本文關(guān)鍵詞：MiR-19b過表達(dá)對(duì)P19細(xì)胞分化的影響

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【摘要】：目的：脊椎動(dòng)物的心臟是胚胎發(fā)育過程中最早形成并行使功能的器官，主要來源于中胚層間充質(zhì)細(xì)胞，其發(fā)生需經(jīng)過多細(xì)胞系特化、管狀結(jié)構(gòu)形成、最后精確組裝成成熟4個(gè)心腔結(jié)構(gòu)等發(fā)育過程，需要系列重要的形態(tài)發(fā)生事件，包括細(xì)胞決定、細(xì)胞遷移和細(xì)胞分化等，這些過程出現(xiàn)的時(shí)空順序暗示了種復(fù)雜的基因調(diào)控模式以保證胚胎心臟的協(xié)調(diào)發(fā)育。近年來，心臟發(fā)育的研究已經(jīng)取得了較大的進(jìn)展，然而心臟疾病發(fā)生的分子機(jī)制依然不很明確，更多的分子機(jī)制研究還需要進(jìn)步的開展。microRNA的出現(xiàn)，為我們帶來了新的研究思路。microRNA（miRNA）是類小分子非編碼單鏈RNA，，長約22個(gè)核苷酸，通過與靶mRNA3'非翻譯區(qū)（3'UTR）互補(bǔ)配對(duì)，抑制翻譯，從而在轉(zhuǎn)錄后水平對(duì)生物體內(nèi)基因時(shí)序性表達(dá)起到精細(xì)調(diào)節(jié)作用。近年來，大量研究表明microRNA在心臟發(fā)育、心肌肥厚、心力衰竭、心律失常以及高血壓等疾病的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用,使microRNA成為國際心血管研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)。P19細(xì)胞在特定的條件下能夠向心肌細(xì)胞分化，是研究心臟發(fā)育、基因調(diào)控的有用工具。miR-19b是通過芯片篩選出與心臟發(fā)育高度相關(guān)的種miRNA，本研究旨在探討miR-19b過表達(dá)對(duì)P19細(xì)胞分化的影響。 方法：脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染miR-19b過表達(dá)質(zhì)粒與空載質(zhì)粒進(jìn)入P19細(xì)胞，通過殺稻瘟菌素篩選出穩(wěn)定株；通過DMSO將穩(wěn)定表達(dá)miR-19b的細(xì)胞株進(jìn)行誘導(dǎo)分化，應(yīng)用普通倒置顯微鏡觀察細(xì)胞跳動(dòng)情況；實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)miR-19b表達(dá)水平以及分化基因（cTnT、ANP、GATA4）的表達(dá)水平。 結(jié)果：轉(zhuǎn)染miR-19b過表達(dá)質(zhì)粒與空載質(zhì)粒進(jìn)入P19細(xì)胞，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)證實(shí)miR-19b過表達(dá)載體與細(xì)胞系成功建立（P0.05）；在P19細(xì)胞分化過程中，miR-19b過表達(dá)組心肌細(xì)胞分化數(shù)量增多，且miR-19b過表達(dá)組心肌標(biāo)志物均顯著高于對(duì)照組（P均0.05）。miR-19b顯著促進(jìn)P19細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化。 結(jié)論：miR-19b過表達(dá)對(duì)P19細(xì)胞分化影響的研究，發(fā)現(xiàn)心肌細(xì)胞分化數(shù)量、標(biāo)志基因表達(dá)均明顯高于對(duì)照組， miR-19b可以顯著促進(jìn)P19細(xì)胞向心肌細(xì)胞的分化，為以后其用于心臟發(fā)育的進(jìn)步研究奠定基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R725.4

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 何秋霞;劉可春;楚杰;王思鋒;韓利文;王希敏;;斑馬魚作為模式生物在心血管疾病研究中的應(yīng)用[J];生命的化學(xué);2009年05期

2 黃冠群;孫建;簡志祥;區(qū)應(yīng)亮;侯寶華;區(qū)鑫銳;;利用芯片技術(shù)篩選肝癌早期復(fù)發(fā)密切相關(guān)的microRNA[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2011年10期

本文編號(hào)：1218919