【摘要】：目的觀察酸敏感離子通道(acid-sensing ion channels,ASICs)在過(guò)敏性紫癜(Henoch-Schonlein purpura,HSP)患兒腎組織中的表達(dá)及細(xì)胞外酸化誘導(dǎo)ASICs在人腎小管上皮細(xì)胞表達(dá)情況,探討其在過(guò)敏性紫癜患兒腎損傷中的作用,進(jìn)一步闡明藥物阻斷ASICs可能是治療過(guò)敏性紫癜患兒腎損傷的新靶點(diǎn)。方法1.選取2013年1月—2015年1月在安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院兒科和腎內(nèi)科做腎穿的紫癜性腎炎(Henoch-Schonlein purpura nephritis,HSPN)患兒13例,其中男性6例,女性7例,發(fā)病年齡為5歲2個(gè)月~13歲4個(gè)月,在腎穿后收集其腎活檢組織。對(duì)照組7例,為單純腎病綜合征患兒,其中男性3例,女性4例,發(fā)病年齡為4歲3個(gè)月~14歲1個(gè)月,收集其正常腎組織活檢,按照免疫組化試劑盒操作方法檢測(cè)ASICs在HSPN及單純腎病綜合征患兒腎組織中的表達(dá)情況,同時(shí)將HSPN患兒24 h尿蛋白定量與腎組織中ASICs的表達(dá)量做相關(guān)性分析,另外將HSPN患兒根據(jù)尿系列蛋白檢查αl-MG是否異常分為正常組和異常組,根據(jù)β2-MG是否異常也分為正常組和異常組,觀察ASICs在其兩組HSPN患兒腎小管中的表達(dá)情況。2.以人腎小管上皮細(xì)胞(Human kidney tubular epithelial cell,HKC)作為研究對(duì)象,將腎小管上皮細(xì)胞分別在pH7.4(對(duì)照組)、pH7.0、pH6.5、pH6.0、pH5.5不同的胞外環(huán)境下培養(yǎng)3h,經(jīng)處理后,然后在正常培養(yǎng)基條件下培養(yǎng)4h,用western blot法測(cè)定不同酸刺激下腎小管上皮細(xì)胞ASICs的表達(dá);腎小管上皮細(xì)胞分組如下:pH 7.4(正常組),pH6.5(對(duì)照組),pH6.5+Amiloride(終濃度100umol/L)、pH6.5+Pc Tx-1(終濃度100ng/ml),各組于給藥30min后,在pH6.5的培養(yǎng)基共培養(yǎng)3h,然后在pH7.4的正常培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)4h,收集細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)30min后,用western blot法測(cè)定Keratins(K7、K18、K19)蛋白的表達(dá)。結(jié)果1.ASICs在HSPN患兒腎組織中的表達(dá)免疫組化結(jié)果顯示HSPN組ASIC1a、ASIC2a、ASIC3在腎組織中的表達(dá)明顯高于對(duì)照組(P0.01),且主要表達(dá)于腎小管;2.ASICs在不同蛋白尿HSPN患兒腎小管中的表達(dá)情況HSPN患兒腎小管上的表達(dá)量與24 h尿蛋白定量呈正相關(guān)(r=0.644,P=0.017)。ASIC3在αl-MG異常組和β2-MG異常組中的表達(dá)較正常組顯著增多(P0.01),ASIC2a在αl-MG異常組中的表達(dá)較正常組增多(P0.05);3.不同酸刺激下腎小管上皮細(xì)胞ASICs的表達(dá)情況ASIC1a、ASIC2a、ASIC3在pH7.0、pH6.5、pH6.0、pH5.5中腎小管上皮細(xì)胞的表達(dá)較pH7.4(對(duì)照組)明顯增多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4.Keratins(K7、K18、K19)蛋白的表達(dá)Keratins(K7、K18和K19)蛋白在pH6.5組較pH7.4組在腎小管上皮細(xì)胞的表達(dá)明顯增多(P0.01),K18在pH6.5+Amiloride(終濃度100umol/L)組及pH6.5+Pc Tx-1(終濃度100ng/ml)組較pH6.5組在腎小管上皮細(xì)胞的表達(dá)減少(P0.05),K7,K19在pH6.5+Amiloride(終濃度100umol/L)組及pH6.5+Pc Tx-1(終濃度100ng/ml)組較pH6.5組在腎小管上皮細(xì)胞的表達(dá)明顯減少(P0.01)。結(jié)論在HSPN患者的腎組織中存在ASICs高表達(dá),尤其在腎小管中。ASICs與HSPN患兒蛋白尿,尤其是微量蛋白尿的產(chǎn)生可能存在一定關(guān)系。細(xì)胞外酸化誘導(dǎo)下人腎小管上皮細(xì)胞ASICs和腎小管上皮細(xì)胞損傷蛋白Keratins(K7、K18、K19)蛋白表達(dá)明顯增多。阻斷ASICs可以減少Keratins(K7、K18和K19)蛋白的表達(dá),提示ASICs阻滯劑可以減輕或阻斷腎損傷的發(fā)生。
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【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R726.9
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本文編號(hào)：2261813