本文選題：免疫性血小板減少癥　切入點：表面增強激光解吸/離子化飛行時聞質(zhì)譜　出處：《瀘州醫(yī)學院》2012年碩士論文

【摘要】：研究背景與目的：免疫性血小板減少癥(ITP)是一種免疫介導的血小板減少綜合征,是兒童最為常見的出血性疾病。迄今,ITP的發(fā)病機制尚未完全明了,ITP時血小板功能究竟如何、血小板是否處于激活狀態(tài)等,目前并無定論。目前對ITP的診斷依然是“排除診斷法”,臨床上診斷主要靠外周血小板減少但其無特異性；抗血小板自身抗體(PAIgG)的檢測對于ITP的診斷有限,盡管對其檢測的敏感性和特異性有所提高,但仍然無法將“原發(fā)免疫性血小板減少癥”與“繼發(fā)性免疫性血小板減少癥”區(qū)分開來。因此,以血小板為基礎,研究血小板表達的特殊蛋白質(zhì),分析其功能變化在ITP發(fā)病中的作用,對闡明ITP的發(fā)病機制具有重要意義。表而增強激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜(surface enhanced laser desorption/ionization-time of flight-mass spectrometry, SELDI-TOF-MS)技術(shù)是近年發(fā)展起來的一種蛋白組學研究方法。它可對血清、細胞裂解液等生物樣品直接進行檢測,能基本反映被檢樣本中蛋白質(zhì)的全貌,進而可以發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)的變化,為早期診斷、預后估計、復發(fā)或轉(zhuǎn)移的監(jiān)測提供了可能。本研究旨在利用Ciphergen公司的蛋白質(zhì)芯片飛行于時間質(zhì)譜儀系統(tǒng)結(jié)合蛋白芯片對ITP, ITP治療組及正�；純貉“宀町惐磉_蛋白進行分析,篩選與ITP相關(guān)的血小板蛋白質(zhì)標志物,在血小板蛋白質(zhì)組水平探討ITP的發(fā)病機制。探討建立可用于ITP早期診斷的分類模型。方法：采用SELDI (surface enhanced laser desorption/ionization, SELDI)蛋白芯片技術(shù),檢測40例ITP患兒、40例ITP治療組患兒及35例正常兒童血小板進而獲得血小板蛋白質(zhì)圖譜圖,將獲得的蛋白質(zhì)譜圖用Ciphergen公司的Biomarker Wizard和Biomarker Pattern軟件分析,通過交叉驗證建立起ITP早期診斷的分類樹模型,,并另將含有40例ITP患兒和35例正常兒童的驗證組共75例對此模型進行盲法驗證。蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)庫查詢差異蛋白,篩選與ITP相關(guān)的血小板蛋白質(zhì)。結(jié)果：1,在分子質(zhì)量／電荷比值(質(zhì)荷比,mass electron ratio, M/Z)為2000—20000范圍內(nèi),對40例ITP患兒及35例正常兒童血小板蛋白進行分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)共有22個蛋白表達量存在統(tǒng)計學差異(P0.01),1個蛋白峰表達上調(diào),21個蛋白峰表達下調(diào),篩選出的22個差異蛋白質(zhì)峰經(jīng)蛋白數(shù)據(jù)庫的初步鑒定,這些蛋白可能與血小板蛋白質(zhì)的生成與翻譯,信號轉(zhuǎn)導,轉(zhuǎn)錄的調(diào)控,免疫調(diào)控,免疫應答,抗凝及細胞之間的調(diào)節(jié)等有關(guān)。它們分別為磷酯酰絲氨酸脫羧酶α鏈,50S核糖體L34,內(nèi)分泌蛋白質(zhì)VGF,假定未知編碼蛋白M1R22HG, Humanin-like蛋白質(zhì)5,β-防衛(wèi)素110,乳粘素,尿激酶I型纖溶酶原激活物,P3(42),人C13orf3(SKA3),緊密連接關(guān)聯(lián)蛋白1,信號轉(zhuǎn)導蛋白CD24,核膜孔蛋白-62C末端樣蛋白。另外亦有9個蛋白質(zhì)峰在數(shù)據(jù)庫中鑒定結(jié)果為unnamed。2,在篩選出的22個差異蛋白峰中,以質(zhì)荷比為5170.65、7672.06m/z、3553.70m/z、2281.72m/z的蛋白質(zhì)峰差異最明顯,以此建立的分類樹診斷模型,其準確率、靈敏度及特異度為96%(72/75)、100%(40/40)和92.5%(32/35)。將包括ITP患兒40例和35例正常兒童的驗證組對此模型進行盲法驗證,結(jié)果該模型診斷ITP的準確率、靈敏度及特異度分別是95%(71/75)、96%(38/40)和94%(33/35)。3,ITP時,21個差異蛋白為低表達,而在ITP治療后血小板數(shù)目恢復正常時,這些低表達的蛋白均表達上調(diào),但與正常對照組相比,22個差異蛋白中除β一防衛(wèi)素110外,余蛋白質(zhì)仍為低表達。結(jié)論：應用SELDI技術(shù)可以篩選出與ITP相關(guān)的敏感性高、特異性強的血小板蛋白標志物,建立的決策樹分類模型可能對ITP患兒的診斷具有重要的臨床價值。
[Abstract]:鐮旂┒鑳屾櫙涓庣洰鐨勶細鍏嶇柅鎬ц灝忔澘鍑忓皯鐥，

本文編號：1669790