發(fā)布時(shí)間：2017-11-14 00:28

  本文關(guān)鍵詞：腎單位腎癆的基因突變檢測(cè)與分析

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【摘要】：研究背景 腎單位腎癆（Nephronophthisis, NPHP; MIM256100）是一種常染色體隱性遺傳的慢性小管間質(zhì)性腎病，是導(dǎo)致兒童和青少年終末期腎病（ESRD）最常見(jiàn)的遺傳性疾病[1]。1951年，由Fanconi等首次報(bào)道[2]。據(jù)統(tǒng)計(jì)[3,4]，NPHP的發(fā)病率在加拿大活產(chǎn)嬰兒中為1/50,000，在美國(guó)為1/1,000,000。該病可以根據(jù)ESRD發(fā)生的年齡進(jìn)行臨床分型[1]：嬰兒型（infantile），少年型（juvenile）和青年型（adolescent），分別發(fā)生ESRD的平均年齡為1歲，13歲和19歲。國(guó)外研究資料表明，NPHP約占兒童慢性腎衰竭的10%-14%[5,6]。其中少年型屬最常見(jiàn)的表型，在歐洲占終末期腎臟病患兒的6%-10%[5]。國(guó)內(nèi)尚無(wú)該病的確切統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。該病發(fā)生ESRD之前，，臨床癥狀多無(wú)特異性，常常表現(xiàn)為多尿、煩渴、貧血等[7]。超聲檢查腎臟大小正�；蚩s小，回聲增強(qiáng)，皮髓質(zhì)分界不清，晚期可見(jiàn)腎臟皮髓質(zhì)交界區(qū)囊腫[8-11]。但嬰兒型NPHP除外，腎臟表現(xiàn)稍增大，常常易與多囊腎混淆[12]。組織病理學(xué)特點(diǎn)為腎小球球周和間質(zhì)纖維化，腎小管基底膜斷裂和腎小管擴(kuò)張并皮髓質(zhì)交界區(qū)囊腫形成的三聯(lián)征[13]。 由于該病起病隱匿，臨床表現(xiàn)缺乏特異性，僅表現(xiàn)為慢性腎衰竭的癥狀，無(wú)明顯的血尿和蛋白尿，無(wú)高血壓，雖屬于囊性腎臟疾病范疇，但囊腫多在疾病晚期出現(xiàn)甚至影像學(xué)檢查檢測(cè)不到。如有典型臨床表現(xiàn)，腎活檢提示腎小球周圍和腎間質(zhì)纖維化，腎小管基底膜增厚、變薄或斷裂，小管上皮細(xì)胞萎縮和腎小管囊性擴(kuò)張以及腎小球硬化和玻璃樣變等，可以診斷該病。但有時(shí)病理改變并不典型，因此，有學(xué)者提出腎臟病理僅具有輔助診斷價(jià)值，并不具有特異性[13]。近年來(lái)，隨著分子生物學(xué)研究的迅猛發(fā)展，分子遺傳學(xué)檢測(cè)成為診斷NPHP的重要手段，并且可以避免腎活檢的侵入性檢查[14]，同時(shí)有助于產(chǎn)前診斷和遺傳咨詢及優(yōu)生優(yōu)育。而且致病基因的不斷鑒定，有利于揭示該病的發(fā)病機(jī)制，為將來(lái)基因靶向治療奠定基礎(chǔ)。 目的： 對(duì)臨床擬診NPHP的6例患兒行基因突變檢測(cè)與分析，為臨床診斷提供依據(jù)，以及為計(jì)劃生育提供遺傳咨詢。 方法： 以6例臨床擬診NPHP患兒及其7名相關(guān)家系成員為研究對(duì)象。提取研究對(duì)象外周血基因組DNA，應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction, PCR）首先擴(kuò)增NPHP1基因內(nèi)多個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記及內(nèi)參標(biāo)記，根據(jù)各標(biāo)記擴(kuò)增產(chǎn)物的有無(wú)判斷是否存在純合缺失及缺失片段的大小。若不存在缺失，則依次擴(kuò)增NPHP1、NPHP4、NPHP5（IQCB1)、NPHP2（INVS）及NPHP3基因所有外顯子及其周圍的部分內(nèi)含子，并應(yīng)用上下游引物對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行直接測(cè)序，若有小片段缺失突變則進(jìn)行克隆測(cè)序并分析。10例尿檢正常的漢族成年人為對(duì)照人群。 結(jié)果： 1．臨床特征：男5例，女1例，診斷時(shí)年齡7月～13歲。其中臨床符合少年型NPHP診斷4例，符合嬰兒型NPHP診斷2例。僅1例有家族史，該患兒叔叔患囊腫性腎�。ň唧w不詳），因ESRD已行腎移植。6例均有生長(zhǎng)發(fā)育落后，以多飲、多尿就診2例，以面色蒼白、疲倦就診2例，以發(fā)現(xiàn)腎功能異常就診1例，以生長(zhǎng)發(fā)育落后就診1例。其中1例從小弱視，1例眼底檢查提示黃斑病變，其余眼底正常。5例24小時(shí)尿蛋白定量0.57±0.69g，腎功能不全I(xiàn)II期2例，IV期1例，腎衰竭3例。超聲顯示雙腎偏小5例，雙腎大小正常1例，全部表現(xiàn)皮質(zhì)回聲增強(qiáng)，皮髓質(zhì)分界模糊，4例雙腎發(fā)現(xiàn)大小不一囊腫。3例行CT顯示雙腎體積偏小，皮髓質(zhì)內(nèi)多發(fā)微囊狀強(qiáng)化減低影。3例行MRI水成像顯示雙腎體積偏小，腎實(shí)質(zhì)多發(fā)小點(diǎn)狀異常信號(hào)，多位于皮質(zhì)。 2．基因檢測(cè)結(jié)果：6例患兒NPHP1基因內(nèi)多個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記及內(nèi)參標(biāo)記均有擴(kuò)增產(chǎn)物，提示不存在NPHP1大片段純合缺失。4例少年型NPHP患兒均未檢出NPHP1、NPHP3基因外顯子突變，3例少年型NPHP患兒NPHP4基因IVS20-2AT雜合突變，其中1例為NPHP4基因IVS2-4delC/IVS20-2AT復(fù)雜雜合突變和NPHP5基因c.-147_-141delTGGGAG/c.1301GA復(fù)雜雜合突變。2例嬰兒型NPHP患兒NPHP2、NPHP3基因未檢出外顯子及剪接位點(diǎn)突變。 結(jié)論： 1．臨床出現(xiàn)多飲、多尿、貧血、生長(zhǎng)遲緩等表現(xiàn)，伴血肌酐升高，影像學(xué)顯示雙腎較同齡兒小或雙腎大小正常，皮髓質(zhì)分界不清，伴或不伴皮髓質(zhì)交界區(qū)囊腫的兒童，應(yīng)高度懷疑腎單位腎癆。 2．基因診斷是確診該病重要手段，并助于遺傳咨詢和指導(dǎo)。 3．本研究中少年型NPHP患兒未檢出NPHP1大片段純合缺失及其外顯子突變，NPHP4基因IVS20-2AT雜合突變可能是3例少年型NPHP患兒的致病突變。 4．本研究中未檢出嬰兒型NPHP患兒的NPHP2（INVS）和NPHP3基因外顯子突變。 5．存在未發(fā)現(xiàn)的嬰兒型NPHP其他位點(diǎn)突變，待進(jìn)一步研究。
【學(xué)位授予單位】：廣州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R726.9


本文編號(hào)：1183096