本文選題：過敏性紫癜　切入點：人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞　出處：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的 過敏性紫癜（HSP）是兒童期最常見的系統(tǒng)性小血管炎。盡管已知血管內(nèi)皮損傷是HSP主要病理變化，但其血管內(nèi)皮損傷機制尚不清楚。本研究通過觀察HSP血清及血清IgA1刺激下人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）分泌炎性細(xì)胞因子水平及HUVECs中細(xì)胞間黏附分子-1（ICAM-1）和核因子-κB（NF-κB）相關(guān)基因及蛋白表達(dá)的變化，初步探討兒童過敏性紫癜血清IgA1與血管內(nèi)皮損傷的關(guān)系及血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的分子機制。 方法 1.血清采集及IgA1的提取： 本院兒科住院確診為HSP的急性期患兒10例及10例健康體檢兒童均于清晨空腹抽取外周靜脈血5ml，分離血清；Jacalin親和層析法提取血清IgA1。 2.實驗方法： 采用體外細(xì)胞培養(yǎng)方法，實驗分三組觀察：HSP組，正常對照組，空白對照組。 HSP組分別用患兒血清及患兒血清IgA1與HUVECs共培養(yǎng)；正常對照組分別用正常兒童血清及正常兒童血清IgA1與HUVECs共培養(yǎng)；空白對照組用無血清培養(yǎng)基與HUVECs共培養(yǎng)。培養(yǎng)12h后分別檢測各組上清液炎性細(xì)胞因子水平。 采用MTT比色法檢測各組IgA1刺激下HUVECs吸光值，觀察不同濃度IgA1刺激HUVECs增殖情況。 實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（Real time PCR）和蛋白質(zhì)印記技術(shù)（Westernblot）檢測IgA1刺激下HUVECs中NF-κB和ICAM-1mRNA及蛋白表達(dá)。 結(jié)果 1. HSP患兒血清及血清IgA1分別與HUVECs共培養(yǎng)12h后，HSP組上清液IL-8、TNF-α和NO水平均明顯高于正常對照組和空白對照組（P0.05）； 2.血清IgA1刺激HUVECs增殖實驗中，正常對照組和HSP組IgA1均可刺激HUVECs增殖（p＜0.05）；隨著IgA1濃度的增加，兩組HUVECs增殖程度均有相應(yīng)增高趨勢；在IgA1相同濃度下，與正常對照組相比，HSP組IgA1刺激HUVECs增殖程度更明顯（p＜0.05）。 3.HSP組血清IgA1刺激下HUVECs NF-κB和ICAM-1mRNA表達(dá)量明顯高于正常對照組及空白對照組（分別P＜0.05，，P＜0.01），且HSP組兩者的蛋白表達(dá)量也明顯高于正常對照組和空白對照組（P＜0.01）。 結(jié)論 1. HSP急性期患兒血清IgA1可誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的HUVECs活化并分泌炎性介質(zhì)。 2. IgA1可能通過激活NF-κB通路,上調(diào)血管內(nèi)皮細(xì)胞炎性介質(zhì)的表達(dá)而導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞損傷。
[Abstract]:Purpose. Henoch-Schonlein purpura (HSP) is the most common systemic vasculitis in children. However, the mechanism of vascular endothelial injury is not clear. In this study, we observed the levels of inflammatory cytokines in human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) stimulated by HSP serum and serum IgA1, and the intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) and nuclear factor- 魏 B (NF- 魏 B) related units in HUVECs. Because of changes in protein expression, To explore the relationship between serum IgA1 and vascular endothelial injury in children with Henoch-Schonlein purpura and the molecular mechanism of vascular endothelial cell injury. Method. 1. Serum collection and IgA1 extraction:. Ten children with acute HSP diagnosed in pediatrics and 10 healthy children were collected from peripheral venous blood on an empty stomach in the morning, and serum IgA1 was extracted by affinity chromatography. 2. Experimental methods:. The cells were cultured in vitro and divided into three groups: the control group, the normal control group and the blank control group. The HSP group was co-cultured with serum IgA1 and HUVECs, and the control group was co-cultured with IgA1 and HUVECs in normal children's serum and normal children's serum, respectively. The blank control group was co-cultured with serum-free medium and HUVECs. After 12 hours of culture, the levels of inflammatory cytokines in supernatant of each group were measured. MTT colorimetric assay was used to detect the light absorption of HUVECs stimulated by IgA1, and the proliferation of HUVECs stimulated by different concentrations of IgA1 was observed. Real time PCR and Western blot were used to detect the expression of NF- 魏 B, ICAM-1mRNA and protein in HUVECs stimulated by IgA1. Results. 1. The levels of IL-8 TNF- 偽 and no in the supernatant of HSP group were significantly higher than those in the normal control group and the blank control group (P 0.05) after 12 hours of co-culture of serum and serum IgA1 with HUVECs. 2. In the experiment of HUVECs proliferation stimulated by serum IgA1, IgA1 in normal control group and HSP group could stimulate HUVECs proliferation P < 0.05, and with the increase of IgA1 concentration, the HUVECs proliferation degree of both groups had a corresponding increase trend. Compared with the normal control group, the proliferation of HUVECs stimulated by IgA1 in HSP2 group was significantly higher than that in HSP2 group (P < 0.05). 3. The expression of HUVECs NF- 魏 B and ICAM-1mRNA in HSPgroup was significantly higher than that in normal control group and blank control group (P < 0.05 P < 0.01), and the protein expression in HSP group was significantly higher than that in normal control group and blank control group (P < 0.01). Conclusion. 1. Serum IgA1 could induce the activation of HUVECs and secretion of inflammatory mediators in acute phase of HSP. 2. IgA1 may induce endothelial cell injury by activating NF- 魏 B pathway and up-regulating the expression of inflammatory mediators in vascular endothelial cells.
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R725.5

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本文編號：1627949