本文選題：甘油激酶　切入點：核孤兒受　出處：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2013年碩士論文

【摘要】：前期研究發(fā)現(xiàn)，糖脂代謝關(guān)鍵酶甘油激酶GK與核孤兒受體NR4A1存在蛋白質(zhì)相互作用，并通過相互作用抑制NR4A1的轉(zhuǎn)錄活性以及糖脂代謝相關(guān)靶基因的激活，提示GK/NR4A1相互作用參與肝臟糖脂代謝調(diào)控。本課題應(yīng)用小鼠活體轉(zhuǎn)染和轉(zhuǎn)基因動物，進一步研究GK-NR4A1相互作用對小鼠肝臟糖脂代謝的影響以及相關(guān)的調(diào)控機制。 我們首先應(yīng)用NR4A1基因敲除鼠研究了NR4A1對糖脂代謝的影響。在對NR4A1基因敲除鼠進行饑餓或高脂高糖飼養(yǎng)后，進行葡萄糖耐受、丙酮酸耐受、胰島素耐受實驗，并檢測血糖和血脂水平，應(yīng)用ELISA方法測定血清胰島素及胰高血糖素，進行肝組織切片糖原PAS染色。結(jié)果顯示在饑餓18小時后，NR4A1敲除鼠與對照鼠相比，糖異生能力減弱，脂肪分解加快，體重下降快，糖原儲備少（P0.05)，胰島素下降，胰高血糖素上升。而在高脂高糖飼養(yǎng)16周后，NR4A1敲除鼠表現(xiàn)為體態(tài)肥胖，與對照組小鼠相比，體重增加、血糖增加、血脂增加、脂肪肝明顯，且具有更明顯的胰島素抵抗傾向，NR4A1敲除鼠糖代謝基因代謝Eno3、G6pase的基因表達分別降低62%和56%；而脂肪代謝基因Srebp-1c、Fas等基因的表達則分別升高79%和40%。結(jié)果表明，在小鼠體內(nèi)NR4A1缺失后，無論在饑餓狀態(tài)還是經(jīng)過高脂高糖飼養(yǎng)，肝臟糖脂代謝均發(fā)生紊亂，提示NR4A1參與肝臟代謝穩(wěn)態(tài)調(diào)控。 隨后,我們應(yīng)用NR4A1基因敲除鼠和內(nèi)源性NR4A1高表達的糖尿病模型（包括STZ I型糖尿病鼠和db/db II型糖尿病鼠，，結(jié)合體內(nèi)轉(zhuǎn)染載體過表達技術(shù)，研究了GK-NR4A1相互作用對小鼠肝臟糖脂代謝基因表達、肝糖異生能力、肝糖原儲備、血糖血脂及胰島素水平的影響。結(jié)果顯示，①在NR4A1過表達鼠、STZI型糖尿病鼠及db/db II型糖尿病鼠中，NR4A1表達均升高，同時糖代謝相關(guān)基因如ENO3的表達分別上升32%、25%和25%；在此基礎(chǔ)上過表達GK則下調(diào)ENO3基因的表達；②另一方面，在NR4A1野生鼠過表達GK下調(diào)糖代謝基因表達，在NR4A1敲除鼠中過表達GK則上調(diào)糖代謝基因表達，在敲除鼠中過表達無激酶活性GK突變體后，糖代謝基因表達則回落至對照組水平，提示在肝臟中GK通過激酶活性促進而通過與NR4A1相互作用抑制糖代謝基因的表達；③與糖代謝基因的變化相反，脂代謝基因在NR4A1高表達時表達下調(diào)，轉(zhuǎn)染GK后則表達上調(diào)；在野生鼠中過表達GK上調(diào)脂代謝基因表達，在NR4A1敲除鼠中GK則下調(diào)脂代謝基因表達，而過表達無酶活性GK突變體使部分脂代謝基因表達回升至對照水平,但另外一些基因表達卻沒有明顯回升，提示GK還可能通過其它方式參與代謝調(diào)節(jié)。 與基因表達類似，NR4A1野生鼠過表達GK還導(dǎo)致血糖下降、血脂上升，糖原分解加快，胰島素的變化趨勢與血糖變化相似；而在NR4A1敲除鼠中則無明顯變化趨勢，這一結(jié)果進一步表明NR4A1參與GK對肝臟糖脂代謝的調(diào)控。 上述研究揭示了在肝臟中GK不僅通過激酶活性直接參與糖脂代謝的調(diào)節(jié)，GK還通過與NR4A1相互作用間接參與糖脂代謝的調(diào)節(jié)，抑制NR4A1對糖脂代謝的調(diào)控，增強糖原分解、抑制糖異生過程，并反饋調(diào)節(jié)胰島素和胰高血糖素的分泌，對維持機體正常的血糖血脂平衡起重要作用。
[Abstract]:In this study , the interaction of GK - NR4A1 and GK - NR4A1 on hepatic glycolipid metabolism in mice was investigated .

The effects of NR4A1 on glycolipid metabolism were studied by using NR4A1 knockout mice . Glucose tolerance , pyruvic acid tolerance , insulin tolerance test were carried out after the NR4A1 knockout mice were fed with starvation or high fat and high glucose .
The results showed that NR4A1 was involved in the steady regulation of hepatic metabolism .

The effects of GK - NR4A1 interaction on hepatic glycolipid metabolism gene expression , hepatic glycogen storage , glycogen storage , blood glucose and insulin levels in mice were studied by using NR4A1 knockout mice and endogenous NR4A1 . The results showed that 鈶

本文編號：1709396