本文關(guān)鍵詞：先天性巨結(jié)腸差異IncRNA-mRNA共表達譜芯片初步篩查研究

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【摘要】：目的:通過芯片篩查出先天性巨結(jié)腸病變段腸管與正常段腸管中差異lnc RNA-m RNA共表達譜,并對其進行功能分析,探索lnc RNA在HD中的作用及其作用機制,為HD早期診斷、早期治療提供實驗依據(jù)。方法:收集2013年10月到2015年9月期間在遵義醫(yī)學院附屬醫(yī)院小兒普胸泌外科確診為先天性巨結(jié)腸并進行手術(shù)治療的17例患兒標本(病變段及正常段腸管);選取其中5例患者的標本(共10段腸管)進行人類lnc RNA-m RNA共表達譜芯片篩查,同時采用Agilent Gene Spring軟件對差異表達的lnc RNA、m RNA進行篩選。對篩查出差異表達明顯的lnc RNA進行實時熒光定量PCR(q RT-PCR)驗證;采用生物信息學的方法分析lnc RNA、m RNA在先天性巨結(jié)腸的作用。結(jié)果:芯片結(jié)果顯示在先天性巨結(jié)腸病變段腸管中有353個表達明顯上調(diào)的lnc RNA,有474個明顯下調(diào)的lnc RNA(選擇標準為差異倍數(shù)2,P0.05)。m RNA的表達中有865個明顯上調(diào),461個明顯下調(diào)(選擇標準為差異倍數(shù)2,P0.05)。對其中6個顯著差異表達的lnc RNA(TCONS_00029197、ENST00000438136.1ENST00000445908.1、ENST00000455286.1、ENST00000579378.1和TCONS_00028253)進行q RT-PCR驗證?其中TCONS_00029197、ENST00000445908.1、ENST00000455286.1在先天性巨結(jié)腸中表達顯著上調(diào),而ENST00000579378.1表達顯著下調(diào),P0.05,與芯片結(jié)果相符。ENST00000438136.1雖然在先天性巨結(jié)腸中存在表達上調(diào),但其差異表達不顯著,P0.05,無統(tǒng)計學意義。其中TCONS_00028253由于引物經(jīng)多次設(shè)計未成功,未進行差異表達分析。生物信息學分析結(jié)果顯示差異基因與細胞遷移、定植、軸突生長、細胞-基底粘附、酶活性等功能相關(guān)。結(jié)論:先天性巨結(jié)腸患兒病變段腸管和其正常段腸管中存在較多差異表達的lnc RNA和m RNA。lnc RNA和m RNA之間具有廣泛的聯(lián)系,形成共表達網(wǎng)絡(luò),lnc RNA可能是通過調(diào)控對應(yīng)m RNA影響細胞增殖、分化等來參與HD的發(fā)病。
【學位授予單位】：遵義醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R726.5

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