【摘要】：研究背景： 腹瀉病是導(dǎo)致全球兒童發(fā)病和死亡的主要病因之一,在低收入國家每年約有2百萬兒童因腹瀉而死亡。引起感染性腹瀉的病原體主要為細菌、病毒和寄生蟲等,隨著抗生素的應(yīng)用和生活衛(wèi)生條件的改善,細菌性腹瀉得到了有效控制,病毒已成為引起腹瀉的最常見原因,也越來越受到人們的重視。病毒多具有傳染力強、傳播快、發(fā)病急及病后免疫力不能持久等特點,�？蓪�(dǎo)致較高的發(fā)病率,造成疾病的大流行甚至死亡 引起嬰幼兒腹瀉的病毒主要包括人輪狀病毒(Human Rotavirus, HRV)、人杯狀病毒(Human Calicivirus, HuCV)、腺病毒(Human adenoviruses, AdV)、人類星狀病毒(Human astrovirus, AstV); A組輪狀病毒是世界范圍內(nèi)引起嬰幼兒重癥腹瀉的最常見病原,是目前病毒性腹瀉預(yù)防控制的重點；人杯狀病毒其感染率僅次于輪狀病毒,可引起暴發(fā)流行,常導(dǎo)致突發(fā)性公共衛(wèi)生事件。此外,腺病毒和星狀病毒也能引起腹瀉,其重要性也日益突出。但是還有大約40%的嬰幼兒腹瀉病無法檢出相關(guān)的病原,所以引起腹瀉的其它未知病原(尤其是病毒)也應(yīng)該引起人們重視。 人類博卡病毒(Human Bocavirus, HBoV)是Allander2005年8月對患急性上呼吸道感染的嬰幼兒的呼吸道分泌物樣木進行大規(guī)模篩查時,發(fā)現(xiàn)的一種與已知細小病毒類似的新病毒,由于該病毒的基因序列與牛和犬博卡病毒同源性很高,故命名為人類博卡病毒。HBoV雖然與細小病毒B19之間核苷酸序列同源性很低,但是其基因組特性類似于細小病毒B19。之后世界范圍內(nèi)陸續(xù)有研究報導(dǎo)在糞便、尿液等標本中均有檢出HBoV,2007年Lau SK等首次證實HBoV在我國的存在。 HBoV感染一年四季均可發(fā)生,以冬春季為主,但不同國家報道的季節(jié)特征有所不同。HBoV感染的臨床表現(xiàn)主要為輕度的呼吸道癥狀和消化道癥狀,主要感染2歲以下兒童,特別是嬰幼兒。HBoV在腹瀉標本中陸續(xù)被檢出,檢出率從0.8%到12%,因此,有些學(xué)者認為HBoV不但是呼吸道疾病的致病原,也有可能是胃腸炎的致病原之一；且有研究發(fā)現(xiàn)HBoV是繼輪狀病毒、諾如病毒之后引起腹瀉的第三大病毒。目前國外有不少關(guān)于HBoV在急性胃腸炎患者中的病原學(xué)及流行病學(xué)研究,但是我國卻很少開展相關(guān)研究,且廣州尚缺乏急性胃腸炎患者人博卡病毒的流行病學(xué)特征的數(shù)據(jù)資料。 人雙�？刹《�(Human parechovirus, HPeV)是屬于小RNA病毒科(Picomaviridae)、雙�？刹《緦�(Pareehovirus)的一種無囊膜、無纖突的單分子正鏈RNA病毒,基因組包含7300個核苷酸,在5'端到3'端都有一個非翻譯區(qū)(UTR),有3個結(jié)構(gòu)蛋白(VP1-VP3)和7個非結(jié)構(gòu)蛋白(2A-2C和3A-3D)。 .1956年首次在美國從一名腹瀉患兒的糞便標本中分離獲得,隨后世界范圍內(nèi)多種基因型別的HPeV陸續(xù)從腹瀉糞便標本中分離出來。迄今為止,已經(jīng)有16種HPeV基因型先后被發(fā)現(xiàn),各國研究結(jié)果均提示HPeV在腹瀉患者的糞便標本中普遍存在,而且HPeV感染在兒童尤其是幼童中非常普遍。目前國外有不少關(guān)于HPeV的病原學(xué)及流行病學(xué)研究,而國內(nèi)卻很少開展相關(guān)研究。僅2009年分別在蘭州和上海、2011年在吉林開展過急性腹瀉兒童的人雙�？刹《镜姆肿恿餍胁W(xué)調(diào)查報道,而廣州地區(qū)尚未見相關(guān)報道。HPeV7-16型目前還沒有相關(guān)的流行病學(xué)調(diào)查資料,在世界范圍內(nèi)很少檢測到這些型別,說明它們的感染率可能低于HPeV1,但也不能排除是新近發(fā)現(xiàn)的可能性。 HPeV主要在胃腸道繁殖,引起腹瀉,經(jīng)常伴有呼吸道癥狀,感染在幼童中特別容易流行。HPeV感染后引起的臨床癥狀與感染人腸道病毒后的癥狀相類似,主要引起胃腸道、呼吸道相對溫和的癥狀,也會引起腦膜炎、膿毒癥、心肌炎及弛緩性麻痹等嚴重癥狀。另有研究發(fā)現(xiàn)HPeV與其他腹瀉病毒混合感染的情況,且大部分是與輪狀病毒混合感染,因此開展腹瀉患兒HPeV感染情況的研究,了解HPeV在廣州地區(qū)的流行特點具有重要意義。 我國嬰兒出生率位居世界第二,感染性腹瀉作為兒童常見病、多發(fā)病應(yīng)進行長期連續(xù)系統(tǒng)的監(jiān)測。對HRV、NoV、SaV、AdV和AstV常見腹瀉病毒進行檢測,以了解腹瀉病毒的流行情況,為我國病毒性腹瀉的預(yù)防和控制積累病原學(xué)和分子流行病學(xué)本地資料。同時對廣州哨點醫(yī)院急性腹瀉兒童的HBoV和HPeV進行分子流行病學(xué)調(diào)查,以了解HBoV和HPeV的流行特點和臨床特點,分析其在嬰幼兒腹瀉中的病原學(xué)作用,為其防治提供參考的臨床及流行病學(xué)資料。 研究目的： 1.了解廣州市哨點醫(yī)院2012年7月-2013年6月5歲以內(nèi)腹瀉患兒HRV、NoV、 AdV、AstV和SaV的流行病學(xué)特點,豐富我國南方病毒性腹瀉的相關(guān)資料,為我國腹瀉感染控制提供分子生物學(xué)基礎(chǔ)和流行病學(xué)背景資料。 2.了解廣州地區(qū)HBoV和HPeV在腹瀉患兒的流行情況,掌握廣州市HBoV和HPeV流行病學(xué)和病原學(xué)本底數(shù)據(jù),同時了解病毒性腹瀉HBoV和HPeV的基因型別,探討優(yōu)勢毒株,為HBoV和HPeV感染所致腹瀉的防治提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和理論依據(jù) 研究方法： 1.標本收集：以廣州市某三甲醫(yī)院和某社康醫(yī)院為監(jiān)測哨點醫(yī)院,按監(jiān)測方案要求采集病毒性腹瀉病例糞便標本。共收集2012年7月至2013年6月322份5歲以下腹瀉門診患兒的糞便標本,同時收集患兒的人口學(xué)資料(包括性別,年齡等),臨床表現(xiàn)資料(如腹瀉天數(shù)、發(fā)熱、嘔吐等)。 2.病毒檢測：采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測腹瀉患兒糞便標本中的A組輪狀病毒抗原。對所有糞便標本進行DNA/RNA提取,采用PCR、RT-PCR等方法檢測杯狀病毒、星狀病毒及腺病毒,對陽性標本進行基因測序；采用巢式PCR檢測HBoV,并對陽性標本進行測序；通過逆轉(zhuǎn)錄—巢式PCR檢測HPeV,進而通過基于VP3/VP1區(qū)的巢式PCR擴增片段的測序結(jié)果進行基因分型。應(yīng)用BLAST將測序結(jié)果在GenBank上尋找同源序列,應(yīng)用ClustalW進行多序列對比分析和MEGA5.0軟件構(gòu)建遺傳進化樹,進行基因型別分析,判斷流行優(yōu)勢株。 3.統(tǒng)計分析：數(shù)據(jù)管理采用Epidata3.I進行雙份錄入,運用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計分析,檢驗水準α=0.05。 結(jié)果： 1.2012年7月至2013年6月共收集符合腹瀉診斷標準的糞便標本322份,男女性別比為1.30：1(182/140)；就診者中,年齡最大4.9歲,年齡最小的為0.2月齡,平均年齡28.80±0.72月齡,患兒的性別年齡分布差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=0.903,P=0.367)。 2.(1)322份腹瀉患兒的糞便標本中,126份(39.1%)至少檢出五種常見病毒中的一種。按單一病原統(tǒng)計,輪狀病毒(21.12%,68/22)是最主要的病原,其后依次為諾如病毒(9.63%,31/322)、腺病毒(7.76%,25/322)、星狀病毒(4.35%,14/322)及札幌病毒(1.55%,5/322)。 (2)諾如病毒分型結(jié)果顯示25株屬于諾如病毒GⅡ.4基因型,3株屬于GⅠ.3型,2株GⅡ.6型,1株屬于諾如病毒GⅡ.5基因型；5例札幌病毒感染分別屬于SaV GⅠ.1基因型(2例)、GⅠ.2基因型(2例)和GⅡ.2基因型(1例)。14例星狀病毒感染中,全部為血清型1(AstV1)。25例腺病毒感染以腸道腺病毒AdV41(80%,20/25)為主要流行株,其余為非腸道腺病毒AdV7(16%,4/25)和AdV5(4%,1/25)。 (3)五種病毒檢出者主要集中在2歲以內(nèi)嬰幼兒。輪狀病毒以9月至次年1月為發(fā)病高峰；諾如病毒全年可見散發(fā),但在2012年7月和2013年3月的檢出率較高,札幌病毒分別在9-10月和次年3-4月份檢出；星狀病毒感染在6-9月份有明顯的流行高峰；腺病毒感染呈全年發(fā)病,以2013年8月檢出率最高。 (4)混合感染占4.97%(16/322),以輪狀病毒(75%,12/16)混合感染為主。15例為兩種病毒混合感染,1例為HRV/SaV/AdV三重感染,檢出最高的是輪狀病毒和腺病毒混合感染5例(31.3%,5/16)；把混合感染與輪狀病毒單獨感染病例的臨床癥狀做比較,發(fā)現(xiàn)混合感染并沒有加重患兒的臨床癥狀。 3.2012年7月至2013年6月,322份腹瀉患兒糞便標本中,檢測出人博卡病毒陽性標本31份,陽性率9.63%。感染主要發(fā)生在10-1月份,不同月份之間存在差異,具有統(tǒng)計學(xué)意義�；純褐饕植加�2歲以下(96.8%,30/31)。以HBoV1(54.8%,17/31)和HBoV2(45.2%,14/31)為主要流行株,未檢出HBoV3和]HBoV4。 HBoV與其它常見病毒的混合感染率為45.2%(14/31),尤其是與輪狀病毒的混合感染,有9例與輪狀病毒混合感染,占71.4%。HRV與HBoV混合感染后并沒有加重患兒的臨床癥狀。 4.(1)2012年7月至2013年6月,在322份腹瀉患兒糞便標本中檢出42例HPeV,檢出率為13.04%,HPeV感染存在兩個流行的高峰,分別為7月份(28.2%,11/39)和8月份(28.6%,8/28)。4-12月齡患兒陽性率最高,明顯高于其他年齡段,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(x2=14.134,P=0.015)。小于2歲的患兒占HPeV腹瀉患兒人數(shù)的97.6%(41/42)。測序結(jié)果顯示42份陽性標本中69.0%(29/42)是HPeV1(其中HPeV1A占62.1%,18/29; HPeV1B占37.9%,11/29),其后依次為HPeV6(5例)、HPeV3(2例1、HPeV4(2例)、HPeV8(2例)、HPeV5(1例)和HPeV14型(1例)。 (2)50.0%(21/42)的HPeV陽性標本同時感染了上述五種常見腸道病毒,其中18例為雙重感染,3例為三種病毒共同感染。HRV是混合感染HPeV陽性標本中最常見的病毒(31.0%,13/42)。在HPeV陽性和HPeV陰性的腹瀉患兒中,HRV、NoV、AdV、AstV和SaV的檢出率差異無統(tǒng)計學(xué)意義。比較上述五種病毒單獨感染腹瀉患兒和HPeV與上述病毒混合感染腹瀉患兒的臨床癥狀(嘔吐,發(fā)熱,腹瀉次數(shù)及病程),差異無統(tǒng)計學(xué)意義,表明HPeV感染并不會加重腹瀉患兒的臨床癥狀。 結(jié)論： 1.結(jié)果表明病毒性病原在嬰幼兒腹瀉中占重要地位,輪狀病毒仍然是嬰幼兒病毒性腹瀉的最主要病原,但杯狀病毒、腺病毒和星狀病毒也是本地區(qū)嬰幼兒病毒性腹瀉的重要病原,且不同病毒引起的季節(jié)性高峰有所不同,因此長期連續(xù)的疾病監(jiān)測具有重要意義。 2.諾如病毒、札幌病毒、星狀病毒和腺病毒的基因型別多樣,NoV GII.4型是引起廣州哨點醫(yī)院5歲以內(nèi)嬰幼兒腹瀉的流行株；星狀病毒的主要流行株是AstV1;腺病毒的為AdV41未檢出AdV40；嬰幼兒SaV以GI型為主。 3.廣州哨點醫(yī)院5歲以下兒童糞便標本中博卡病毒陽性率較高,基因型為HBoV1和HBoV2,人博卡病毒與其它病毒混合感染率較高,尤其多見于和輪狀病毒混合感染,但人博卡病毒感染并不影響疾病的嚴重程度。 4.人雙�？刹《靖腥驹趶V州哨點醫(yī)院腹瀉嬰幼兒中普遍存在,檢出率僅次于輪狀病毒,HPeV1是廣州哨點醫(yī)院2012-2013年的主要流行型別和致病型別,主要是HPeV1A,首次在中國檢測出一株人雙�？刹《净蛐�14(HPeV14)。人雙�？刹《九c其它病毒混合感染率較高,尤其是和輪狀病毒混合感染；五種病毒單獨感染腹瀉患兒和HPeV混合感染腹瀉患兒的臨床癥狀比較,表明HPeV感染并不會加重腹瀉患兒的臨床癥狀。但是HPeV在嬰幼兒腹瀉糞便標本中的高檢出率,應(yīng)引起人們關(guān)注。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R725.1

【參考文獻】

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本文編號：2467162