本文選題：支氣管肺發(fā)育不良 + 人重組Elafin�。� 參考：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：目的:探討人重組Elafin對(duì)慢性高氧致新生小鼠支氣管肺發(fā)育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)的保護(hù)作用及作用機(jī)制。方法:新生24h內(nèi)的C57BL/6J小鼠隨機(jī)分3組:空氣對(duì)照組,高氧+L/R組(L/R:lactated-ringer solution,乳酸鈉林格液,為安慰劑),高氧+Elafin組。高氧+L/R組、高氧+Elafin組予以85%慢性高氧暴露,空氣組置于同一室內(nèi)空氣中。高氧+Elafin組高氧暴露前30min給予Elafin 8ng/μl,5μl/g腹腔注射,每日1次,高氧+L/R組給予等量的L/R。于第1、3、7、14、21d采集肺組織,收集BALF行蛋白濃度測(cè)定和細(xì)胞分類計(jì)數(shù)評(píng)估氣道炎癥,運(yùn)用HE染色、肺泡平均截距(mean linear intercept,MLI)、放射狀肺泡計(jì)數(shù)(radical alveolar counts,RAC)觀察肺組織形態(tài)學(xué)改變,彈性纖維染色觀察彈性纖維表達(dá)情況,DQ-彈性蛋白底物法檢測(cè)彈性蛋白酶(neutrophil elastase,NE)活性,免疫組化(IHC)測(cè)定彈性蛋白(elastin)表達(dá),分別用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)及Western Blot檢測(cè)NE、IL-1β、Tropoelastin、Fibulin-5的mRNA及蛋白表達(dá)變化,透射電鏡觀察彈性蛋白微觀結(jié)構(gòu)。結(jié)果:與空氣組比較,高氧+L/R組可見炎性浸潤(rùn)、間質(zhì)水腫,次級(jí)脊3d時(shí)開始減少,14d、21d減少顯著(P0.01),MLI增加,RAC減少,肺泡發(fā)育受阻,BALF蛋白濃度增高,細(xì)胞總數(shù)及中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)增高,肺組織NE活性1d時(shí)即升高,后續(xù)各時(shí)間點(diǎn)均高于空氣組,且1d、3d升高最為顯著(P0.01),Elastin和Fibulin-5表達(dá)增多,無(wú)序沉積于肺泡間隔,NE、IL-1β、Tropoelastin、Fibulin-5 mRNA及蛋白表達(dá)在14d、21d時(shí)較空氣組不同程度增加。與高氧+L/R組相比,Elafin干預(yù)組肺組織炎性浸潤(rùn)及間質(zhì)水腫減輕,次級(jí)脊逐漸恢復(fù),14d時(shí)肺泡發(fā)育明顯改善,BALF蛋白濃度、細(xì)胞總數(shù)及中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)減少,肺組織NE活性受到抑制,14d時(shí)NE活性減少顯著(P0.05);Elastin和Fibulin-5表達(dá)減弱,且主要集中于次級(jí)脊處;NE、IL-1β、Tropoelastin、Fibulin-5 mRNA的mRNA及蛋白表達(dá)均不同程度減少。結(jié)論:BPD的發(fā)生與NE活性增高有關(guān),人重組Elafin對(duì)慢性高氧致支氣管肺發(fā)育不良具有保護(hù)作用,其作用可能通過(guò)減少炎癥浸潤(rùn)抑制NE活性、減少Elastin及其相關(guān)蛋白過(guò)度沉積,阻斷彈性蛋白平衡紊亂體系而實(shí)現(xiàn)。
[Abstract]:Objective: to investigate the protective effect and mechanism of recombinant human Elafin on bronchopulmonary dysplasia (BPDs) in neonatal mice induced by chronic hyperoxia. Methods: C57BL/6J mice within 24 hours were randomly divided into three groups: air control group, hyperoxic L / R group, L / R% lactated-ringer solution, sodium lactate Ringer solution, placebo and hyperoxic Elafin group. Hyperoxia L / R group and hyperoxia Elafin group were exposed to 85% chronic hyperoxia, and the air group was placed in the same indoor air. Before hyperoxia exposure, 30min was injected intraperitoneally with Elafin 8ng/ 渭 l 5 渭 l / g, once a day, and the same amount of L / R was given to hyperoxia L / R group before hyperoxia exposure. Lung tissues were collected on day 1, 1, 3, 7, 7, 14, 21, and BALF were collected to determine the concentration of histopathologic proteins and to evaluate airway inflammation. The morphological changes of lung tissue were observed by HE staining, mean alveolar mean linear interceptance MLI, radial alveolar count and radial alveolar count. The expression of elastotrophil elastase was detected by DQ- elastoprotein substrate method, and the expression of elastin was detected by immunohistochemistry (IHC). The expression of mRNA and protein were detected by real-time fluorescence quantitative PCR RT-PCR and Western Blot, respectively. The microstructure of elastin was observed by transmission electron microscope. Results: compared with the air group, inflammatory infiltration and interstitial edema were observed in the hyperoxia L / R group. The number of cells and the neutrophil count in the hyperoxia L / R group were increased, the number of cells and neutrophils were increased, the increase of RAC, the concentration of BALF protein and the number of neutrophils began to decrease at 14 days and 21 days after the onset of hyperoxia in the L / R group. The activity of NE in lung tissue increased on day 1, and was higher than that in air group at the following time points, and the expression of Elastin and Fibulin-5 in lung tissue increased most significantly on day 1 and day 3, and the expression of mRNA and protein increased in different degrees at day 21 compared with that in group of air at day 14 and day 21 after the deposition of NEIL-1 尾 and Trobulin-5 in alveolar septum. Compared with the hyperoxia L / R group, the inflammatory infiltration and interstitial edema of lung tissue in the Elafin intervention group decreased, and the alveolar development significantly improved the BALF protein concentration, the total number of cells and the neutrophil count at 14 days after the restoration of the secondary ridge. After 14 days of inhibition of NE activity in lung tissue, NE activity decreased significantly (P 0.05) and the expression of Elastin and Fibulin-5 decreased significantly, and the expression of mRNA and protein mainly concentrated in the secondary ridge of nebulin 1 尾 tropoelastin 5 mRNA. Conclusion the occurrence of BPD is related to the increase of NE activity. Human recombinant Elafin has a protective effect on chronic hyperoxia-induced bronchopulmonary dysplasia, which may inhibit NE activity and reduce the excessive deposition of Elastin and its related proteins by reducing inflammatory infiltration. Blockage of elastin homeostasis system is achieved.
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R722.1

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本文編號(hào)：1888317