【摘要】：帕金森病(Parkinson's disease, PD)是中老年人常見(jiàn)的神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病,臨床治療方法主要有藥物治療、外科治療和細(xì)胞移植等。神經(jīng)干細(xì)胞(Neural stem cells, NSCs)能夠分化成PD所缺少的多巴胺能神經(jīng)元,因此為細(xì)胞移植治療PD帶來(lái)了新的希望,但是目前仍然存在很多問(wèn)題,如NSCs供應(yīng)不足、移植后存活率低、分化為多巴胺能神經(jīng)元的比例低等。 本文首先通過(guò)CCK-8試劑盒檢測(cè)了體外單層貼壁培養(yǎng)的NSCs的生存力和生長(zhǎng)曲線(xiàn),考察了中藥活性單體原兒茶酸(Protocatechuic acid, PCA)對(duì)NSCs增殖及自發(fā)性凋亡的影響；利用免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)和流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)了酪氨酸羥化酶(Tyrosine hydroxylase, TH)和核受體相關(guān)因子1(nuclear receptor-related factor1, Nurr1)陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量,通過(guò)蛋白質(zhì)印跡法及RT-PCR的方法檢測(cè)了TH蛋白及TH基因的表達(dá),從而分別從細(xì)胞水平、蛋白質(zhì)水平和基因水平上研究了PCA對(duì)NSCs分化為多巴胺能神經(jīng)元的影響,并進(jìn)一步探討了PCA調(diào)節(jié)NSCs分化的作用機(jī)制。 結(jié)果顯示,PCA能夠依賴(lài)時(shí)間和劑量提高單層貼壁培養(yǎng)的NSCs生存力并促進(jìn)NSCs的增殖；在PCA (0.06mM)作用下培養(yǎng)4d后,細(xì)胞的存活率提高至對(duì)照的142.5%±9.5%并有效地抑制了細(xì)胞的自發(fā)性凋亡。PCA單獨(dú)使用不能誘導(dǎo)神經(jīng)干/祖細(xì)胞的分化,但與1%胎牛血清的聯(lián)合應(yīng)用時(shí),PCA有效地提高分化為多巴胺能神經(jīng)元的比例。TH蛋白及TH基因的表達(dá)量分別提高至對(duì)照的180.67%和128.2%,同時(shí)Nurr1陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量也提高至FBS組的125%,提示在胎牛血清協(xié)同作用下,PCA的促分化作用可能與Nurr1通路密切相關(guān)。另外PCA也明顯提高了分化顯型的生存力且抑制了細(xì)胞凋亡,同時(shí)激活了細(xì)胞內(nèi)源性的抗氧化酶系統(tǒng)。 綜上所述,PCA能夠有效地促進(jìn)單層貼壁培養(yǎng)的NSCs增殖并抑制細(xì)胞凋亡；在1%胎牛血清協(xié)同作用下,PCA可有效促進(jìn)NSCs分化為多巴胺能神經(jīng)元的比例并提高細(xì)胞分化顯型的生存力。
【學(xué)位授予單位】：大連理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R742.5

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本文編號(hào)：2542920