本文選題：有機(jī)酸尿癥　切入點(diǎn)：實(shí)驗(yàn)室檢查　出處：《山東大學(xué)》2014年博士論文

【摘要】：目的：有機(jī)酸尿癥(Organic Aciduria)是遺傳代謝性疾病(Inherited Metabolic Disorders, IMD)中重要的組成部分。對(duì)其研究正逐漸引起臨床醫(yī)師的重視,目前,采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析法(gas chromatography/mass spectrometry, GC-MS)進(jìn)行定量檢測(cè)尿液有機(jī)酸,成為有機(jī)酸尿癥診斷檢測(cè)的首選技術(shù)。本研究對(duì)GC/MS篩查的高�；純耗蛴袡C(jī)酸陽(yáng)性病例進(jìn)行總結(jié)分析,為此類疾病早期診斷、早期干預(yù)及治療提供參考依據(jù)。 方法：臨床檢測(cè)尿有機(jī)酸異常174例患者中資料齊全者82例,涵蓋6種遺傳代謝性疾病,其中甲基丙二酸尿癥61例、丙酸尿癥1例、疑似酪氨酸尿癥11例、疑似楓糖尿癥6例、3一羥基-3-甲基戊二酸尿癥2例及黑酸尿癥1例,就其人口信息學(xué)、臨床表現(xiàn)、家族史、實(shí)驗(yàn)室檢查、頭顱影像學(xué)檢查、尿有機(jī)酸篩查及血氨基酸篩查結(jié)果、治療和預(yù)后進(jìn)行了總結(jié)分析研究。 結(jié)果：82例患者中,男50例,女32例。發(fā)病年齡為生后3小時(shí)至5歲,平均發(fā)病年齡為1月3天,其中,新生兒期發(fā)病42例,占51.2%。主要臨床表現(xiàn)：嘔吐47例、反應(yīng)差及喂養(yǎng)困難33例、驚厥30例、有肺炎和敗血癥臨床表現(xiàn)者63例、新生兒黃疸(均為重度)20例、貧血13例、運(yùn)動(dòng)障礙33例、意識(shí)障礙29例、合并心臟疾患34例、肝腫大4例；有同胞夭折史或母親孕期有不明原因流產(chǎn)、死胎史者41例。患兒血常規(guī)檢查結(jié)果顯示：血紅蛋白含量減少者27例,中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)減少者26例,血小板減少者10例；生化檢查結(jié)果顯示：低鈣血癥46例,尿素氮升高25例,低血糖23例,谷草轉(zhuǎn)氨酶升高49例,谷丙轉(zhuǎn)氨酶升高29例,總蛋白降低69例,乳酸脫氫酶升高70例,血氨升高47例,其中血氨升高值超過(guò)300umol/L者26例,患有嚴(yán)重且難以糾正的代謝性酸中毒51例。凝血四項(xiàng)檢查結(jié)果顯示：凝血酶原時(shí)間延長(zhǎng)24例,部分凝血酶原時(shí)間延長(zhǎng)17例,凝血酶時(shí)間延長(zhǎng)18例,纖維蛋白原減少34例。39例患兒行CT或磁共振檢查,顯示腦組織結(jié)構(gòu)有異常。聯(lián)合血液串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)分析,56例甲基丙二酸尿癥(MMA)患者中26例患兒同時(shí)伴有同型半胱氨酸血癥,30例為單純性MMA；1例確診為酪氨酸血癥；4例確診為楓糖尿癥。給予左卡尼汀用于糾正急性期酸中毒,根據(jù)不同病種給予相應(yīng)的藥物及飲食治療。45例MMA堅(jiān)持治療,目前存活最大患兒3歲1月；1例患兒確診為酪氨酸血癥1型,使用尼替西農(nóng)治療1年,癥狀好轉(zhuǎn)；2例楓糖尿癥患兒出現(xiàn)腦性癱瘓的臨床表現(xiàn)；1例丙酸血癥和2例3-羥基-3-甲基戊二酸尿癥患兒,家長(zhǎng)在確診后都放棄治療。 結(jié)論：有機(jī)酸尿癥患兒臨床表現(xiàn)多種多樣,半數(shù)以上于新生兒期發(fā)病,而且病情危重甚至危及生命,常見(jiàn)的臨床表現(xiàn)有嘔吐、驚厥、反應(yīng)差及喂養(yǎng)困難、反復(fù)的肺炎及敗血癥等感染表現(xiàn)、重度新生兒黃疸、運(yùn)動(dòng)及意識(shí)障礙,有些患兒患有心臟疾病,實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)常提示低血鈣、低血糖、高血氨及難以糾正的代謝性酸中毒。部分有機(jī)酸尿癥患兒如單純性甲基丙二酸尿癥早期應(yīng)用鈷胺酶替代治療可取得良好的臨床效果,部分患兒可早期采取飲食控制的方法亦能取得良好的臨床效果,對(duì)伴有難以糾正的酸中毒可用左卡尼汀改善能量代謝,從而糾正酸中毒,以避免酸中毒對(duì)組織器官的進(jìn)一步損害。由于有機(jī)酸尿癥患兒如不采取及時(shí)有效的治療常造成程度不同的中樞神經(jīng)功能損害,導(dǎo)致智力、運(yùn)動(dòng)等功能障礙,故早期診斷、早期干預(yù)尤為重要。也有部分有機(jī)酸尿癥遺傳學(xué)診斷明確者,可由專業(yè)人士為其家庭提供遺傳咨詢,預(yù)防類似患兒再次出生。 目的：黑酸尿癥(Alkaptonuria, AKU)即尿黑酸氧化酶缺乏癥(homogentisc acid oxidase deficiency),是酪氨酸和苯丙氨酸的新陳代謝中間產(chǎn)物尿黑酸不能被進(jìn)一步氧化分解從而在體液和組織內(nèi)蓄積所致的一種氨基酸分解代謝異常性遺傳性疾病。其最顯著的臨床特征是新排出之尿液顏色正常,放置后或遇堿后則變?yōu)楹谏�。褐黃病是尿黑酸尿癥發(fā)展到晚期的另一種疾病名稱,由于患者體內(nèi)的尿黑酸增多及腎臟清除尿黑酸能力下降,尿黑酸及其氧化的多聚物易與膠原結(jié)合,呈進(jìn)行性儲(chǔ)積,形成灰色黑色素,引起軟骨、椎間盤和結(jié)締組織發(fā)生退變,給病人造成極大的痛苦,嚴(yán)重影響病人的生活及生存質(zhì)量。因此開(kāi)展AKU致病基因研究為AKU患者的治療及預(yù)防提供依據(jù)非常必要。 方法：利用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC/MS)對(duì)高危AKU患兒尿液尿黑酸進(jìn)行定量分析,確診AKU患兒后,則針對(duì)AKU的致病基因HGD設(shè)計(jì)外顯子擴(kuò)增引物,進(jìn)行基因擴(kuò)增、一代測(cè)序后,分析基因突變序列。針對(duì)所發(fā)現(xiàn)的突變采用人群信息檢測(cè)及生物信息學(xué)方法進(jìn)行基因致病性分析。 結(jié)果：GC/MS結(jié)果分析顯示尿黑酸在正常人中檢測(cè)不出,而該患兒結(jié)果為1184.79U/0.2mg肌酐。先證者經(jīng)過(guò)基因測(cè)序檢測(cè)發(fā)現(xiàn)兩個(gè)突變分別為c.115delG (p.N35fsX50)和IVS5+3AC,母親攜帶有c.115delG (p.N35fsX50)突變,父親攜帶有IVS5+3AC突變,兩個(gè)突變位于同源染色體上,為復(fù)合雜合突變,并排除了c.115G和IVS5+3A為多態(tài)性位點(diǎn),生物信息學(xué)分析顯示IVS5+3A在多個(gè)物種高度保守。 結(jié)論：GC/MS可用于診斷黑酸尿癥,基因診斷及查找到AKU致病性突變?yōu)榇_診該病的金標(biāo)準(zhǔn)。國(guó)內(nèi)很少關(guān)于AKU致病基因突變研究,本文就篩查到的AKU患兒進(jìn)行一代測(cè)序發(fā)現(xiàn)了兩個(gè)復(fù)合雜合突變c.115delG (p.N35fsX50)和IVS5+3AC,兩個(gè)突變均為未報(bào)道的新發(fā)現(xiàn)之突變。上述結(jié)果豐富了人類黑酸尿癥基因突變數(shù)據(jù)庫(kù),為我國(guó)AKU基因診斷及二級(jí)預(yù)防措施產(chǎn)前診斷提供了新的數(shù)據(jù)資料,具有臨床實(shí)用價(jià)值及優(yōu)生學(xué)意義。 目的：甲基丙二酸尿癥(methylmalonic aciduria, MMA)是由甲基丙二酰輔酶A變位酶(methylmalonyl-CoA mutase, MCM)及其輔酶活性缺乏所致,使支鏈氨基酸代謝過(guò)程中的甲基丙二酰輔酶A不能被進(jìn)一步氧化分解從而在體內(nèi)蓄積,引起體內(nèi)毒性有機(jī)酸甲基丙二酸升高,損害細(xì)胞線粒體活性,引起一系列臨床癥狀。MMA是有機(jī)酸尿癥最為常見(jiàn)的病種,分為12個(gè)亞型,13種致病基因,最常見(jiàn)的亞型為變位酶缺陷和Cb1C缺陷,編碼基因分別為MUT基因和MMACHC基因,MCM缺陷型常在新生兒期就發(fā)病,病情危重,�？晌＜吧�。Cb1C缺陷型發(fā)病年齡較MCM缺陷型較晚,但常在周歲之內(nèi)發(fā)病,患兒常伴有生長(zhǎng)發(fā)育遲緩。MMA患兒治療原則為特殊飲食、補(bǔ)充VB12終生治療、定期檢測(cè)尿液甲基丙二酸含量。MMA發(fā)病時(shí)無(wú)特異臨床表現(xiàn),臨床上容易誤診,從而延誤治療時(shí)機(jī),嚴(yán)重影響患兒預(yù)后。由于MMA的危害性、遺傳性及難治性,開(kāi)展MMA致病基因研究,為MMA患者的早期診斷、早期干預(yù)及遺傳咨詢提供理論依據(jù)。 方法：利用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC/MS)和液相串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀(LC-MS/MS)對(duì)2例MMA患兒尿液有機(jī)酸和血液氨基酸及肉堿進(jìn)行定量分析,確診MMA患兒后,抽取患兒及父母外周靜脈血,提取DNA,針對(duì)MMA的13種致病基因進(jìn)行基因捕獲和高通量二代測(cè)序,分析基因突變序列。針對(duì)所發(fā)現(xiàn)的突變采用人群信息檢測(cè)及生物信息學(xué)方法進(jìn)行基因致病性分析。 結(jié)果：GC/MS結(jié)果分析顯示甲基丙二酸在正常人中檢測(cè)不出,病例1患兒結(jié)果為731.1U/0.2mg肌酐,先證者經(jīng)過(guò)基因測(cè)序檢測(cè)發(fā)現(xiàn)MMACHC基因上有兩個(gè)突變分別為c.656-658delAGA(p.213delK)和c.609GA(p.W203X),母親攜帶有c.656-658delAGA突變,父親攜帶有c.609GA突變,兩個(gè)突變位于同源染色體上,為復(fù)合雜合突變。LC-MSPMS分析病例2患兒結(jié)果為丙酰肉堿27.44uM、丙酰肉堿／乙酰肉堿0.98,先證者經(jīng)過(guò)基因測(cè)序檢測(cè)發(fā)現(xiàn)MUT基因上有兩個(gè)突變分別為c.729-730insTT(p.D244fs)和c.66dupA(p.S23fs),母親攜帶有c.729-730insTT突變,父親攜帶有c.66dupA突變,兩個(gè)突變位于同源染色體上,為復(fù)合雜合突變。文獻(xiàn)檢索結(jié)果顯示,MUT基因上c.729-730insTT(p.D244fs)突變及MMACHC基因c.609GA(p.W203X)突變均為已報(bào)道致病突變。而MUT基因上c.66dupA(p.S23fs)突變及MMACHC基因c.656-658delAGA(p.213delK)突變均為未報(bào)道新突變。人群信息檢測(cè)排除了c.66A和c.656-658AGA位點(diǎn)為多態(tài)性位點(diǎn),MUT基因上c.66A位點(diǎn)在多個(gè)直系物種的基因序列中完全保守,MMACHC基因c.656-658AGA在多個(gè)直系物種的基因序列中完全保守,其整碼缺失導(dǎo)致的p.213K位氨基酸丟失,其p.213K位氨基酸序列在多個(gè)直系物種中完全保守。 結(jié)論：GC/MS可用于診斷甲基丙二酸尿癥,基因診斷及查找到MMA致病性基因突變?yōu)榇_診該病的金標(biāo)準(zhǔn)。本文就篩查到的2例MMA患兒進(jìn)行基因捕獲和高通量二代測(cè)序,1例患兒確診為MCM缺陷型,1例患兒確診為Cb1C型,為MMA患兒的具體治療方案提供依據(jù)。上述結(jié)果豐富了人類甲基丙二酸尿癥基因突變數(shù)據(jù)庫(kù),為我國(guó)MMA基因診斷、治療及二級(jí)預(yù)防措施產(chǎn)前診斷提供了新的數(shù)據(jù)資料,具有臨床實(shí)用價(jià)值及優(yōu)生學(xué)意義。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R725.8

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

1 胡曼;麻宏偉;羅陽(yáng);王琳;宋瑩;黎芳;;基因診斷尿黑酸尿癥1例[J];中國(guó)當(dāng)代兒科雜志;2012年10期

2 劉黎黎;侯新琳;周叢樂(lè);楊艷玲;;以腦積水起病的甲基丙二酸尿癥合并同型半胱氨酸血癥1例報(bào)道[J];中國(guó)當(dāng)代兒科雜志;2013年04期

3 李燕飛;彭濤;段冉冉;王笑寒;高慧麗;王景濤;滕軍放;賈延R，

本文編號(hào)：1663364