIBD 模型的新生大鼠出現(xiàn)不同程度的行為異常改變，表現(xiàn)為置于低氧艙后 10~15min 出躁動不安，翻滾，活動增多，20min 后出現(xiàn)頭部和軀體的持續(xù)顫抖，不能翻身間斷左旋，甚至抽搐等；40min 后逐漸由興奮轉(zhuǎn)為抑制，表現(xiàn)為左側(cè)臥位，四伸直，間斷性肢體顫抖，間斷性尾部翹起左旋；1h 后以抑制癥狀為主，表現(xiàn)間斷肢體肌肉顫抖甚至意識障礙如嗜睡。大鼠 HIBD 后有反應差，吃奶減少動作不協(xié)調(diào)等表現(xiàn)。其中夾尾尖叫者(72 只)37.5%，翻身能力差者(183 只)95.3%平衡能力異常者(178 只)92.7%，肢體抖動者(192 只)100%，驚厥抽搐者(只)16.1%，意識障礙者(19 只)9.9%。本組資料 HIBD 術(shù)后 24 小時所有動物走不穩(wěn)，右側(cè)肢體無力，向左側(cè)旋轉(zhuǎn)，身體晃動不穩(wěn)，肢體抖動。HIBD 后所有物表現(xiàn)為右側(cè)前肢及后肢均外展，提尾懸空時右前肢不能伸直或稍貼胸壁，彎向左上，行走時向左轉(zhuǎn)圈及左側(cè)傾倒，不能直線前行，肌張力降低。假手組無上述行為異常表現(xiàn)。（見圖 1~2）

鼠HIBD后1h左側(cè)傾倒右
【學位授予單位】：蚌埠醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R722.1

【參考文獻】

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1 劉麗旭,楊于嘉;高壓氧治療新生大鼠缺氧缺血性腦損傷量效及時效關系[J];中國當代兒科雜志;2001年04期

2 王社軍,杜長生,唐紅,李鐘銘,馮興軍,張欣健,李永哲;大鼠腦缺血再灌注后血腦屏障通透性的改變[J];武警醫(yī)學;2005年10期

3 邵肖梅;;新生兒缺氧缺血性腦病的診治進展及相關問題[J];臨床兒科雜志;2007年03期

本文編號：2584615