本文關(guān)鍵詞： cpsB基因 測(cè)序 肺炎鏈球菌 血清型 序列型 優(yōu)化的序貫mPCR 肺炎鏈球菌 血清分型 血清型特異PCR 肺炎鏈球菌 血清6群 cpsB測(cè)序 mPCR 血清型特異PCR 肺炎鏈球菌 血清型　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2016年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景：肺炎鏈球菌性疾病(pneumoniae diseases, PDs)已成為全球一個(gè)重要的公共衛(wèi)生問(wèn)題。肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumonia, SP)始終是導(dǎo)致嬰幼兒腦膜炎、菌血癥、肺炎等嚴(yán)重疾病的首位病原菌,也是引起鼻竇炎和急性中耳炎的最常見(jiàn)病因。2000年全球疫苗和免疫聯(lián)盟研究估計(jì)了全球5歲兒童肺炎鏈球菌疾病的疾病負(fù)擔(dān),指出共有10個(gè)國(guó)家涵蓋了全球PDs病例的66%,其中印度27%,中國(guó)12%(位居第二)。該研究同時(shí)估算出中國(guó)每年有174萬(wàn)兒童患PDs,死亡人數(shù)為3萬(wàn)人。侵襲性肺炎鏈球菌性疾病(invasive pneumococcal diseases, IPDs)是造成肺炎鏈球菌性疾病重癥和死亡的主要原因。2010年亞太地區(qū)IPDs負(fù)擔(dān)報(bào)告指出除澳大利亞和新西蘭,其他地區(qū)的大多數(shù)研究?jī)H針對(duì)住院患兒,故PDs發(fā)病率報(bào)告常低于實(shí)際水平。美國(guó)的數(shù)據(jù)顯示2007年之前兒童患肺炎鏈球菌性中耳炎、敗血癥及腦膜炎的病例每年大約共計(jì)500萬(wàn)。沉重的疾病負(fù)擔(dān)使得WHO將預(yù)防PDs作為發(fā)達(dá)國(guó)家和發(fā)展中國(guó)家的重點(diǎn)工作,并將PDs列為優(yōu)先使用疫苗預(yù)防的感染性疾病。肺炎鏈球菌的莢膜不僅是重要的毒力因子,還具有型特異性,根據(jù)其莢膜多糖結(jié)構(gòu)不同,可將肺炎鏈球菌分為46個(gè)血清群,95個(gè)血清型。接種肺炎鏈球菌疫苗是特異性的預(yù)防措施。7價(jià)肺炎鏈球菌疫苗(seven-valent pneumococcal conjugate vaccine, PCV-7)是由7個(gè)常見(jiàn)血清型(4,6B,9V,14,18C,19F,23F)的多糖抗原與白喉類(lèi)毒素載體蛋白CRM197結(jié)合構(gòu)成,為T(mén)細(xì)胞依賴(lài)性抗原,能刺激小兒免疫系統(tǒng)產(chǎn)生足夠的保護(hù)性抗體,并具有免疫記憶。自2000年在美國(guó)上市以來(lái),目前已在90多個(gè)國(guó)家或地區(qū)應(yīng)用,監(jiān)測(cè)表明PCV-7可降低兒童IPDs的整體發(fā)病率。接種PCV-7可預(yù)防疫苗所覆蓋的7種血清型肺炎鏈球菌引起的IPDs,但不能預(yù)防疫苗覆蓋血清型之外肺炎鏈球菌的感染。在廣泛使用疫苗后的監(jiān)測(cè)研究表明,非疫苗血清型(non-vaccine types, NVT)定植、致病增多,在分離株中所占比例增高的現(xiàn)象稱(chēng)為血清型替換(serotype replacement)。伴隨著血清型替換,NVT其耐藥性也有所增強(qiáng)。除此之外,還存在著疾病替換(replacement disease)及某些疾病類(lèi)型發(fā)生變化等。隨著NVT引起IPDs的日益增多,許多國(guó)家通過(guò)引入增加更多價(jià)血清型的肺炎鏈球菌疫苗來(lái)應(yīng)對(duì)血清型替換,10價(jià)肺炎鏈球菌疫苗(ten-valent pneumococcal conjugate vaccine, PCV-10)和13價(jià)肺炎鏈球菌疫苗(thirteen-valent pneumococcal conjugate vaccine, PCV-13)等紛紛面世。隨著更多價(jià)肺炎鏈球菌疫苗逐步推廣持續(xù)開(kāi)展肺炎鏈球菌血清型監(jiān)測(cè)、疫苗保護(hù)后血清型變遷以及耐藥性變化等顯得尤為重要。肺炎鏈球菌血清分型的經(jīng)典方法為莢膜腫脹試驗(yàn)(Quellung reaction),但操作較復(fù)雜,全套試劑昂貴,顯微鏡下的形態(tài)觀察存在一定的主觀性,對(duì)操作人員的技術(shù)要求較高,因而限制了它在臨床微生物實(shí)驗(yàn)室和流行病學(xué)研究中的應(yīng)用。我國(guó)目前只有北京、上海、廣州等少數(shù)大醫(yī)院開(kāi)展此項(xiàng)分型技術(shù)。近年來(lái)分子生物學(xué)技術(shù)迅猛發(fā)展,應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)對(duì)肺炎鏈球菌血清型進(jìn)行鑒定,是目前研究熱點(diǎn)之一。常見(jiàn)的分型方法有測(cè)序,多位點(diǎn)序列分型技術(shù)(multilocus sequence typing, MLST),實(shí)時(shí)PCR,多重PCR,反向線(xiàn)點(diǎn)雜交技術(shù)(reverse line blot hybridization, RLB),限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(RFLP),微陣列技術(shù)等,這些分子生物學(xué)方法在血清型檢測(cè)中表現(xiàn)出良好的應(yīng)用前景,同時(shí)也各有利弊。例如RLB雜交僅利用一張具有45個(gè)航道的尼龍膜可同時(shí)檢測(cè)43個(gè)樣本的43個(gè)靶基因,且該尼龍膜可重復(fù)20余次使用,而敏感性并不降低。從標(biāo)本DNA提取到RLB檢測(cè)出結(jié)果約需14-16小時(shí)。對(duì)于靶目標(biāo)數(shù)量及快速診斷其足以滿(mǎn)足流行病學(xué)和診斷需要。但它對(duì)引物和探針的設(shè)計(jì)要求較高,且需要特殊設(shè)備,這些都限制了它的推廣。微陣列方法是一個(gè)高通量的技術(shù),但它費(fèi)用昂貴,不適合在資源貧瘠但發(fā)病率高的不發(fā)達(dá)國(guó)家／地區(qū)開(kāi)展。其它諸多分子生物學(xué)方法為了增加敏感性和特異性,需要大量血清型特異性引物以增加覆蓋的血清型數(shù)目,這同時(shí)也增加了這些方法的多步驟和復(fù)雜性。Leung等學(xué)者設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物(cps1/cps2)應(yīng)用單步PCR方法擴(kuò)增cpsB基因、測(cè)序,可檢測(cè)46個(gè)血清型,并建立了一個(gè)SP血清型cpsB基因序列數(shù)據(jù)庫(kù)。受當(dāng)時(shí)從事研究時(shí)間所限,Leung及其同事建立的數(shù)據(jù)庫(kù)未涵蓋目前所有95個(gè)血清型。眾所周知,由于肺炎鏈球菌容易在基因水平發(fā)生重組、變異等,應(yīng)用測(cè)序方法對(duì)于混合血清型、新的基因序列型難以準(zhǔn)確識(shí)別。美國(guó)疾病預(yù)防和控制中心(Centers for Disease Control and Prevention,CDC)推薦序貫多重PCR(sequential multiplex PCR,mPCR)是目前最常使用的分子生物學(xué)鑒定血清型的方法之一,己被廣泛采用并顯示較好的準(zhǔn)確性尤其對(duì)常見(jiàn)血清型的檢測(cè)與傳統(tǒng)方法符合率較高。但其操作相對(duì)復(fù)雜,需要進(jìn)行8個(gè)mPCR反應(yīng)。它主要優(yōu)點(diǎn)是不同地區(qū)可以根據(jù)各自血清型分布特征對(duì)mPCR 反應(yīng)體系中的引物進(jìn)行優(yōu)化重組,從而在最初幾個(gè)mPCR反應(yīng)中檢測(cè)到常見(jiàn)血清型。現(xiàn)有的多價(jià)肺炎鏈球菌疫苗是否適合于我國(guó),取決于我國(guó)臨床分離的肺炎鏈球菌菌株血清型,尤其是侵襲性SP血清型的分布情況。我國(guó)臨床分離的SP血清型報(bào)道有限,與傳統(tǒng)的血清型檢測(cè)方法不能普及,暫時(shí)又缺乏一種實(shí)用、簡(jiǎn)單、適合中國(guó)國(guó)情的分子生物學(xué)檢測(cè)血清型方法有關(guān)。既往研究報(bào)道主要集中在大城市、兒童醫(yī)院,缺乏更廣闊區(qū)域、尤其是直接來(lái)自農(nóng)村或單個(gè)社區(qū)的資料。鑒于此,本研究主要目的是以國(guó)內(nèi)兒童肺炎鏈球菌血清型分布狀況為基礎(chǔ),以分子生物學(xué)方法為手段,建立一種簡(jiǎn)單、實(shí)用、適合發(fā)展中國(guó)家使用的肺炎鏈球菌血清型檢測(cè)“雞尾酒”策略,即將cpsB基因測(cè)序輔以?xún)?yōu)化的序貫mPCR及血清型6A-6D特異PCR相結(jié)合,并將該策略運(yùn)用于肺炎鏈球菌臨床株血清型的測(cè)定,結(jié)合耐藥性檢測(cè),對(duì)評(píng)價(jià)本地區(qū)疫苗的覆蓋率和有效性,指導(dǎo)合理臨床用藥提供更好的流行病學(xué)證據(jù)。第一部分cpsB基因測(cè)序檢測(cè)肺炎鏈球菌血清序列型目的利用已建立的cpsB基因測(cè)序方法對(duì)我們臨床收集的肺炎鏈球菌株進(jìn)行血清序列型檢測(cè),同時(shí)建立涵蓋目前已知肺炎鏈球菌95個(gè)血清型cpsB基因序列型數(shù)據(jù)庫(kù),將該方法進(jìn)一步完善,提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性。材料與方法下載GenBank中收錄(截止2015年1月1日)肺炎鏈球菌所有cpsB基因全長(zhǎng)的序列,應(yīng)用GenBank中的ClustalW軟件和/或JBlastn軟件對(duì)下載的序列進(jìn)行列對(duì)、比對(duì)分析,建立肺炎鏈球菌95個(gè)血清型cpsB基因序列型數(shù)據(jù)庫(kù)。對(duì)2009年～2013年收集的我院5歲以下住院兒童中肺炎鏈球菌性疾病不同樣本來(lái)源不重復(fù)肺炎鏈球菌菌株193株,用特異性引物cpsl/cps2進(jìn)行單步PCR擴(kuò)增cpsB基因目的片段,繼之進(jìn)行雙向測(cè)序。測(cè)序結(jié)果與GenBank中的序列進(jìn)行比對(duì),參照我們建立的cpsB基因序列型數(shù)據(jù)庫(kù)中數(shù)據(jù)確定血清型序列型。結(jié)果我們建立的數(shù)據(jù)庫(kù)包括GenBank中(截止2015年1月1日)所有的390個(gè)含cpsB基因全長(zhǎng)的GenBank收錄號(hào),包含目前所知肺炎鏈球菌95個(gè)血清型cpsB基因732bp標(biāo)準(zhǔn)序列型的數(shù)據(jù)資料。所有193株臨床分離的肺炎鏈球菌菌株進(jìn)行cpsB基因擴(kuò)增均成功。基于cpsB基因在一個(gè)或多個(gè)位點(diǎn)的異質(zhì)性,一共識(shí)別出21個(gè)序列型。其中8個(gè)序列型(3,9V,6B,10B,14,19A,23F,23A)是血清型特異序列型,可以由序列型直接預(yù)測(cè)出菌株的血清型：5個(gè)序列型(6C-6D,6B-6E-6X,15B-15C,19F-19A及28F-28A)是同一個(gè)血清群不同血清型共享序列型,可以由序列型直接預(yù)測(cè)出菌株相應(yīng)的血清群；3個(gè)序列型(13-20,15A-33B,17A-34)雖然也屬于多個(gè)血清型共享序列型,但無(wú)法明確菌株具體屬于哪個(gè)血清型。通過(guò)cpsB基因測(cè)序方法,193株菌中34.2%的菌可直接確定其血清型；55.4%的菌可確定至相應(yīng)血清群水平。結(jié)論本研究建立的肺炎鏈球菌95個(gè)血清型cpsB基因序列型數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)分子生物字萬(wàn)法檢測(cè)血清序列型是一個(gè)補(bǔ)充和完善。應(yīng)用單步PCR進(jìn)仃cpsB基因測(cè)序確定肺炎鏈球菌血清序列型可以作為血清型檢測(cè)的初篩。第二部分優(yōu)化的序貫nPCR方法檢測(cè)肺炎鏈球菌血清型目的根據(jù)我國(guó)兒童肺炎鏈球菌血清型分布狀況,對(duì)美國(guó)CDC推薦的序貫mPCR方法進(jìn)行優(yōu)化組合,建立一個(gè)適合我國(guó)兒童血清型檢測(cè)的序貫mPCR方法,可以在最初三個(gè)nPCI反應(yīng)中識(shí)別出最常見(jiàn)血清型。材料與方法采用優(yōu)化的序貫mPCR方法對(duì)收集的193株菌進(jìn)行肺炎鏈球菌血清型檢測(cè)。參照美國(guó)CDC網(wǎng)站公布的引物序列合成肺炎鏈球菌40對(duì)血清型特異性引物和1對(duì)莢膜特異性引物。根據(jù)我國(guó)兒童肺炎鏈球菌血清型分布狀況,對(duì)美國(guó)CDC推薦的序貫mPCR前三步反應(yīng)中引物進(jìn)行優(yōu)化組合。優(yōu)化后的前三步mPCI反應(yīng)可識(shí)別十個(gè)血清群/型,包括我國(guó)兒童最常見(jiàn)血清群/型19F,19A,14,23F及6,PCV-7中包含的三個(gè)血清型4,9V/9A及18C,以及近些年在血清型替換中越來(lái)越受到關(guān)注的血清型15B/15C和15A/15F。第一步mPCI反應(yīng)包含血清群/型9V/9A、14、23F、15B/15C的特異性引物；第二步mPCR反應(yīng)包含血清群/型4,6和19A的特異性引物；第三步mPCR反應(yīng)包含血清型15A/15F,18C和19F的特異性引物。每一步mPCR反應(yīng)中均加入莢膜特異性引物作為內(nèi)部陽(yáng)性對(duì)照。如果一個(gè)標(biāo)本在前三步mPCR反應(yīng)中檢測(cè)均陰性,則需要按照美國(guó)CDC推薦的方法進(jìn)行序貫8個(gè)mPCR反應(yīng)。結(jié)果從193株臨床肺炎鏈球菌菌株中一共識(shí)別出肺炎鏈球菌12個(gè)血清群／型,包括：3(2株),6(27株),9W9A(3株),14(14株),15F/15A(2株),15B/15C(13株),19F(67株),19A(23株),20(2株),23F(33株),23A(2株)和34(1株)。血清型4和18C在本研究中沒(méi)有該型菌株,故擴(kuò)增陰性。通過(guò)優(yōu)化的序貫mPCR前三步反應(yīng)可識(shí)別大多數(shù)菌株的血清型,僅11株菌(5.7%)需要進(jìn)行美國(guó)CDC推薦的序貫8步nPCR反應(yīng)鑒定,其中4株菌(2.1%)改用后者依然不能進(jìn)行分型。序貫mPCR方法無(wú)法分型的4株菌中2株菌cpsB基因測(cè)序顯示序列型為10B,28F-28A。另有2株菌應(yīng)用兩種方法均無(wú)法分型,需要進(jìn)行莢膜腫脹試驗(yàn)鑒定。cpsB基因測(cè)序與mPCR結(jié)果相比,兩者一致性可達(dá)92.2%。cpsB基因測(cè)序提示序列型是15A-33B,13-20A-20B,17A-34,序貫mPC確定其血清型分別為15F/15A,20以及34,并證實(shí)13株肺炎鏈球菌cpsB基因血清序列型為新的序列型。結(jié)論根據(jù)中國(guó)兒童血清型分布狀況,優(yōu)化的序貫mPCR反應(yīng)用于肺炎鏈球菌血清分型可以彌補(bǔ)基因測(cè)序的不足,提高檢測(cè)準(zhǔn)確性,并且在前三步mPCR反應(yīng)中識(shí)別出常見(jiàn)血清型。第三部分血清型6A-6D特異PCR方法檢測(cè)血清6群肺炎鏈球菌目的應(yīng)用我們已建立的血清型6A-6D特異PCR方法對(duì)cpsB基因測(cè)序及序貫mPCR識(shí)別出的肺炎鏈球菌血清6群菌株進(jìn)一步細(xì)分其血清型。材料與方法收集cpsB基因測(cè)序及序貫mPCR方法均鑒定為血清6群的27株肺炎鏈球菌菌株DNA。用特異性引物wciP584aS/wciP-r(6B)和wciP584gS/wciP-r(6A),通過(guò)單步PCR擴(kuò)增wciP基因,初步將血清6群菌株區(qū)分為血清型6A/6C與6B/6D；對(duì)血清型6A/6C與6B/6D菌株,用特異性引物wciNβS1/wciNβA2再次采用單步PCR擴(kuò)增wciNβ基因,從6A/6C與6B/6D中分別區(qū)分血清型6C與6D菌株。結(jié)果27株cpsB測(cè)序和序貫mPCR方法均鑒定為血清6群的肺炎鏈球菌,我們采用血清型6A-6D特異PCR細(xì)分血清型,發(fā)現(xiàn)12株血清型6A(12/27,44.4%),13株6B(13/27,48.1%),2株6C(2/27,7.4%),沒(méi)有發(fā)現(xiàn)6D菌株。結(jié)論本研究再次證實(shí)血清型6A-6D特異PCR方法能快速、簡(jiǎn)單、有效的區(qū)分血清6群肺炎鏈球菌。第四部分cpsB基因測(cè)序輔以mPCR、血清型6A-6D特異PCR檢測(cè)肺炎鏈球菌血清型的“雞尾酒”策略及臨床應(yīng)用目的應(yīng)用cpsB基因測(cè)序輔以?xún)?yōu)化的序貫mPCR、血清型6A-6D特異PCR的肺炎鏈球菌血清分型“雞尾酒”策略,對(duì)我院臨床收集193株肺炎鏈球菌進(jìn)行血清分型,并對(duì)耐藥性進(jìn)行檢測(cè)。旨在尋找一種適合于我國(guó)流行病學(xué)調(diào)查和研究的肺炎鏈球菌血清分型策略,并提供直接來(lái)自社區(qū)的肺炎鏈球菌血清型、耐藥性、疫苗覆蓋情況等資料。材料與方法收集2009年～2013年我院5歲以下住院兒童中肺炎鏈球菌性疾病的肺炎鏈球菌193株。首先采用cpsB基因測(cè)序初篩,確定血清序列型；對(duì)cpsB基因測(cè)序有歧義的結(jié)果或不能分型、新的cpsB序列型菌株應(yīng)用優(yōu)化的序貫mPCR方法明確血清型；對(duì)上述方法確定為血清6群的菌株應(yīng)用血清型6A-6D特異PCR方法細(xì)分血清型6A,6B,6C和6D。將本次研究中發(fā)現(xiàn)新的cpsB基因序列上傳GenBank。采用K-B法對(duì)193株菌進(jìn)行抗菌素藥物敏感試驗(yàn),根據(jù)美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)(CLSI)2013年版標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判讀。結(jié)果193株肺炎鏈球菌中共識(shí)別出16個(gè)血清型,分布情況如下：19F(34.7%),23F(17.1%),19A(11.9%),14(7.3%),15B/15C(6.7%),6B(6.7%),6A(6.2%),9V/9A(1.6%)；血清型6C,3,15F/15A,23A及20(各1.1%)及10B,28F/28A及34(各0.5%)。PCV-7和PCV-10覆蓋率均為67.4%,PCV-13覆蓋率為86.5%。但2歲以下兒童中PCV-7和PCV-10覆蓋率增至70.6%,PCV-13覆蓋率高達(dá)92%。cpsB1基因測(cè)序?qū)?93株菌初篩,34.2%菌株可預(yù)測(cè)至血清型水平,55.4%菌株可預(yù)測(cè)至血清群水平。初篩后,59.5%菌株序列型的結(jié)果需要進(jìn)一步采用優(yōu)化的序貫mPCR方法給予明確。大多數(shù)菌株血清型在序貫mPCR的前3個(gè)反應(yīng)中可以識(shí)別,僅5.7%的菌株需要進(jìn)行8個(gè)mPCR反應(yīng)。多重耐藥菌比例高達(dá)86.8%,最常見(jiàn)耐藥模式：紅霉素十克林霉素十復(fù)方新諾明。按非腦膜炎標(biāo)準(zhǔn)未檢測(cè)出耐青霉素肺炎鏈球菌,按腦膜炎標(biāo)準(zhǔn)和口服標(biāo)準(zhǔn)對(duì)青霉素耐藥性顯著增加,分別為88.6%和39.2%。結(jié)論 (1)對(duì)國(guó)內(nèi)尚無(wú)法采用傳統(tǒng)莢膜腫脹試驗(yàn)進(jìn)行SP血清分型的地區(qū),本研究建立的cpsB基因測(cè)序輔以?xún)?yōu)化的序貫mPCR、血清型6A-6D特異PCR的“雞尾酒”策略是一個(gè)值得推廣的分子生物學(xué)檢測(cè)策略；(2)血清型19A已經(jīng)成為南方沿海地區(qū)一個(gè)常見(jiàn)的血清型；PCV-13血清覆蓋率高,可為本地區(qū)兒童提供更好的免疫保護(hù)；血清15群(尤其15B/15C)的比例高于國(guó)內(nèi)其它地區(qū)報(bào)道值得引起關(guān)注；(3)小于5歲兒童肺炎鏈球菌多重耐藥比例高,應(yīng)避免使用紅霉素、克林霉素和復(fù)方新諾明治療PDs,對(duì)非腦膜炎SP感染臨床醫(yī)生仍可選用青霉素,避免選擇壓力,保護(hù)三代頭孢菌素敏感性,腦膜炎SP感染則需參考藥敏結(jié)果選擇敏感抗生素。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R725.1;R440

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10 陸德源;;肺炎鏈球菌表面蛋白A是肺炎鏈球菌的一種乳鐵蛋白結(jié)合蛋白[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(微生物學(xué)分冊(cè));2000年02期

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1 周忠華;劉華;喻華;;69株肺炎鏈球菌的體外抗菌藥物活性研究[A];中華醫(yī)院管理學(xué)會(huì)第十一屆全國(guó)醫(yī)院感染管理學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2004年

2 唐恒;陳勃江;李為民;;219株呼吸道肺炎鏈球菌的分離及耐藥性分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第12次全國(guó)內(nèi)科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

3 張媛媛;王一雯;孫勝利;賀建平;;耐青霉素性肺炎鏈球菌致急性化膿性腦膜炎1例[A];第九屆西北五�。▍^(qū)）檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2005年

4 吳佳學(xué);季海生;朱德全;;兒科痰培養(yǎng)肺炎鏈球菌耐藥分析對(duì)臨床的指導(dǎo)作用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議資料匯編[C];2008年

5 黃小翠;崔亞利;;兒童使用的肺炎鏈球菌疫苗研究進(jìn)展[A];第一次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)專(zhuān)業(yè)委員會(huì)成立大會(huì)論文匯編[C];2014年

6 胡惠麗;胡翼云;何樂(lè)健;沈敘莊;高薇;楊永弘;;肺炎鏈球菌在兒童社區(qū)獲得性肺炎死亡病例中致病地位的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十四次全國(guó)兒科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

7 胡慶豐;呂火祥;沃銘毅;;53例呼吸道分離的肺炎鏈球菌耐藥性分析[A];2007年浙江省醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2007年

8 高薇;姚開(kāi)虎;俞桑潔;楊永弘;;2000～2005年分離自北京兒童鼻咽部的19群肺炎鏈球菌的耐藥性變化[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第五次全國(guó)兒科中青年學(xué)術(shù)交流大會(huì)論文匯編（上冊(cè)）[C];2008年

9 余素飛;厲世笑;傅鷹;陳慧紅;朱海燕;陳文嫻;張慧娜;;肺炎鏈球菌對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)的耐藥機(jī)制研究[A];2011年浙江省檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2011年

10 黃勇;萬(wàn)根平;顧曉瓊;鄧秋連;梁柳;鐘華敏;;廣州地區(qū)兒童感染肺炎鏈球菌耐藥相關(guān)基因的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議資料匯編[C];2008年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 北京兒童醫(yī)院微生物免疫室 姚開(kāi)虎;接種哪種肺炎鏈球菌疫苗好[N];健康報(bào);2007年

2 鄧力;肺炎鏈球菌易攻擊小孩和老人[N];健康報(bào);2007年

3 記者 王丹;兒童肺炎鏈球菌性疾病防治指南發(fā)布[N];健康報(bào);2010年

4 周密;山羊可能感染了肺炎鏈球菌病[N];江蘇農(nóng)業(yè)科技報(bào);2010年

5 記者 吳偉農(nóng);美科學(xué)家繪制出肺炎鏈球菌基因圖譜[N];新華每日電訊;2001年

6 本報(bào)記者 李穎;肺炎鏈球菌遇流感病毒危害更大[N];科技日?qǐng)?bào);2010年

7 衛(wèi)生部北京醫(yī)院 張秀珍;肺炎鏈球菌對(duì)青霉素耐藥率上升快[N];健康報(bào);2008年

8 中華醫(yī)學(xué)會(huì)公共衛(wèi)生學(xué)分會(huì)主任委員 曾光;秋冬季請(qǐng)呵護(hù)好“呼吸大道”[N];健康報(bào);2010年

9 記者 毛黎;遨游天宇的特殊客[N];科技日?qǐng)?bào);2007年

10 記者 鄭靈巧;流感繼發(fā)肺炎鏈球菌疾病危害大[N];健康報(bào);2010年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 李瓊;肺炎鏈球菌自溶素LytA的結(jié)構(gòu)和功能研究[D];中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué);2015年

2 曾憲飛;DprA蛋白在肺炎鏈球菌毒力中的作用研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2014年

3 金萍;以cpsB基因測(cè)序?yàn)橹鞯男蜇灧肿由飳W(xué)方法檢測(cè)肺炎鏈球菌血清型及臨床應(yīng)用研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2016年

4 陳蓉;兒童呼吸道感染病原學(xué)及肺炎鏈球菌耐藥的分子流行病學(xué)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

5 張巧;肺炎鏈球菌毒力蛋白基因工程疫苗的實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2010年

6 孟江萍;應(yīng)用啟動(dòng)子誘捕策略篩選并初步鑒定肺炎鏈球菌宿主體內(nèi)誘導(dǎo)基因[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2005年

7 張雪梅;肺炎鏈球菌轉(zhuǎn)化對(duì)細(xì)菌毒力和耐藥性影響的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2003年

8 馬千里;肺炎鏈球菌毒力蛋白基因工程疫苗優(yōu)勢(shì)抗原篩選[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2009年

9 賁亞t ;肺炎鏈球菌HMG-CoA合成酶和還原酶基因克隆表達(dá)及功能研究[D];華中師范大學(xué);2008年

10 牛司強(qiáng);一種肺炎鏈球菌溶菌酶樣假想蛋白質(zhì)SP0987的結(jié)構(gòu)和功能研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 耿倩;蘇州地區(qū)呼吸道感染兒童肺炎鏈球菌攜帶率、耐藥現(xiàn)狀和分子流行病學(xué)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

2 趙博;肺炎鏈球菌融合蛋白PsaA-PcpA疫苗的應(yīng)用研究[D];吉林大學(xué);2016年

3 張濤;肺炎鏈球菌莢膜多糖血清型3結(jié)合疫苗的研制及免疫原性的研究[D];天津科技大學(xué);2015年

4 張紅;肺炎鏈球菌肽鏈內(nèi)切酶O（PepO）在宿主固有免疫激活中的作用及機(jī)制[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2016年

5 崔晶晶;一種具有CaPi礦化外殼的新型肺炎鏈球菌減毒活疫苗的構(gòu)建及其免疫保護(hù)效果及機(jī)制的初步探究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2016年

6 金春芳;肺炎鏈球菌性急性中耳炎中性粒細(xì)胞胞外捕獲網(wǎng)形成機(jī)制的初步研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2016年

7 李馬超;肺炎鏈球菌分子分型與耐藥性研究[D];中國(guó)疾病預(yù)防控制中心;2010年

8 高華;肺炎鏈球菌生物學(xué)特性鑒定及耐藥性分析[D];北京生物制品研究所;2004年

9 吳艷麗;肺炎鏈球菌表面粘附素A的原核表達(dá)和免疫保護(hù)性的初步研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2009年

10 姚成;肺炎鏈球菌耐藥性、分子流行病學(xué)和耐藥機(jī)制[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2002年

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本文編號(hào)：1504267