本文關(guān)鍵詞：重組人促紅細(xì)胞生成素抑制自噬減輕心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷

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【摘要】：目的:通過建立過氧化氫(H2O2)誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷模型,觀察不同濃度范圍的重組人促紅細(xì)胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)對(duì)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用,并初步探討rhEPO的保護(hù)作用對(duì)自噬的影響和可能的機(jī)制。方法:1.選取健康的SD雄性大鼠心臟的左心室心肌,利用改良組織塊貼壁法獲得心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞(cardica microvascular endothelial cells,CMECs);通過倒置顯微鏡對(duì)細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察,采用vWF因子相關(guān)抗原免疫熒光法對(duì)細(xì)胞進(jìn)行鑒定。2.采用H2O2構(gòu)建心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷模型,利用MTT比色法測(cè)定細(xì)胞存活率,確定H2O2處理細(xì)胞造成氧化應(yīng)激損傷的適宜時(shí)間和濃度。3.用不同濃度(5、10、20、40U/ml)rhEPO和200umol/l H2O孵育心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞,用MTT比色法測(cè)定細(xì)胞存活率,并用化學(xué)比色法測(cè)定不同rhEPO濃度下心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞上清液中乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)含量,確定rhEPO有效濃度范圍。4.用Western-blot方法檢測(cè)各組細(xì)胞LC3Ⅱ和Beclin1的蛋白表達(dá)量,觀察有效濃度范圍的重組人促紅細(xì)胞生成素(rhEPO)對(duì)氧化應(yīng)激模型中的心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞自噬水平的影響。5.用Western-blot方法檢測(cè)各組細(xì)胞p-mTOR的表達(dá)量,觀察不同濃度rhEPO對(duì)p-mTOR誘導(dǎo)表達(dá)的影響。結(jié)果:1.原代培養(yǎng)CMECs一周后,細(xì)胞形態(tài)多呈梭形和多角形等不規(guī)則形,形成單層緊密排列時(shí)呈鵝卵石樣結(jié)構(gòu);免疫熒光檢測(cè)FITC標(biāo)記vWF相關(guān)抗體陽(yáng)性率90%以上;2.與正常對(duì)照組相比,當(dāng)H2O2濃度為200umol/l,作用時(shí)間為2小時(shí),細(xì)胞生存狀態(tài)差,心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞存活率顯著降低(p0.05)。因此本實(shí)驗(yàn)選用200umol/l H2O2,處理2小時(shí),為建模濃度和時(shí)間。3.與正常對(duì)照組相比,200umol/l H2O2處理的各組細(xì)胞,存活率降低(P0.05),LDH釋放量增加(P0.05);不同濃度rhEPO預(yù)處理的細(xì)胞,與單純H2O2組相比,上述指標(biāo)可明顯逆轉(zhuǎn)(P0.05),但40U/mlrhEPO和20U/mlrhEPO相比,逆轉(zhuǎn)不明顯(P0.05)。4.與正常對(duì)照組相比,單純H2O2處理組LC3Ⅱ和Beclin1蛋白表達(dá)水平明顯增高(P0.05);不同濃度的rhEPO預(yù)處理后,LC3Ⅱ和Beclin1蛋白表達(dá)量可明顯減低,與單純H2O2組相比均具有顯著差異(P0.05)。5.與正常對(duì)照組相比,單純H2O2組p-mTOR的表達(dá)降低(P0.05);不同濃度的rhEPO預(yù)處理后,均能誘導(dǎo)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞p-mTOR的表達(dá)增高,與單純H2O2組相比有顯著差異(P0.05),且存在濃度依存性。結(jié)論:1.H2O2可以誘導(dǎo)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷并引起細(xì)胞過度自噬;2.一定濃度范圍內(nèi)rhEPO對(duì)H2O2誘導(dǎo)的心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷有保護(hù)作用,這種保護(hù)作用可能是與rhEPO激活PI3K/AKT/mTOR通路,抑制過氧化氫誘導(dǎo)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞過度自噬有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R725.4

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1 仲偉鑒,印木泉,浦躍樸;煤煙致大鼠肺細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的機(jī)制探討[J];勞動(dòng)醫(yī)學(xué);2000年03期

2 葛圣蕾;;自由基氧化應(yīng)激損傷在老齡化神經(jīng)變性疾病中的作用[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(老年醫(yī)學(xué)分冊(cè));2002年06期

3 王云;常志文;;硫氧還蛋白-1:一個(gè)新的疾病氧化應(yīng)激損傷標(biāo)志物[J];心臟雜志;2011年03期

4 丁銀慧;孫競(jìng);錢元霞;李蕓子;高靜;陳峗;;晚期糖基化終產(chǎn)物誘導(dǎo)人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷及線粒體功能紊亂[J];江蘇大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2014年03期

5 劉朝巍;張濤;楊卓;;氧化應(yīng)激損傷線粒體參與癲癇病理過程[J];中國(guó)病理生理雜志;2008年01期

6 谷峰;董振南;賈興旺;王玲;田亞平;;抗震救災(zāi)醫(yī)療隊(duì)員與受災(zāi)人員氧化應(yīng)激損傷指標(biāo)的比較研究[J];標(biāo)記免疫分析與臨床;2010年06期

7 陳文豪;陳浩;趙達(dá)君;喬慧蓮;易定華;;番茄紅素對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的作用及機(jī)制研究[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2014年11期

8 黎涌;招偉賢;;圍術(shù)期氧化應(yīng)激損傷及跨膜信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)研究進(jìn)展[J];國(guó)際麻醉學(xué)與復(fù)蘇雜志;2006年04期

9 張春霞;胡利民;康立源;劉利萍;郭虹;;腦缺血氧化應(yīng)激損傷及中藥拮抗作用研究進(jìn)展[J];中華中醫(yī)藥學(xué)刊;2007年12期

10 張德迎;魏光輝;何大維;劉星;林濤;李旭良;;葉下珠植物提取物保護(hù)鹽酸氮芥對(duì)小鼠睪丸組織的氧化應(yīng)激損傷[J];生殖與避孕;2008年12期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 顏建英;;子癇前期與氧化應(yīng)激損傷[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第三次全國(guó)妊娠期高血壓疾病學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2011年

2 王詠波;王茜;于振乾;杜建玲;;窖蛋白-1在波動(dòng)性高糖誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷中的作用及機(jī)制[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十次全國(guó)內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

3 呂萍萍;范瑩;陳瑩瑩;朱立;沈岳良;;環(huán)加氧酶2抑制劑對(duì)抗心肌氧化應(yīng)激損傷中的作用及機(jī)制[A];浙江省生理科學(xué)會(huì)2006年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2006年

4 胡凱騫;張龍澤;陳春英;孫寶云;邢更妹;趙保路;趙宇亮;聶廣軍;;功能化富勒烯衍生物效應(yīng)探索:延長(zhǎng)線蟲壽命和保護(hù)氧化應(yīng)激損傷的分子機(jī)理研究[A];第十一次中國(guó)生物物理學(xué)術(shù)大會(huì)暨第九屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)摘要集[C];2009年

5 韓婧;李學(xué)軍;;姜黃素通過誘導(dǎo)人內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生自噬抗氧化應(yīng)激損傷[A];全國(guó)第十二屆生化與分子藥理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2011年

6 方朝暉;鮑陶陶;章小平;;2型糖尿病中醫(yī)辨證與氧化應(yīng)激損傷相關(guān)性的研究[A];第九次全國(guó)中醫(yī)糖尿病學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2006年

7 張銘;陳懷生;楊大春;曾智;余敏;;同型半胱氨酸對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷及對(duì)IL-8分泌的影響[A];全國(guó)第九屆心臟學(xué)會(huì)第十二屆心功能學(xué)會(huì)《心臟雜志》編委會(huì)聯(lián)合學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2005年

8 王艷霞;劉儀;張偉;韓東寧;張?jiān)词?;血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2(ACE2)對(duì)大鼠腎氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制[A];中國(guó)生理學(xué)會(huì)消化內(nèi)分泌生殖代謝生理專業(yè)委員會(huì)2011年消化內(nèi)分泌生殖學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2011年

9 張婷;王凡;朱俊東;易龍;付鈺潔;糜漫天;;染料木黃酮對(duì)人血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用[A];重慶市營(yíng)養(yǎng)學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

10 齊華林;王俊;江薇;嚴(yán)海東;;瘦素在誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷中的作用[A];2007年浙滬兩地腎臟病學(xué)術(shù)年會(huì)資料匯編[C];2007年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 張中橋;復(fù)方丹參注射液對(duì)EPC氧化應(yīng)激損傷有保護(hù)作用[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2007年

2 記者 衣曉峰;我國(guó)首設(shè)中醫(yī)神志病學(xué)博士后科研工作站[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2014年

3 張中橋;復(fù)方丹參注射液對(duì)內(nèi)皮前體細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷有保護(hù)作用[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2006年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 孔寧;下調(diào)miR-100對(duì)RGC-5的作用及相關(guān)機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

2 賈濟(jì);神經(jīng)元還原穩(wěn)態(tài)減輕氧化應(yīng)激損傷的新機(jī)制[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

3 徐建雄;不同斷奶日齡仔豬的氧化應(yīng)激損傷及其機(jī)理研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

4 關(guān)鑫磊;內(nèi)源性小分子二甲基硫醚對(duì)氧化應(yīng)激損傷的作用及機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2015年

5 李揚(yáng)雪;MiR-210在過氧化氫誘導(dǎo)大鼠心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷中的作用及其機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2016年

6 劉靜;氧化應(yīng)激損傷在赭曲霉毒素A誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯中的作用及其可能機(jī)制的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2012年

7 易龍;黃酮類植物化學(xué)物抑制內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的結(jié)構(gòu)—效應(yīng)關(guān)系研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2010年

8 張立超;抗氧化劑在梗阻性黃疸大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)氧化應(yīng)激損傷中的應(yīng)用研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

9 符曉華;含二氟亞甲基異黃酮類化合物的合成及抗血管內(nèi)皮氧化應(yīng)激損傷活性測(cè)定[D];中南大學(xué);2006年

10 葉俊生;左卡尼汀在腎小管上皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷中的保護(hù)作用研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2010年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 周浩;Exendin-4減輕脂肪來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的機(jī)制研究[D];中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2015年

2 李貞;枸杞多糖對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2015年

3 張亞卓;小麥低聚肽對(duì)體外氧化應(yīng)激損傷腸上皮細(xì)胞保護(hù)作用及其機(jī)制的探討[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

4 宋少練;芍藥苷對(duì)晚期氧化蛋白產(chǎn)物誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的干預(yù)作用[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

5 王曉燕;干擾小分子蛋白Sulfiredoxin-1對(duì)大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷影響的初步研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

6 周思蕾;RACK1對(duì)肝細(xì)胞基本功能以及肝細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的影響[D];河南大學(xué);2015年

7 余貴泉;可變鐵池：細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷與心血管疾病[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

8 夏寧;肝再生增強(qiáng)因子在細(xì)胞線粒體氧化應(yīng)激損傷中的作用研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

9 王笑宇;龍血素A抗心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2015年

10 張晗;新型殼聚糖-Trolox納米顆粒對(duì)于過氧化氫誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用與機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2016年

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