本文關鍵詞：金欣口服液對RSV活化誘導的TLR7、IRF7、IFN-α調控作用

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【摘要】：小兒病毒性肺炎是兒科臨床最常見的感染性疾病之一,嚴重危害著小兒的健康。我國衛(wèi)生部將小兒肺炎列為重點防治的四種兒科疾病之一。病毒性肺炎大約占到小兒肺炎的—半左右,而呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus, RSV)是小兒病毒性肺炎的重要病原體之一。在嬰幼兒的病毒性肺炎中,RSV肺炎較為常見。 目前,現(xiàn)代西醫(yī)學尚無特效的抗RSV病毒藥,也無安全有效的RSV疫苗。中藥在抗病毒感染性疾病治療中有獨特優(yōu)勢,臨床研究及實驗研究證明金欣口服液是抗RSV感染的有效中藥。TLRs作為I型跨膜受體,可識別不同微生物的病原分子相關模式。而RSV為單鏈RNA病毒,其進入機體內后,內部所含的單鏈RNA(ssRNA)外露,可以識別病毒ssRNA的TLR7就可能發(fā)揮重要作用。本研究從TLR7信號轉導通路入手,通過研究臨床治療RSV肺炎的有效方金欣口服液對RSV活化誘導的TLR7、IRF7、IFN-α的調控作用,研究金欣口服液抗RSV感染的機制。 目的 通過研究金欣口服液對RSV活化誘導的TLR7、IRF7、IFN-α的調控作用,研究金欣口服液抗RSV感染的機制。 方法 本實驗采用Realtime RT-PCR、Western blot、ELSIA法檢測RSV感染后RAW264.7細胞和BALB/c小鼠的TLR7、IRF7、IFN-α的表達水平。Realtime RT-PCR數(shù)據(jù)采用相對定量法計算,其余數(shù)據(jù)采用SPSS18.0軟件進行統(tǒng)計學處理。 結果 1.體外實驗 (1)RSV感染RAW264.7細胞24h后,TLR7mRNA表達水平與正常細胞組相比,顯著升高(P0.05)；利巴韋林組和金欣含藥血清組TLR7mRNA表達水平均為正常細胞組的0.5倍以下,有顯著性差異(P0.05),與RSV感染組相比TLR7mRNA表達量降低(P0.05),其中金欣含藥血清的下調作用較利巴韋林更為明顯。IRF7mRNA表達量為正常細胞組的3.12倍,明顯增高并具有顯著性差異(P0.05),利巴韋林和金欣含藥血清均可以顯著下調RSV感染的RAW264.7細胞的IRF7mRNA表達(P0.05),金欣含藥血清的下調作用與利巴韋林相比,未見明顯差異。 (2)RSV感染RAW264.7細胞24h后TLR7蛋白表達較正常組增加,而金欣含藥血清可顯著下調TLR7蛋白表達(P0.01)；IRF7表達量較正常組相比升高(P0.05),而金欣含藥血清組的IRF7表達量較RSV組稍高,但無明顯統(tǒng)計學意義(P0.05)。 (3)RSV感染RAW264.7細胞24h后取細胞上清,測得IFN-a的含量極低。 2.體內試驗 (1)在RSV感染BALB/c小鼠24h后,TLR7mRNA表達量較正常組有升高趨勢(P0.05),而金欣高、低劑量預防給藥及利巴韋林有降低TLR7mRNA表達的趨勢(P0.05),其中以金欣低預防組最為明顯：RSV感染BALB/c小鼠72h后,TLR7mRNA的表達較24h時有所下降,而金欣組和利巴韋林組均較24h時明顯增多,其中尤其以金欣低劑量治療組上調作用最為明顯；在RSV感染BALB/c小鼠144h后,TLR7mRNA的表達較72h時進一步下降,利巴韋林組和金欣口服液組較144h TLR7mRNA的表達下降,但與RSV感染組相比,利巴韋林組和金欣高治療組均可上調TLR7mRNA的表達(P0.05),尤以金欣高治療組的上調作用最為明顯。 (2)在RSV感染BALB/c小鼠24h后,IRF7mRNA表達水平較正常組顯著增高(P0.01),而金欣口服液預防給藥組及利巴韋林組IRF7mRNA的表達較RSV感染組明顯降低(P0.05),其中以金欣口服液低預防給藥組的下調作用最為明顯；隨著感染時間延長RSV感染組IRF7mRNA逐漸下降,而金欣組和利巴韋林組的IRF7mRNA的表達上升并超過RSV感染組,其中金欣高治療組IRF7mRNA的表達高于利巴韋林組(P0.05)。 (3)RSV感染BALB/c小鼠后TLR7的表達量下降(P0.05),而金欣口服液組對TLR7下調作用較RSV感染組更為顯著(P0.05)。在感染初期BALB/c小鼠IRF7的表達量下降,而金欣口服液干預后,對IRF7表達量的下調更為明顯,在感染晚期,金欣口服液高劑量治療組與RSV感染組相比,可以提高IRF7的蛋白表達量(P0.05)。 (4)本研究體內實驗表明在RSV感染小鼠早期IFN-α表達量升高(P0.05),金欣口服液低預防組及高預防組能明顯提高IFN-α表達量,隨感染時間延長IFN-α表達量較前下降,金欣口服液高、低治療組均能明顯提高IFN-α的表達(P0.05),持續(xù)起到抗病毒效應。病毒感染性疾病后期IFN-α均較前進一步下降,金欣口服液組IFN-α表達量較RSV感染組低(P0.05)。 結論 1.金欣口服能夠從核酸轉錄和蛋白質合成層面調控TLR7和IRF7的表達。 2.金欣口服液對RSV感染RAW264.7細胞TLR7和IRF7的mRNA有下調作用,對TLR7蛋白有下調作用,對IRF7蛋白表達調控作用不顯著。 3.金欣口服液對RSV感染BALB/c小鼠的TLR7和IRF7的mRNA表達量以及IRF7的蛋白表達量,在感染早期能夠下調其表達,在感染后期能夠上調其表達;對TLR7的蛋白表達量有下調作用。 4.金欣口服液對RSV感染BALB/c小、鼠的IFN-α表達量的影響,在感染早期能夠上調其表達,在感染后期能夠下調其表達。 5.金欣口服液是抗RSV感染的有效藥物,其作用機制可能與調節(jié)TLR7信號轉導通路上的TLR7、IRF7、IFN-α的表達量有關。
【關鍵詞】：金欣口服液 呼吸道合胞病毒 Toll樣受體7 干擾素調節(jié)因子7 干擾素-α
【學位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R272
【目錄】：

• 目錄6-8
• 中文摘要8-10
• ABSTRACT10-13
• 前言13-15
• 第一部分 文獻研究15-30
• 1 中醫(yī)對RSV肺炎的相關認識15-21
• 1.1 病名溯源15-16
• 1.2 歷代醫(yī)家論肺炎的病因病機16-18
• 1.3 現(xiàn)代中醫(yī)名家對肺炎的認識18-19
• 1.4 近現(xiàn)代兒科名家對肺炎喘嗽的認識19-20
• 1.5 中醫(yī)藥治療RSV肺炎研究進展20-21
• 2 西醫(yī)學對RSV肺炎的認識21-25
• 2.1 病原學特點21
• 2.2 RSV感染的免疫學機制21-23
• 2.3 RSV引起的疾病23
• 2.4 RSV流行病學研究23-24
• 2.5 臨床治療24-25
• 3 RSV與TLRs的關系25-28
• 3.1 Toll樣受體家族25-26
• 3.2 TLRs與RSV感染的關系26-27
• 3.3 TLR7、IRF7研究進展27-28
• 4 金欣口服液的前期研究成果28-30
• 第二部分 實驗部分30-53
• 1 材料30-32
• 1.1 病毒30
• 1.2 細胞30
• 1.3 動物30
• 1.4 藥物30
• 1.5 試劑30-31
• 1.6 儀器及設備31-32
• 2 方法32-39
• 2.1 金欣口服液及其含藥血清的制備32
• 2.2 RSV的擴增及組織培養(yǎng)半數(shù)感染量(TCID_(50))的測定32-33
• 2.3 Hep-2細胞和RAW264.7細胞的培養(yǎng)33
• 2.4 RSV感染RAW262.7細胞模型的制備33
• 2.5 RSV感染BALB/c小鼠模型的制備33
• 2.6 實驗分組、給藥方案及標本的采集33-34
• 2.7 肺組織病理切片34
• 2.8 MTT法測定藥物最大無毒濃度34
• 2.9 實時熒光定量PCR法檢測金欣口服液對TLR7、IRF7的mRNA的轉錄水平34-36
• 2.10 免疫印跡法具體步驟36-38
• 2.11 ELISA法檢測金欣口服液對RSV誘導IFN-α的表達水平38
• 2.12 數(shù)據(jù)統(tǒng)計38-39
• 3 結果39-53
• 3.1 RSV組織半數(shù)感染量(TCID_(50))39
• 3.2 金欣口服液含藥血清、利巴韋林對RAW264.7細胞最大無毒濃度測定結果39
• 3.3 金欣口服液對RSV誘導TLR7mRNA、IRF7mRNA轉錄水平的調控作用39-43
• 3.4 金欣口服液對RSV誘導的TLR7、IRF7蛋白表達的影響43-48
• 3.5 金欣口服液對RSV誘導IFN-α表達水平的調控作用48-49
• 3.6 小鼠病理切片結果49-53
• 第三部分 討論53-57
• 第四部分 結語57-59
• 1 結論57
• 2 創(chuàng)新之處57
• 3 研究展望57-59
• 參考文獻59-64
• 英文縮略詞表64-66
• 碩士在讀期間發(fā)表論文66-67
• 致謝67-68
• 個人簡歷68

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 趙霞;汪受傳;胡鈺;陳彩霞;徐建亞;;金欣口服液含藥血清對呼吸道合胞病毒感染細胞早期凋亡的影響[J];中華中醫(yī)藥雜志;2010年02期

2 趙霞;汪受傳;張沛;周娣;徐建亞;;金欣口服液對呼吸道合胞病毒感染大鼠Ⅰ型干擾素表達的影響[J];中華中醫(yī)藥雜志;2011年07期

3 陸權;兒科常見病毒性呼吸道感染的病因治療[J];世界臨床藥物;2003年07期

4 蔡旭玲;黃曉暉;王德全;周俊立;鄒志輝;林曉暉;劉偉東;陳思東;;甘草的醇沉淀物體外抗RSV有效部位的篩選[J];廣東藥學院學報;2012年06期

5 張永;;干擾素的分子生物學機制研究進展[J];海峽藥學;2007年01期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李佳曦;金欣口服液及白藜蘆醇對RSV活化誘導的TLR3及其信號通路的調控作用[D];南京中醫(yī)藥大學;2012年

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本文編號：1106712