本文關(guān)鍵詞：兒童腎病綜合征血清和尿液miRNAs的研究

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【摘要】：研究背景：兒童腎病綜合征(nephrotic syndrome, NS)是一種常見的小兒腎小球疾病,是由于多種病因造成腎小球基底膜通透性增高,大量蛋白從尿中丟失的臨床綜合征,其典型的臨床特征為蛋白尿、低蛋白血癥、高脂血癥和高度水腫。目前該病的發(fā)病機制尚未闡明。微小核糖核酸(microRNA, miRNA)是一類長約19-24個核苷酸的非編碼單鏈小分子RNA。它們通過與其靶基因mRNA分子的3'端非編碼區(qū)域(3'-untranslated region,3'UTR)互補匹配導(dǎo)致靶mRNA降解或轉(zhuǎn)錄后翻譯抑制從而調(diào)控靶基因表達,在多種生理病理過程中發(fā)揮著重要作用。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn),人血清及體液中存在穩(wěn)定而豐富的miRNA,且腫瘤、炎癥、自身免疫等多種疾病患者血清miRNA表達譜與健康人存在顯著差異,是疾病新的生物標志物。NS患兒血清及尿液是否也呈現(xiàn)其特有的miRNA的表達譜?miRNA能否作為該病新的血清學(xué)診斷指標?目前尚無文獻報道。因此,本文擬通過研究原發(fā)性兒童腎病綜合征患者血清和尿液中miRNAs的變化及其臨床應(yīng)用價值,為NS提供新的輔助檢測指標,也為進一步闡明發(fā)病機制提供理論和實驗依據(jù)。 研究方法：收集南京軍區(qū)南京總醫(yī)院2010-2011年期間在兒科住院的159例患兒治療前血清樣本(對激素治療敏感者135例,不敏感者24例)；對其中50例激素治療敏感患兒同時收集其治療后處于緩解期的血清樣本,并收集其中30例患兒治療前后尿液標本。另收集44例其他腎病患兒治療前血樣。以109例在南京市兒童醫(yī)院體檢的年齡、性別相匹配的正常兒童血清作對照。首先用高通量的TaqMan Low Density Array (TaqMan低密度芯片)技術(shù)檢測患兒及健康兒童的混合血清全基因組miRNA的表達量,篩選出患兒與正常對照比較表達上調(diào)的miRNA;然后用TaqMan實時熒光定量PCR(qRT-PCR)技術(shù)在在小量樣本(28例NS和27例正常對照)中篩選出5種在NS患兒中含量顯著升高的miRNA,并在大量樣本(98例NS和52例正常對照)中進行驗證,通過ROC曲線和Logistic回歸分析法評價miRNA的臨床診斷價值及對NS發(fā)病機制的影響。然后比較不同病理亞型NS患兒中miRNA表達是否有差異。此外,還在其他腎病患兒中檢測5種miRNA的含量,并比較激素敏感和耐藥患者miRNA表達含量。進一步,將篩選出的miRNAs在50例患兒中進行治療前后比較,了解它們評判治療效果的能力；最后,測定這些miRNAs在患兒尿液中的含量。 研究結(jié)果：TaqMan低密度芯片檢測發(fā)現(xiàn),在所測的754種miRNAs中,有30種miRNAs在患兒組上調(diào)(2倍以上)。qRT-PCR復(fù)篩顯示有5種(?)miRNA包括：miR-30a-5p, miR-151-3p, miR-150, miR-191和miR-19b在患兒血清中的表達量顯著上升(至少P0.05)。復(fù)篩組結(jié)果在驗證組中得到進一步證實(變化倍數(shù)為2.84-4.34倍,P0.0001)。這5種miRNAs組合在一起的ROC曲線下面積及OR值分別為0.902(95%CI,0.860-0.944,P0.0001)和40.695(95%CI,6.056-103.145,P0.0001)。在其他腎病患兒血清中,只有miR-30a-5p, miR-150和miR-19b在紫癜性腎炎中有變化,5種miRNAs在不同的NS病理類型中沒有顯著差異。隨著患兒病情改善,這5種fniRNAs含量顯著降低(P0.0001)。尿液中miR-30a-5p含量顯著上升(P=0.001),病情緩解后則顯著下降。 結(jié)論：NS患兒血清miRNA表達譜與正常對照有明顯差異,其中miR-30a-5p, miR-151-3p, miR-150, miR-191和miR-19b的含量顯著升高,miR-30a-5p在患兒尿液中的含量也明顯升高,且隨病情好轉(zhuǎn)明顯下降。這些miRNAs可作為兒童腎病綜合征潛在的分子標志物,具有診斷和評判治療效果的價值。
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R726.9

【共引文獻】

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本文編號：1243542