本文關(guān)鍵詞：光照改變對金黃地鼠下丘腦—垂體—性腺軸影響的觀察

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【摘要】：目的：采用褪黑素分泌晝夜節(jié)律明顯的金黃地鼠為研究對象,觀察光照強(qiáng)度、光照時間對金黃地鼠下丘腦-垂體一性腺軸及相關(guān)因子的影響,尤其是中樞下丘腦-垂體-性腺軸相關(guān)神經(jīng)肽及其受體的影響：探討光信號改變誘發(fā)的動物中醫(yī)證型初步符合“陰虛火旺”證型,為后期“以藥測證”反證該證型提供動物模型。 方法：2日齡雌性、雄性金黃地鼠各4窩,隨機(jī)分為正常組(N,501ux)、16小時弱光組(M1,501ux)、16小時強(qiáng)光組(M2,3501ux)、和20小時強(qiáng)光組(M3,3501ux),每組10只幼鼠,1只母鼠；21日齡斷乳后每只金黃地鼠分別單獨(dú)喂養(yǎng)于特制鼠籠,體積為50cmx40cmx30cm。 全部采用人工光照、隔離太陽光,動物架上每層置40W日光燈1盞,每個房間單獨(dú)使用定時器進(jìn)行光照條件的控制,正常組固定于早上7：00開始光照,19：00熄燈(12h/12h:121ight/12dark),光照強(qiáng)度為501ux；16小時弱光組固定于早上3點(diǎn)開始光照,19：00熄燈(16h/8h:16light/8dark),光照強(qiáng)度為501ux；16小時強(qiáng)光組固定于早上3點(diǎn)開始光照,19：00熄燈(16h/8h:16light/8dark),調(diào)整鼠籠與燈的距離,光強(qiáng)度控制在3501ux；20小時強(qiáng)光組固定于早上1點(diǎn)開始光照,20：00熄燈(20h/4h:201ight/4dark),光強(qiáng)度控制在3501ux。 從金黃地鼠2日齡持續(xù)光照干預(yù)至28日齡,在金黃地鼠28日齡時取外周血、下丘腦、垂體、卵巢以及子宮,計算體重增長水平、子宮、卵巢、睪丸濕重及其器官指數(shù),采用Real-time PCR法檢測金黃地鼠下丘腦GnRH、GnIH、Mellc,垂體GnRHR (GPR54)、GnIHR (GPR147)以及子宮、卵巢、睪丸GnRHR的mRNA表達(dá)變化；實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計分析。 結(jié)果： 一、光照對金黃地鼠一般情況、外周性腺相關(guān)指標(biāo)的影響 雌性： ①一般情況：光照組出現(xiàn)明顯的躁動不安、易激惹狀態(tài),皮毛光澤度較正常組差,進(jìn)食量、飲水量減少,并且M3組體重增加幅度明顯大于正常組(P=0.05)；而M1組和M2組體重增長幅度顯著落后于正常組(P0.05)； ②性器官濕重及其器官指數(shù)：M1組子宮濕重(0.072±0.01g)、卵巢濕重(0.038±0.00g)、子宮指數(shù)(13.77±3.2)、卵巢指數(shù)(7.15±0.8)與N組子宮濕重(0.067±0.02g)、卵巢濕重(0.032±0.01g)、子宮指數(shù)(12.66±4.3)、卵巢指數(shù)(5.72±2.2)比較P值分別為0.658、0.055、0.553、0.07；M2組子宮濕重(0.047±0.02g)、卵巢濕重(0.030±0.01g)、子宮指數(shù)(8.87±2.9)、卵巢指數(shù)(5.77±1.2)與N組相應(yīng)參數(shù)比較P值分別為0.099,0.353,0.058,0.916；M3組子宮濕重(0.057±0.02g)、卵巢濕重(0.029±0.01g)、子宮指數(shù)(12.72±3.4)、卵巢指數(shù)(6.28±0.8)與N組相應(yīng)參數(shù)比較P值分別為0.134,0.297,0.857,0.537；M2組與M1組相應(yīng)參數(shù)比較P值分別為0.014、0.012、0.015、0.094；M3組與M2組相應(yīng)參數(shù)比較P值分別為0.237、0.913、0.043、0.504。 ③性發(fā)育相關(guān)激素水平：實(shí)驗(yàn)組E2水平顯著落后N組E2水平,M1組E2水平(66.81±16.1pg/m1)與N組(95.25±25.79pg/m1)比較P值為0.002；M2組E2水平(72.57±15.21pg/m1)與N組比較P值為0.021,0.867,0.093；M3組E2水平(73.75±20.72pg/m1)N組比較P值為0.030,0.974,0.529；M2組E2水平與M1組比較P值為0.491；M3組E2水平與M2組比較P值為0.899。FSH、LH組間無顯著統(tǒng)計學(xué)差異。 ④子宮、卵巢HE切片分析：M1組子宮內(nèi)膜上皮(87.6±6.64μm)、子宮內(nèi)膜(261.67±21.82)、子宮肌層(145.51±16.07μm)、最大卵泡直徑(286.92±21.00μm)與N組子宮內(nèi)膜上皮(70.42±4.35μm)、子宮內(nèi)膜(248.38±18.05μm)、子宮肌層(156.84±10.65μm)、最大卵泡直徑(249.22±10.13μm)相比P值分別為0.083、0.648、0.579、0.115；M2組子宮內(nèi)膜上皮(86.19±7.15μm)、子宮內(nèi)膜(229.88±16.87μm)、子宮肌層(113.86±10.40μm)、最大卵泡直徑(260.95±22.40μm)與N組相應(yīng)參數(shù)比較P值分別為0.074,0.462,0.009,0.596；M3組子宮內(nèi)膜上皮(97.94±7.84μm)、子宮內(nèi)膜(288.00±21.36μm)、子宮肌層(142.08±19.11μm)、最大卵泡直徑(315.43±17.53μm)與N組相應(yīng)參數(shù)比較P值分別為0.006,0.184,0.497,0.001；M2組與M1組相應(yīng)參數(shù)比較P值分別為0.884、0.278、0.157、0.325；M3組與M2組相應(yīng)參數(shù)比較P值分別為0.239、0.054、0.206、0.039。 雄性： ①一般情況：與雌性金黃地鼠出現(xiàn)類似的精神、毛色改變；斷乳后(21日齡)持續(xù)干預(yù)至地鼠28日齡,體重增長幅度M1組(17.63±4.07)、M2組(14.23±2.06)、M3組(19.07±3.43)與N組(26.71±3.09)比較P值均小于0.001； ②性器官濕重及其器官指數(shù)：M1組睪丸濕重(0.57±0.05g)、睪丸指數(shù)(102.2±7.0)與N組睪丸濕重(0.57±0.03g)、睪丸指數(shù)(93.6±3.4)比較相應(yīng)P值為0.444、0.176；M2組睪丸濕重(0.59±0.03g)、睪丸指數(shù)(103.1±3.7)與N組相應(yīng)參數(shù)比較P值分別為0.594,0.88；M3組睪丸濕重(0.69±0.03g)、睪丸指數(shù)(117.0±3.4)與N組相應(yīng)參數(shù)比較P值分別為0.015,0.004；M2組與M1組相應(yīng)參數(shù)比較P值分別為0.241、0.176；M3組與M2組相應(yīng)參數(shù)比較P值分別為0.053、0.29。 ③性發(fā)育相關(guān)激素水平：M1組外周血T (1.21±0.24ng/ml)、FSH (21.41±1.22mIU/ml)、LH (52.86±2.07mIU/ml)與N組T (0.79±0.07ng/ml)、FSH (21.75±0.55mIU/ml)、LH (51.19±0.82mIU/ml)比較P值分別為0.031、0.289、0.084；M2組外周血T(1.14±0.13ng/ml)、FSH(20.56±0.80mIU/ml)、LH(51.37±3.13mIU/ml)與N組相應(yīng)參數(shù)比較P值分別為0.014,0.220,0.889；M3組外周血T (1.08±0.11ng/ml)、FSH (21.31±0.35mIU/ml)、LH(50.84±3.48mIU/ml)與N組相應(yīng)參數(shù)比較P值分別為0.034,0.596,0.765；M2組與M1組相應(yīng)參數(shù)比較P值分別為0.529、0.276、0.152；M3組與M2組相應(yīng)參數(shù)比較P值分別為0.652、0.73、0.656； ④睪丸HE切片分析：睪丸HE切片發(fā)現(xiàn)正常組睪丸生精上皮形態(tài)良好,不同發(fā)育階段生精細(xì)胞有序排列,分別為精原細(xì)胞、初級精母細(xì)胞、次級精母細(xì)胞、精子細(xì)胞,尚未出現(xiàn)成熟的精子細(xì)胞。光照組睪丸生精上皮基本形態(tài)良好,未出現(xiàn)病理性損傷,生精細(xì)胞發(fā)育良好,未出現(xiàn)成熟的精子。 二、光照對金黃地鼠HPG軸相關(guān)神經(jīng)肽及其受體mRNA水平的影響 雌性： ①下丘腦GnRH、GnIH以及Mellc mRNA表達(dá)：M1組下丘腦GnRH(0.17±0.05)、 GnIH (10.68±3.11)、Mellc(0.15±0.03) mRNA與N組下丘腦GnRH(0.55±0.22)、 GnIH(4.48±1.14)、Mellc (0.45±0.08)mRNA比較P值分別為0.217、0.121、0.004；M2組下丘腦GnRH (0.28±0.03). GnIH (11.92±0.69)、Mellc(0.19±0.05) mRNA與與N組相應(yīng)參數(shù)比較P值分別為0.331,0.001,0.026；M2組相應(yīng)參數(shù)與M1組比較P值分別為0.741、0.139、0.530。 ②垂體GPR54、GPR147mRNA表達(dá)：M1組垂體GnRHR (237.13±34.3)、GnIHR (0.084±0.038) mRNA與N組垂體GnRHR (171.69±45.1)、GnIHR (1.96±1.21) mRNA比較P值分別為0.142、0.366；M2組垂體GnRHR (90.4±26.3)/GnIHR (0.55±0.15) mRNA與N組相比P值分別為0.29,0.319；M2組相應(yīng)參數(shù)與M1組比較P值分別為0.010、0.146。 ③子宮、卵巢GPR54mRNA水平：M1組子宮GnRHR mRNA(1.24±0.69)、卵巢GnRHR mRNA(2.33±0.98)與N組子宮GnRHR mRNA(0.62±0.32)、卵巢GnRHR mRNA (1.51±2.44)相比對應(yīng)P值分別為0.353,0.523；M2組子宮GnRHR mRNA(0.24±0.07)、卵巢GnRHR mRNA(0.23±0.07)與N組相比對應(yīng)P值分別為0.543,0.309；M2組對應(yīng)參數(shù)與M1組比較P值分別為0.149、0.046。 雄性： ①下丘腦GnRH、GnIH以及Mellc mRNA表達(dá)：M1組下丘腦GnRH mRNA (0.37±0.13)、GnIH mRNA(8.95±3.02)、Mellc mRNA (0.19±0.09)與N組下丘腦GnRH mRNA (0.42±0.17)、 GnIH mRNA (0.70±0.15)、Mellc mRNA (0.99±0.56)比較對應(yīng)P值為0.73、0.019、0.005；M2組下丘腦GnRH mRNA (0.11±0.02)、 GnIH mRNA (1.15±0.18)、 Mellc mRNA (0.19±0.07)與N組相應(yīng)參數(shù)比較P值分別為0.132,0.948,0.018；M3組下丘腦GnRH mRNA (0.19±0.04)、GnIH mRNA(7.99±2.06)、Mellc mRNA (0.13±0.04)與N組相應(yīng)參數(shù)比較P值分別為0.071,0.038,0.068；M2組與M1組相應(yīng)參數(shù)比較P值分別為0.027、0.022、0.99；M3組與M2組相應(yīng)參數(shù)比較P值分別為0.416、0.044、0.70； ②垂體GPR54、GPR147mRNA表達(dá)：M1組垂體GnRHR mRNA(140.57±21.47)、 GnIHR mRNA (0.63±0.11)與N組垂體GnRHR mRNA (254.46±52.78)、GnIHR mRNA (8.83±3.09)比較對應(yīng)P值為0.052、0.004；M2組垂體GnRHR mRNA (191.17±28.68)、GnIHR mRNA (0.81±0.26)與N組相應(yīng)參數(shù)比較P值分別為0.285,0.005；M3組垂體GnRHR mRNA(193.29±41.21)、GnIHR mRNA (1.18±0.64)與N組相應(yīng)參數(shù)比較P值分別為0.274,0.005；M2組與M1組相應(yīng)參數(shù)比較P值分別為0.39、0.941；M3組與M2組相應(yīng)參數(shù)比較P值分別為0.971、0.876。 結(jié)論： 一、光照改變可使金黃地鼠出現(xiàn)陰虛火旺表現(xiàn) 通過延長光照時間金黃地鼠出現(xiàn)明顯的躁動不安、易激惹狀態(tài),皮毛光澤度差,進(jìn)食量、飲水量減少,體重下降,這些現(xiàn)象提示延長光照的金黃地鼠存在陰虛火旺證。 二、光照改變對外周性器官有一定的影響 1)雌性金黃地鼠光照時間延長,光照強(qiáng)度增加,子宮內(nèi)膜上皮厚度和最大卵泡直徑顯著增加,而子宮肌層呈現(xiàn)下降趨勢。 同一光照強(qiáng)度,延長光照時間雖然子宮指數(shù)、卵巢指數(shù)、子宮內(nèi)膜上皮、子宮內(nèi)膜、子宮肌層,但無顯著統(tǒng)計學(xué)差異,但卵泡直徑顯著增加；16小時光照時間,增加光照強(qiáng)度呈現(xiàn)抑制作用,表現(xiàn)為子宮、卵巢濕重、子宮指數(shù)以及子宮內(nèi)膜上皮、子宮內(nèi)膜、子宮肌層呈下降趨勢。 2)雄性金黃地鼠,延長光照強(qiáng)度、光照時間,光照組睪丸濕重及其指數(shù)顯著上升,且光照時間延長、光照強(qiáng)度延長不會造成睪丸病理性損傷。 三、光照改變對性發(fā)育相關(guān)激素有一定的影響 延長光照時間或增加光照強(qiáng)度,雌性金黃地鼠E2含量下降,而雄性金黃地鼠T含量顯著上升,二者FSH、LH變化不大,光照條件對性發(fā)育相關(guān)激素、外周性腺的影響不同步。 四、光照改變能影響金黃地鼠下丘腦-垂體-性腺軸相關(guān)神經(jīng)肽及其受體基因的表達(dá) 1)對于雌性金黃地鼠,延長光照時間或增加光照強(qiáng)度,下丘腦Mellc基因顯著下降,GnIH mRNA顯著上升,而下丘腦GnRH mRNA有一定的下降趨勢；垂體GPR54, GPR147mRNA有下降趨勢,考慮延長光照時間或增加光照強(qiáng)度對性腺軸有抑制作用。 2)對于雄性金黃地鼠,延長光照時間、增加光照強(qiáng)度對性腺軸同樣起抑制作用,表現(xiàn)為下丘腦GnIH mRNA顯著上升,垂體GPR147mRNA顯著下降以及下丘腦GnRH mRNA有一定的下降趨勢。
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R725.8

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1235707