本文選題：肺炎鏈球菌腦膜炎 + 金屬基質(zhì)蛋白酶-9��； 參考：《蘇州大學》2012年碩士論文

【摘要】：目的：細菌性腦膜炎是兒童期最常見的神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病之一,其確切免疫病理機制尚待進一步確定。金屬基質(zhì)蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9, MMP-9)在血腦屏障的損害過程中發(fā)揮了重要作用。B7同源性3(B7homology3, B7-H3),作為協(xié)同刺激分子家族的一個新成員,在免疫應答中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。本研究通過體內(nèi)外實驗,系統(tǒng)分析B7-H3對肺炎鏈球菌腦膜炎MMP-9蛋白的表達和病情進展的作用,以期為細菌性腦膜炎的免疫干預提供新的思路和實驗依據(jù)。 方法： 方法一(體內(nèi)實驗),研究B7-H3對肺炎鏈球菌腦膜炎小鼠神經(jīng)行為改變、體質(zhì)量變化和腦組織MMP-9蛋白表達的影響。取月齡1.5-2月的健康雄性BALB/c小鼠36只,隨機分為3組：生理鹽水對照組(CON組),肺炎鏈球菌組(Streptococcus pneumonia,SP組),肺炎鏈球菌+B7-H3(SP+B7-H3組),每組各12只。麻醉后,通過側(cè)腦室途徑注入肺炎鏈球菌懸液5μL+生理鹽水10μL,制備肺炎鏈球菌腦膜炎模型；SP+B7-H3組注入肺炎鏈球菌懸液5μL和B7-H3蛋白10μL, CON組僅注入生理鹽水15μL。三組小鼠均在術后6h、24h進行1)體質(zhì)量變化觀測；2)神經(jīng)行為評估；3)HE染色方法觀察腦組織炎癥狀況；4)免疫組織化學方法檢測腦組織中MMP-9蛋白的表達。 方法二(體外實驗),研究B7-H3對肺炎鏈球菌感染條件下小膠質(zhì)細胞上清液MMP-9蛋白表達的影響。生后1-3天內(nèi)的新生BALB/C小鼠,取其腦組織,經(jīng)過分離、培養(yǎng)、純化獲得原代小膠質(zhì)細胞,接種于24孔培養(yǎng)板,細胞密度：1×105/孔。實驗分組：正常對照組(CON組)、肺炎鏈球菌感染組(SP組)、肺炎鏈球菌+B7-H3組(SP+B7-H3組),三組細胞中均加入等量的頭孢曲松(濃度為100μg·mL-1)抑制細菌過度繁殖。分別在5h、24h、48h收集上清液,用ELISA方法檢測上清液中MMP-9蛋白的表達。每次實驗,每組每個時間點設3個復孔,并重復兩次獨立的實驗。 結(jié)果： 結(jié)果一(體內(nèi)實驗), 1、神經(jīng)行為評分：SP組在6h、24h時神經(jīng)行為評分均較CON組明顯降低(P0.01);SP+B7-H3組在6h、24h時神經(jīng)行為評分明顯低于SP組(P0.05)。 2、體質(zhì)量變化：SP組在6h、24h時體質(zhì)量下降均較CON組明顯(P值分別為P0.01.P0.05);SP+B7-H3組在6h、24h時體質(zhì)量均較SP組明顯降低(P0.05)。 3、腦組織HE染色：6h時,相對于組,SP組小鼠軟腦膜血管充血明顯,蛛網(wǎng)膜下腔顯著擴張,腦膜及蛛網(wǎng)膜下腔有少許炎性細胞浸潤；24h時,相對于SP組,SP+B7-H3組小鼠軟腦膜血管充血顯著,蛛網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)完整性受損,蛛網(wǎng)膜下腔開放,腦膜及蛛網(wǎng)膜下腔炎性細胞浸潤加劇。 4、腦組織免疫組化分析：CON組于6h、24h時均有少量MMP-9蛋白表達；SP組在6h、24h時與CON組比較MMP-9蛋白的表達均顯著增高(P0.01)；SP+B7-H3組在6h、24h時與SP組比較MMP-9蛋白的表達均明顯增高(P0.05)。 結(jié)果二(體外實驗),SP組在5h、24h、48h時MMP-9蛋白的表達均明顯高于CON組(P0.05)；SP+B7-H3組在5h、24h、48h時與SP組比較,MMP-9蛋白的表達均顯著增高(P值分別為P0.01、P0.05、P0.05)。 結(jié)論： 1、本實驗經(jīng)側(cè)腦室接種肺炎鏈球菌,成功建立了肺炎鏈球菌腦膜炎小鼠模型。 2、體內(nèi)外實驗證實,MMP-9蛋白在肺炎鏈球菌腦膜炎病理損傷和免疫反應過程中發(fā)揮了重要作用。 3、B7-H3加劇肺炎鏈球菌腦膜炎病情的進展,促進腦組織炎癥反應,上調(diào)腦組織MMP-9蛋白的表達,表明B7-H3增強肺炎鏈球菌腦膜炎免疫炎癥反應和病理損傷。
[Abstract]:Objective: bacterial meningitis is one of the most common infective diseases in childhood, and its exact mechanism of immuno pathology remains to be further confirmed. Metal matrix protease -9 (matrix metalloproteinases-9, MMP-9) plays an important role in the damage process of the blood brain barrier,.B7 homology 3 (B7homology3, B7-H3), as a synergistic stimulus. A new member of the molecular family plays an important regulatory role in the immune response. In this study, the effect of B7-H3 on the expression and progression of MMP-9 protein in Streptococcus pneumoniae meningitis was systematically analyzed in vivo and in vitro, so as to provide new ideas and experimental basis for the immune intervention of bacterial meningitis.
Method錛，

本文編號：1840849