本文選題：肺炎支原體 + 聚合酶鏈反應(yīng)��； 參考：《天津醫(yī)科大學(xué)》2013年碩士論文

【摘要】：目的： 通過(guò)對(duì)住院肺炎患兒的肺泡灌洗液(BALF)和靜脈血標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)分析,了解肺炎患兒中肺炎支原體(MP)的感染情況、流行病學(xué)特征及其基因分型特點(diǎn),探討出兒童MP早期感染的快速診斷方法。同時(shí)了解本地區(qū)住院MP肺炎患兒耐大環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥物情況及主要的耐藥機(jī)制,為以后臨床選擇合理的抗生素提供理論依據(jù)。 方法： 1.收集天津市兒童醫(yī)院2010年10月至2011年11月確診為肺炎的住院患兒BALF標(biāo)本220份,同時(shí)在入院當(dāng)天或次日清晨收集其靜脈血通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA法)檢測(cè)MP的IgM抗體；對(duì)220份BALF標(biāo)本,提取DNA,采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)對(duì)其進(jìn)行MP病原檢測(cè),并隨機(jī)抽取75份標(biāo)本進(jìn)行熒光定量PCR檢測(cè)驗(yàn)證其結(jié)果的準(zhǔn)確性。 2.隨機(jī)抽取部分陽(yáng)性BALF標(biāo)本用HaeⅡ和HaeⅢ兩種限制性內(nèi)切酶進(jìn)行酶切反應(yīng),并用標(biāo)準(zhǔn)株M129作比,對(duì)其陽(yáng)性標(biāo)本作出基因分型。同時(shí)隨機(jī)選取幾份陽(yáng)性標(biāo)本的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序證實(shí)上述分型研究的準(zhǔn)確性。 3.從檢測(cè)陽(yáng)性的BALF標(biāo)本中按每月隨機(jī)抽取3-5份共50份進(jìn)行巢式PCR反應(yīng),電泳,在紫外燈下切膠純化回收產(chǎn)物并送去測(cè)序,測(cè)序結(jié)果與NCBI已登錄的MP標(biāo)準(zhǔn)株M12923SrRNA基因(序列號(hào)為X68422)作對(duì)比,觀察其有無(wú)耐藥基因位點(diǎn)的突變。 結(jié)果： 1.220例住院肺炎患兒血清學(xué)MP-IgM抗體檢測(cè)中,有92例陽(yáng)性,陽(yáng)性率為41.8%(92/220)；BALF的PCR檢測(cè)中,陽(yáng)性標(biāo)本121份,陽(yáng)性率為55%(121/220)；其中女性患兒陽(yáng)性率61.22%(60/98),男性50%(61/122),經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,兩者無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=2.77,P0.05)；學(xué)齡前期和學(xué)齡期兒童的陽(yáng)性率為63.52%(101/159),明顯高于嬰幼兒(32.79%),經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,兩者有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=16.827,P0.05甚至0.005)；春秋季的陽(yáng)性率高于冬夏季節(jié),但經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,這四季間陽(yáng)性率無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=2.28,P0.05)。 2.隨機(jī)挑選的75份標(biāo)本進(jìn)行了熒光定量PCR檢測(cè),其中陽(yáng)性結(jié)果44份,陽(yáng)性率為58.67%(44/75)。通過(guò)分析發(fā)現(xiàn),這75份標(biāo)本用血清學(xué)檢測(cè)陽(yáng)性結(jié)果30份,陽(yáng)性率為40%(30/57)；普通PCR檢測(cè)陽(yáng)性結(jié)果39份,陽(yáng)性率為52%(39/75),血清學(xué)檢測(cè)的陽(yáng)性率低于普通PCR和熒光定量PCR,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,這兩者均具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=4.76,P0.05和χ2=7.68,P0.05)；普通PCR的陽(yáng)性率低于熒光定量PCR,但經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,兩者無(wú)明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=1.78,P0.05)。 3.隨機(jī)抽取的60份陽(yáng)性標(biāo)本經(jīng)過(guò)酶切反應(yīng)后酶切圖譜與標(biāo)準(zhǔn)株M129完全一致,均顯示為P1-Ⅰ型,3份測(cè)序結(jié)果也證實(shí)其為P1-Ⅰ型。未發(fā)現(xiàn)不同的型別情況。 4.50份測(cè)序結(jié)果顯示,其中4份和標(biāo)準(zhǔn)株的測(cè)序結(jié)果與NCBI已登錄的MP標(biāo)準(zhǔn)株M12923SrRNA基因序列一致,其余46份均出現(xiàn)2063位A→G突變,未見其他位點(diǎn)的突變,耐藥率為92%(46/50)。 結(jié)論： 1.MP是住院肺炎患兒的重要病原,無(wú)明顯的性別差異和季節(jié)差異,但有較明顯的年齡特征,好發(fā)于學(xué)齡前期兒童和學(xué)齡期兒童。 2.普通PCR檢測(cè)MP特異性強(qiáng)、靈敏度高、快速簡(jiǎn)便、成本低,可作為MP早期快速診斷的檢測(cè)手段。 3.天津地區(qū)MP流行株以P1-Ⅰ型為主。 4.天津地區(qū)MP耐大環(huán)內(nèi)酯類藥物現(xiàn)狀嚴(yán)重,其主要的耐藥機(jī)制為23SrRNA V區(qū)產(chǎn)生A2063G點(diǎn)突變。
[Abstract]:Purpose :

The infection status , epidemiological characteristics and genotyping characteristics of mycoplasma pneumoniae ( MP ) in children with pneumonia were analyzed by detecting the pulmonary alveolar lavage fluid ( BALF ) and venous blood samples in hospitalized children with pneumonia .

Method :

1 . We collected 220 hospitalized children with pneumonia diagnosed as pneumonia in Tianjin Children ' s Hospital from October 2010 to November 2011 , and collected the IgM antibody of MP by enzyme linked immunosorbent assay ( ELISA ) at the same time on the day of admission or early morning .
For 220 BALF samples , DNA was extracted , MP pathogen detection was carried out by polymerase chain reaction ( PCR ) , and 75 samples were randomly sampled for fluorescence quantitative PCR to verify the accuracy of the results .

2 . The positive BALF samples were digested with Hae II and Hae 鈪，

本文編號(hào)：1960996