本文選題：足細胞　切入點：乙型肝炎病毒X蛋白　出處：《華中科技大學(xué)》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的腎小球足細胞是一種高度分化的終末細胞，相鄰兩足突之間相互連接形成的裂孔隔膜構(gòu)成了腎小球最后一道濾過屏障。對乙型肝炎病毒相關(guān)性膜性腎病（HBV-MN）的臨床病理研究顯示患者均存在不同程度的足突融合，提示HBV-MN發(fā)生過程中存在裂孔隔膜的異常。與原發(fā)性膜性腎病相比，HBV-MN不僅存在補體攻膜復(fù)合物對足細胞的損傷，還存在HBV蛋白對足細胞的作用，因此本研究通過構(gòu)建體外足細胞的亞溶量C5b-9（sC5b-9）模型，利用攜帶HBx基因的復(fù)制缺陷型腺病毒轉(zhuǎn)染足細胞，觀察sC5b-9和HBx雙重損傷因素對培養(yǎng)足細胞裂孔膜蛋白表達和分布有何影響。方法通過檢測細胞培養(yǎng)上清液中的LDH活性，采用“棋盤實驗”的方法確定sC5b-9攻擊足細胞的抗體和補體濃度，瑞士-吉姆薩染色觀察sC5b-9對足細胞形態(tài)的影響，間接免疫熒光染色與激光共聚焦顯微鏡觀察足細胞裂孔膜蛋白分布的變化，western-blot檢測足細胞裂孔膜蛋白表達量的變化。結(jié)果通過LDH的測定確定了sC5b-9模型的抗體濃度為1%，補體濃度為1%。細胞形態(tài)學(xué)觀察顯示sC5b-9可以造成足細胞突觸減少，胞質(zhì)輕微空泡變性，胞核腫脹呈顆粒樣改變，核膜界限模糊等變化。免疫熒光染色顯示sC5b-9和HBx雙重作用下裂孔隔膜蛋白分布異常較單因素更顯著：nephrin主要朝核周分布聚集，胞質(zhì)和突起的表達急劇減少；空白組podocin和CD2AP在胞質(zhì)均勻分布，膜周呈小顆粒狀，而雙重損傷組呈粗絲狀或者大顆粒樣分布于膜周和突起。western blot檢測顯示雙重損傷組較sC5b-9單因素損傷組CD2AP、nephrin的表達顯著減少，podocin的表達反而升高；與HBx單因素損傷組比較，CD2AP、nephrin和podocin的表達均顯著降低。結(jié)論sC5b-9和HBx蛋白雙重因素可以加重裂孔膜蛋白的損傷。這揭示了在HBV-MN疾病進程中補體攻膜復(fù)合物和HBx蛋白可能共同發(fā)揮損傷足細胞的作用，損傷的靶點為裂孔膜蛋白，將為HBV-MN的診療提供新的思路。
[Abstract]:Objective glomerular podocytes are highly differentiated terminal cells. The fissure membrane formed by the connection between the adjacent two podocytes forms the last filtration barrier of the glomeruli. The clinicopathological studies of HBV-MNs in patients with hepatitis B virus associated membranous nephropathy (HBV-MN) show that there are various degrees of foot process fusion in all patients. Compared with primary membranous nephropathy, HBV-MN has not only the damage of complement attack membrane complex on podocyte, but also the effect of HBV protein on podocyte. In this study, we constructed the model of subsolubilization of podocyte C5b-9sC5b-9 in vitro, and transfected podocyte into podocyte by replication-deficient adenovirus carrying HBx gene. To observe the effect of sC5b-9 and HBx on the expression and distribution of lobes membrane protein in cultured podocytes. Methods the activity of LDH in the supernatants of cultured podocytes was detected. The concentration of antibody and complement of sC5b-9 attack podocyte was determined by "chessboard experiment", and the effect of sC5b-9 on podocyte morphology was observed by Swiss-Gimsa staining. Indirect immunofluorescence staining and laser confocal microscopy observed the changes of protein distribution in podocytes by Western blot. Results the antibody concentration of sC5b-9 model was determined by LDH analysis. (1) the complement concentration is 1. Morphological observation shows that sC5b-9 can cause synapse reduction in podocytes. The cytoplasm showed slight vacuolar degeneration, nuclear swelling showed granular changes, and the nuclear membrane boundaries were blurred. Immunofluorescence staining showed that the abnormal distribution of membrane proteins in the split cell membrane under the action of sC5b-9 and HBx was significantly higher than that of single factor. The expression of podocin and CD2AP in the cytoplasm of the blank group was evenly distributed, and the membrane around the membrane was small granular, while the expression of cytoplasm and protuberance decreased sharply. In the double injury group, the expression of CD2APPnphrin was significantly decreased in the double injury group compared with that in the univariate sC5b-9 injury group, and the expression of ppodocin was significantly increased in the double injury group. The results showed that the expression of CD2APPnphrin in the double injury group was significantly lower than that in the sC5b-9 univariate injury group. Compared with the univariate HBx injury group, the expression of CD2APPnphrin and podocin decreased significantly. Conclusion the double factors of sC5b-9 and HBx protein can aggravate the damage of the membrane protein. This suggests that the complement attack membrane complex and the HBx protein may play an important role in the process of HBV-MN disease. To work together to damage podocytes, The target of injury is hiatus membrane protein, which will provide a new idea for the diagnosis and treatment of HBV-MN.
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R726.9

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 陳瑜;劉超;;足細胞損傷與糖尿病腎病[J];中國實用內(nèi)科雜志;2007年23期

2 盧宏柱;周建華;;足細胞裂孔膜蛋白及相關(guān)腎病的研究進展[J];中國實用兒科雜志;2008年02期

3 孫桂芝;孫艷艷;方敬愛;;糖尿病腎病足細胞損傷的研究進展[J];中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志;2008年02期

4 李月紅,黃海長,劉剛,章友康;檢測腎病綜合征患者尿中足細胞的臨床意義[J];北京大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2004年02期

5 顧樂怡;倪兆慧;錢家麒;Yasuhiko Tomino;;糖基化終產(chǎn)物通過其受體誘導(dǎo)小鼠足細胞表達單核細胞趨化因子1[J];中華內(nèi)分泌代謝雜志;2006年02期

6 白亞玲;顧國琴;;足細胞與糖尿病腎病[J];臨床薈萃;2007年19期

7 秦衛(wèi)松;劉志紅;;雷公藤甲素及其作用機制[J];腎臟病與透析腎移植雜志;2007年02期

8 吳永耀;曹靈;;足細胞損害與腎小球硬化[J];瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2008年06期

9 申煥蓉;曹靈;;足細胞表型的改變與腎臟疾病[J];中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志;2009年03期

10 Sakoda M;Ichihara A;Kurauchi-Mito A;Narita T;Kinou-chi K;Murohashi-Bokuda K;Saleem MA;Nishiyama A;Suzuki F;Itoh H;黃曉斌;;在不影響人足細胞(前)腎素受體信號下,阿利吉侖能抑制細胞內(nèi)血管緊張素Ⅱ水平[J];中華高血壓雜志;2010年07期

相關(guān)會議論文 前10條

1 高霞;徐虹;;血管生成素樣蛋白3在人和大鼠足細胞的定位特點及與足突融合的關(guān)系探討[A];第六屆江浙滬兒科學(xué)術(shù)會議暨兒科學(xué)基礎(chǔ)與臨床研究進展學(xué)術(shù)班論文匯編[C];2009年

2 徐新鵬;洪郁芝;葉迅;;雷公藤內(nèi)酯醇干預(yù)高糖影響小鼠腎臟足細胞Nephrin蛋白表達的研究[A];第十二屆全國中醫(yī)糖尿病大會論文匯編[C];2010年

3 俞東容;楊汝春;林宜;周大衛(wèi);朱曉玲;王永鈞;;防己黃芪湯對阿霉素腎病大鼠足細胞的影響[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會第二十一屆全國中醫(yī)腎病學(xué)術(shù)會議論文匯編（下）[C];2008年

4 祁佳;黃海長;李驚子;;高糖通過ERK_(1／2)途徑調(diào)節(jié)足細胞podocalyxin蛋白的表達[A];中華醫(yī)學(xué)會腎臟病學(xué)分會2006年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2006年

5 李鐸;聶靜;鄒和群;黎敏;余學(xué)清;;氧化型低密度脂蛋白對足細胞的損傷作用及機制[A];中華醫(yī)學(xué)會腎臟病學(xué)分會2006年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2006年

6 袁博寒;朱曉玲;楊汝春;王永鈞;;復(fù)方積雪草對FSGS模型大鼠足細胞裂孔隔膜相關(guān)分子mRNA表達的影響[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會第二十一屆全國中醫(yī)腎病學(xué)術(shù)會議論文匯編（下）[C];2008年

7 苗靜;范青鋒;崔慶華;譚穎;趙明輝;丁潔;;足細胞產(chǎn)生的補體成分在足細胞損傷以及嘌呤霉素腎病蛋白尿中的作用[A];中華醫(yī)學(xué)會第十五次全國兒科學(xué)術(shù)大會論文匯編（上冊）[C];2010年

8 陳鋮;丁國華;賈俊亞;梁偉;;AngⅡ?qū)Υ笫笞慵毎纤剡B接激酶表達的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會腎臟病學(xué)分會2006年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2006年

9 袁博寒;朱曉玲;楊汝春;王永鈞;;復(fù)方積雪草對FSGS模型大鼠足細胞裂孔隔膜相關(guān)分子mRNA表達的影響[A];2008年浙江省腎臟病學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2008年

10 葉迅;洪郁芝;徐新鵬;;小鼠腎臟足細胞GPSD核心蛋白在高糖環(huán)境下表達的變化[A];2008年浙江省內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2008年

相關(guān)重要報紙文章 前7條

1 陳香美 謝院生;以細胞生物學(xué)指導(dǎo)腎病防治[N];健康報;2006年

2 ;耐缺氧 抗疲勞 從銀杏參寶開始[N];保健時報;2003年

3 ;用最具母乳優(yōu)點的奶粉喂寶寶[N];中國婦女報;2000年

4 談多剛;肩周炎的物理療法[N];民族醫(yī)藥報;2004年

5 黃進琪;科學(xué)飲水 健康長壽[N];中國老年報;2002年

6 迅行 編譯;美國睪丸細胞植入腦部治中風(fēng)[N];大眾科技報;2000年

7 康康;30歲開始防范器官衰老[N];保健時報;2004年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 王洪杰;活化蛋白C抑制足細胞凋亡的作用與機制研究[D];華中科技大學(xué);2010年

2 袁楊剛;線粒體功能障礙在腎小球足細胞早期損傷中作用的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2012年

3 朱春華;線粒體功能障礙在足細胞損傷中的作用及干預(yù)研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2011年

4 高霞;血管生成素樣蛋白3導(dǎo)致足細胞骨架重排參與蛋白尿形成的分子機制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

5 張瑜;乙肝病毒相關(guān)性腎炎腎小球足細胞病變機制的研究[D];華中科技大學(xué);2010年

6 劉巍;中間絲蛋白Nestin在糖尿病腎病發(fā)病中的作用及機制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2012年

7 陳珊;TRPC6介導(dǎo)的鈣離子內(nèi)流在白蛋白過負荷所致足細胞損傷中的作用[D];華中科技大學(xué);2011年

8 邢玲玲;P13K/Akt通路在糖尿病腎病足細胞損傷中的作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2012年

9 姜華軍;CD2AP在足細胞中的生理功能研究[D];華中科技大學(xué);2008年

10 劉雙信;RANK-RANKL在損傷足細胞中表達及意義的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 楊鳳杰;雙重因素sC5b-9和HBx對裂孔膜蛋白在足細胞表達的影響[D];華中科技大學(xué);2012年

2 部璇;肝細胞生長因子保護足細胞損傷的實驗研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2010年

3 王帥;骨髓間充質(zhì)干細胞對1型糖尿病腎病大鼠足細胞病的治療及機制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2012年

4 胡鶴一;骨髓間充質(zhì)干細胞對大鼠足細胞損傷的保護作用的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2012年

5 梁斌;促腎上腺皮質(zhì)激素與轉(zhuǎn)化生長因子β1對足細胞表型的影響[D];蘇州大學(xué);2012年

6 柴玉萍;氟伐他汀對嘌呤霉素刺激下足細胞β1整合素表達的影響及其機制的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2011年

7 李婷;地塞米松對嘌呤霉素模型人足細胞損傷的保護機制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2011年

8 王文琰;自噬早期激活可抑制醛固酮誘導(dǎo)的足細胞損傷[D];南京醫(yī)科大學(xué);2012年

9 潘夢舒;冬蟲夏草及雷公藤多甙對糖尿病腎病大鼠足細胞影響的實驗研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2012年

10 郭婷婷;牛蒡子苷對晚期氧化蛋白產(chǎn)物誘導(dǎo)小鼠足細胞轉(zhuǎn)分化的影響[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

，

本文編號：1645770