發(fā)布時間：2018-05-31 19:23

  本文選題：肺炎支原體 + 聚合酶鏈反應�。� 參考：《天津醫(yī)科大學》2013年碩士論文

【摘要】：目的： 通過對住院肺炎患兒的肺泡灌洗液(BALF)和靜脈血標本進行檢測分析,了解肺炎患兒中肺炎支原體(MP)的感染情況、流行病學特征及其基因分型特點,探討出兒童MP早期感染的快速診斷方法。同時了解本地區(qū)住院MP肺炎患兒耐大環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥物情況及主要的耐藥機制,為以后臨床選擇合理的抗生素提供理論依據(jù)。 方法： 1.收集天津市兒童醫(yī)院2010年10月至2011年11月確診為肺炎的住院患兒BALF標本220份,同時在入院當天或次日清晨收集其靜脈血通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA法)檢測MP的IgM抗體；對220份BALF標本,提取DNA,采用聚合酶鏈反應(PCR)對其進行MP病原檢測,并隨機抽取75份標本進行熒光定量PCR檢測驗證其結(jié)果的準確性。 2.隨機抽取部分陽性BALF標本用HaeⅡ和HaeⅢ兩種限制性內(nèi)切酶進行酶切反應,并用標準株M129作比,對其陽性標本作出基因分型。同時隨機選取幾份陽性標本的擴增產(chǎn)物進行測序證實上述分型研究的準確性。 3.從檢測陽性的BALF標本中按每月隨機抽取3-5份共50份進行巢式PCR反應,電泳,在紫外燈下切膠純化回收產(chǎn)物并送去測序,測序結(jié)果與NCBI已登錄的MP標準株M12923SrRNA基因(序列號為X68422)作對比,觀察其有無耐藥基因位點的突變。 結(jié)果： 1.220例住院肺炎患兒血清學MP-IgM抗體檢測中,有92例陽性,陽性率為41.8%(92/220)；BALF的PCR檢測中,陽性標本121份,陽性率為55%(121/220)；其中女性患兒陽性率61.22%(60/98),男性50%(61/122),經(jīng)統(tǒng)計學分析,兩者無明顯統(tǒng)計學差異(χ2=2.77,P0.05)；學齡前期和學齡期兒童的陽性率為63.52%(101/159),明顯高于嬰幼兒(32.79%),經(jīng)統(tǒng)計學分析,兩者有明顯的統(tǒng)計學差異(χ2=16.827,P0.05甚至0.005)；春秋季的陽性率高于冬夏季節(jié),但經(jīng)統(tǒng)計學分析,這四季間陽性率無明顯統(tǒng)計學差異(χ2=2.28,P0.05)。 2.隨機挑選的75份標本進行了熒光定量PCR檢測,其中陽性結(jié)果44份,陽性率為58.67%(44/75)。通過分析發(fā)現(xiàn),這75份標本用血清學檢測陽性結(jié)果30份,陽性率為40%(30/57)；普通PCR檢測陽性結(jié)果39份,陽性率為52%(39/75),血清學檢測的陽性率低于普通PCR和熒光定量PCR,經(jīng)統(tǒng)計學分析,這兩者均具有明顯的統(tǒng)計學差異(χ2=4.76,P0.05和χ2=7.68,P0.05)；普通PCR的陽性率低于熒光定量PCR,但經(jīng)統(tǒng)計學分析,兩者無明顯的統(tǒng)計學差異(χ2=1.78,P0.05)。 3.隨機抽取的60份陽性標本經(jīng)過酶切反應后酶切圖譜與標準株M129完全一致,均顯示為P1-Ⅰ型,3份測序結(jié)果也證實其為P1-Ⅰ型。未發(fā)現(xiàn)不同的型別情況。 4.50份測序結(jié)果顯示,其中4份和標準株的測序結(jié)果與NCBI已登錄的MP標準株M12923SrRNA基因序列一致,其余46份均出現(xiàn)2063位A→G突變,未見其他位點的突變,耐藥率為92%(46/50)。 結(jié)論： 1.MP是住院肺炎患兒的重要病原,無明顯的性別差異和季節(jié)差異,但有較明顯的年齡特征,好發(fā)于學齡前期兒童和學齡期兒童。 2.普通PCR檢測MP特異性強、靈敏度高、快速簡便、成本低,可作為MP早期快速診斷的檢測手段。 3.天津地區(qū)MP流行株以P1-Ⅰ型為主。 4.天津地區(qū)MP耐大環(huán)內(nèi)酯類藥物現(xiàn)狀嚴重,其主要的耐藥機制為23SrRNA V區(qū)產(chǎn)生A2063G點突變。
[Abstract]:Purpose :

The infection status , epidemiological characteristics and genotyping characteristics of mycoplasma pneumoniae ( MP ) in children with pneumonia were analyzed by detecting the pulmonary alveolar lavage fluid ( BALF ) and venous blood samples in hospitalized children with pneumonia .

Method :

1 . We collected 220 hospitalized children with pneumonia diagnosed as pneumonia in Tianjin Children ' s Hospital from October 2010 to November 2011 , and collected the IgM antibody of MP by enzyme linked immunosorbent assay ( ELISA ) at the same time on the day of admission or early morning .
For 220 BALF samples , DNA was extracted , MP pathogen detection was carried out by polymerase chain reaction ( PCR ) , and 75 samples were randomly sampled for fluorescence quantitative PCR to verify the accuracy of the results .

2 . The positive BALF samples were digested with Hae II and Hae 鈪，

本文編號：1960996