本文關(guān)鍵詞：維生素D受體在病毒性心肌炎小鼠心肌中的表達(dá)

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【摘要】：目的通過建立病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)動(dòng)物模型,動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)維生素D受體(vitamin D receptor,VDR)在VMC小鼠心肌中的表達(dá)水平。進(jìn)一步觀察VDR在VMC小鼠心肌中的表達(dá)與小鼠心肌炎性病理改變的相關(guān)性。探討VDR參與小鼠VMC免疫炎性機(jī)制的可能作用。方法將人喉癌上皮細(xì)胞Hep-2細(xì)胞復(fù)蘇傳代,用柯薩奇B3病毒(coxsackievirus B3,CV B3)感染該細(xì)胞,擴(kuò)增病毒,增加病毒毒力,當(dāng)達(dá)到一定毒力后,測(cè)定CVB3的半數(shù)組織感染劑量(50%tissue culture infective dose,TCID50),收集病毒備用。選取120只4周齡雄性BALB/c無特定病原體級(jí)(SPF)小鼠,隨機(jī)分為兩組,實(shí)驗(yàn)組80只,對(duì)照組40只。其中實(shí)驗(yàn)組80只小鼠腹腔注射適量CVB3制備VMC模型,對(duì)照組40只小鼠則腹腔注射等量的DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液。密切觀察小鼠生長(zhǎng)情況,分別在腹腔注射后第3d、7d、14d和28d,實(shí)驗(yàn)組各處死15只小鼠,對(duì)照組則各處死10只小鼠,取得小鼠的心臟標(biāo)本。用免疫組織化學(xué)技術(shù)(immunohistochemitry,IHC)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組小鼠心肌組織的VDR的動(dòng)態(tài)表達(dá)情況,并與相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組小鼠VDR表達(dá)情況對(duì)比分析;用HE染色觀察小鼠心肌的病理變化,進(jìn)行心肌病理評(píng)分。探討分析VMC小鼠心肌VDR的表達(dá)與心肌病理變化之間的相關(guān)性。結(jié)果(1)Balb/c雄性小鼠經(jīng)腹腔注射CVB3成功制備VMC小鼠模型。實(shí)驗(yàn)組小鼠在注射病毒3d后,活動(dòng)量、飲食量開始減小,出現(xiàn)掉毛現(xiàn)象;注射病毒第7d左右,小鼠精神萎靡,毛發(fā)稀疏,體格消瘦,小鼠共死亡19只,為死亡高峰期,統(tǒng)計(jì)死亡率為23.75%。對(duì)照組小鼠則精神、飲食和活動(dòng)情況良好,無明顯掉毛現(xiàn)象,沒有出現(xiàn)死亡。在小鼠處死取出心臟標(biāo)本后,CMV實(shí)驗(yàn)組小鼠心臟外膜可見到明顯壞死病灶,呈現(xiàn)不規(guī)則圖形的白斑。而對(duì)照組小鼠心臟未見壞死的白斑。(2)經(jīng)HE染色,對(duì)小鼠心肌組織進(jìn)行組織病理學(xué)觀察。在病毒接種后第3d,小鼠心肌細(xì)胞開始出現(xiàn)少量炎癥細(xì)胞侵潤(rùn);在第7d時(shí),小鼠心肌組織炎癥壞死達(dá)到高峰,可見心肌溶解,出現(xiàn)了大片的壞死病灶;在病毒接種后第14d,心肌局部炎癥、壞死病灶可見吸收。第28d時(shí),小鼠心肌大部分壞死病灶已吸收。對(duì)照組小鼠心肌排列整齊,無炎癥浸潤(rùn)。(3)接種病毒的實(shí)驗(yàn)組小鼠心肌組織,經(jīng)IHC染色后,可觀察到VDR表達(dá)顯著升高。并在病毒注射第7d時(shí),VDR表達(dá)水平達(dá)到高峰,染色加強(qiáng),隨后逐漸下降,但在第28d時(shí)仍處于較高水平。在第3d、7d、14d和28d,實(shí)驗(yàn)組小鼠VDR表達(dá)水平分別為:2.39±0.23、5.45±0.30、4.19±0.26、2.52±0.28。對(duì)照組小鼠在第3d、7d、14d和28d,VDR表達(dá)水平則分別為:1.64±0.23、1.66±0.19、1.68±0.29、1.64±0.36。各時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組小鼠VDR表達(dá)水平均高于對(duì)照組,差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。(4)對(duì)實(shí)驗(yàn)組小鼠心肌VDR表達(dá)水平與其心肌病理變化進(jìn)行相關(guān)性分析,其結(jié)果為:第3d,r=0.927,P0.01;第7d,r=0.894,P0.01;第14 d,r=0.820,P0.01;第28 d,r=0.859,P0.01;結(jié)果均提示小鼠心肌VDR的表達(dá)量與病理積分呈正相關(guān)。結(jié)論VDR可能通過免疫調(diào)節(jié),參與了VMC發(fā)病的炎性免疫過程。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R725.4

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