本文關(guān)鍵詞：早產(chǎn)兔生發(fā)基質(zhì)—腦室內(nèi)出血后腦組織Caspase-3及VEGF的動(dòng)態(tài)研究

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【摘要】：目的：早產(chǎn)兒生發(fā)基質(zhì)-腦室內(nèi)出血（germinal matrix hemorrhage-intraventricular hemorrhage，GMH-IVH）及其導(dǎo)致的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥是造成早產(chǎn)兒死亡和兒童神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙的常見(jiàn)疾病，我國(guó)早產(chǎn)兒GMH-IVH的發(fā)生率明顯高于發(fā)達(dá)國(guó)家，發(fā)生率為56.6%，其中重度出血發(fā)生率為16.3%，，且存活者約35％遺留慢性神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙，如腦癱、癲癇、學(xué)習(xí)困難和認(rèn)知異常等。目前研究顯示GMH-IVH后的繼發(fā)性腦損傷機(jī)制十分復(fù)雜，涉及炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、小膠質(zhì)細(xì)胞增生等多方面，但眾多因素之間有無(wú)關(guān)聯(lián)？有無(wú)最終共同途徑等目前尚無(wú)定論。有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究報(bào)道，成年大鼠發(fā)生急性創(chuàng)傷性腦損傷時(shí)伴有神經(jīng)細(xì)胞凋亡，并且神經(jīng)細(xì)胞凋亡與天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）表達(dá)間具有一致性，因此，有學(xué)者提出神經(jīng)細(xì)胞凋亡可能是顱腦創(chuàng)傷后繼發(fā)性腦損傷的最終途徑，但是關(guān)于新生動(dòng)物腦損傷后，尤其是新生早產(chǎn)動(dòng)物方面，是否有Caspase-3參與，類(lèi)似研究少見(jiàn)。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（Vascularendothelial growth factor，VEGF)，其在腦損傷后發(fā)揮的促進(jìn)新生血管生成、抗細(xì)胞凋亡、保護(hù)缺血腦組織的作用已在成年動(dòng)物模型中得到廣泛驗(yàn)證，但是關(guān)于早產(chǎn)動(dòng)物腦損傷后，尤其是新生的早產(chǎn)動(dòng)物方面，是否亦有VEGF的參與并發(fā)揮腦保護(hù)作用，尚無(wú)相關(guān)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)旨在通過(guò)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)早產(chǎn)兔GMH-IVH后腦組織Caspase-3及VEGF的表達(dá)及變化情況，探尋兩者是否參與早產(chǎn)兔GMH-IVH后的繼發(fā)性腦損傷，為早產(chǎn)兒GMH-IVH的治療提供新的思路。 方法： 1.將孕29天孕兔進(jìn)行剖宮產(chǎn)，迅速取幼兔，并給予保溫、奶粉喂養(yǎng)。將所取幼兔隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組，每組各取18只早產(chǎn)兔。于生后3小時(shí)，實(shí)驗(yàn)組的早產(chǎn)兔接受50%丙三醇腹腔注射，劑量為10ml/Kg，對(duì)照組的早產(chǎn)兔接受等劑量生理鹽水腹腔注射。 2.對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組早產(chǎn)兔分別于生后24小時(shí)接受頭顱超聲檢查，觀察GMH-IVH發(fā)生情況。選取接受丙三醇腹腔注射后發(fā)生GMH-IVH的早產(chǎn)兔15只，編為GMH-IVH模型組。將GMH-IVH模型組和對(duì)照組正常早產(chǎn)兔（15只）分別隨機(jī)分為生后24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)三個(gè)亞組，按上述時(shí)間點(diǎn)給予安樂(lè)死，迅速分離腦組織，選取腦室周邊區(qū)域組織并制成蠟塊，用切片機(jī)切成5微米厚的切片，供免疫組化和檢測(cè)凋亡用。 3.免疫組化法檢測(cè)GMH-IVH模型組與對(duì)照組早產(chǎn)兔腦室周邊區(qū)域組織的Caspase-3和VEGF的表達(dá)；TUNEL凋亡檢測(cè)試劑盒檢測(cè)上述部位腦組織神經(jīng)細(xì)胞凋亡的情況。免疫組化和TUNEL凋亡檢測(cè)均使用辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液顯色，以胞漿呈棕黃色顆粒為陽(yáng)性結(jié)果。 4.免疫組化和凋亡細(xì)胞測(cè)定實(shí)驗(yàn)中平均陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率的計(jì)算：高倍鏡下計(jì)數(shù)，采用imagepro-plus6.0圖像分析系統(tǒng)分別測(cè)出對(duì)照組與GMH-IVH模型組早產(chǎn)兔生后24h、48h、72h3個(gè)時(shí)間段每張切片陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率（%），每張切片取5個(gè)高倍視野，取平均值。 5.統(tǒng)計(jì)方法：采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件、Microsoft Excel2003進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)資料為計(jì)數(shù)資料，率的比較采用卡方檢驗(yàn)，兩兩間比較采用2×2表卡方檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)定為0.05，P值小于0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P 0.01時(shí)具有顯著差異。 結(jié)果： 1.成功地對(duì)母孕兔實(shí)施了剖腹產(chǎn)并建立了早產(chǎn)兔GMH-IVH模型。 2.腦組織Caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá) GMH-IVH早產(chǎn)兔腦組織標(biāo)本中Caspase-3平均陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率在生后24h、48h以及72h均高于對(duì)照組，差異有顯著性（P0.01）；GMH-IVH早產(chǎn)兔腦組織標(biāo)本中Caspase-3平均陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率在生后24h、48h、72h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)間兩兩比較亦有顯著差異，以生后48h平均陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率最高，其次是生后24h，最后是生后72h (P0.01)，而對(duì)照組腦組織標(biāo)本中Caspase-3平均陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率在生后24h、48h、72h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)間兩兩比較，無(wú)顯著差異(P0.05)。 3.腦組織VEGF陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá) GMH-IVH早產(chǎn)兔腦組織標(biāo)本中VEGF平均陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率在生后24h、48h以及72h均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01-0.05）；GMH-IVH早產(chǎn)兔腦組織標(biāo)本中VEGF平均陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率在生后24h、48h、72h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)間兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，以生后24h平均陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率最高，其次是生后48h，最后是生后72h (P0.01-0.05)，而對(duì)照組腦組織標(biāo)本中VEGF平均陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率在生后24h、48h、72h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)間兩兩比較，無(wú)顯著差異(P0.05)。 4.腦組織凋亡細(xì)胞的表達(dá) GMH-IVH早產(chǎn)兔腦組織凋亡細(xì)胞的表達(dá)率在生后24h和48h高于對(duì)照組，差異有顯著性（P0.01），但生后72h的凋亡細(xì)胞的表達(dá)率與對(duì)照組無(wú)顯著差異（P0.05）；GMH-IVH早產(chǎn)兔腦組織凋亡細(xì)胞的表達(dá)率在生后24h和72h無(wú)顯著差異（P0.05），但在生后48h的表達(dá)率分別高于24h和72h，差異有顯著性（P0.01），對(duì)照組腦組織凋亡細(xì)胞的表達(dá)率在生后24h、48h、72h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)間兩兩比較，無(wú)顯著差異(P0.05)。 結(jié)論： 1.早產(chǎn)兔GMH-IVH后，腦組織凋亡細(xì)胞的數(shù)目較正常早產(chǎn)兔明顯增多，并且GMH-IVH早產(chǎn)兔腦組織Caspase-3的表達(dá)趨勢(shì)與其凋亡細(xì)胞的表達(dá)趨勢(shì)一致，提示Caspase-3參與了早產(chǎn)兔GMH-IVH后繼發(fā)性腦損傷； 2.早產(chǎn)兔GMH-IVH后，腦組織VEGF的表達(dá)水平較正常早產(chǎn)兔明顯升高，提示VEGF參與了早產(chǎn)兔GMH-IVH后繼發(fā)性腦損傷的過(guò)程，且可能發(fā)揮了腦保護(hù)作用。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R722.6

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

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本文編號(hào)：1161816