本文關鍵詞：MTA3、Snail1、E-cadherin在膽道閉鎖病兒肝臟中表達及相關性分析

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【摘要】：目的：膽道閉鎖（Biliary atresia, BA）是小兒最常見的一種膽道梗阻性疾病，其病因和發(fā)病機制尚不明確，主要包括遺傳傾向、病毒感染、慢性炎癥及自身免疫介導的膽道損害、胚胎發(fā)育畸型以及血管畸形等假說，其中病毒感染與免疫反應可能是導致病兒肝損害的關鍵所在。盡管臨床上可以通過肝腸吻合術重建膽汁排泄途徑，術后肝內膽管炎癥和纖維化仍繼續(xù)進展，最終導致大部分病兒膽汁淤積性肝硬化，超過半數(shù)膽道閉鎖病兒最終需要肝移植，僅15%~20%的病兒靠自體肝存活至成年，這些病兒大部分仍存在慢性肝病、肝硬化。最近有研究發(fā)現(xiàn)膽道閉鎖中硬化性膽管炎可能與上皮-間質轉化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）密切相關，而鋅指轉錄因子Snail已被證實在EMT過程中起關鍵作用，Snail超家族中Snail1和Snail2兩個成員，直接通過阻止E-鈣粘附素（E-cadherin）的轉錄誘導EMT；而轉移相關基因3（Metastasis-associated gene3, MTA3）卻對Snail有抑制作用。本研究通過檢測膽道閉鎖病兒肝臟組織中MTA3、Snail1、E-cadherin的表達情況及其相關性，探討三者在膽道閉鎖的發(fā)生、發(fā)展中的作用及意義。 方法：選取2012年2月～2013年9月間河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院小兒外科收治的膽道閉鎖21例的肝臟組織活檢標本作為實驗組，同期切取膽總管囊腫（congenital choledochal cyst, CCC）17例及肝破裂（normal liver,NL）10例的肝臟組織活檢作為對照組。應用免疫組織化學（immunohistochemistry, IHC）法檢測對比三組肝組織中MTA3、Snail1、E-cadherin蛋白的表達情況；應用逆轉錄-多聚酶鏈反應（reversetranscription-Polymerase Chain Reaction, RT-PCR）檢測對比三組肝組織中MTA3、Snail1、E-cadherin基因mRNA水平表達情況。應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據進行統(tǒng)計分析，以P＜0.05為差異有顯著統(tǒng)計學意義，以P＜0.01為差異有非常顯著統(tǒng)計學意義。 結果： 1MTA3的表達：MTA3蛋白在膽道閉鎖、膽總管囊腫及正常肝組織中陽性表達率分別為28.57%、82.35%和90.00%，三組相比有顯著性差異（P0.01）；進一步兩兩比較，膽道閉鎖組MTA3蛋白的表達低于膽總管囊腫組（P0.01）與正常組（P0.01），而膽總管囊腫組與正常組相比無顯著性差異（P0.05）。應用RT-PCR法檢測三組中MTA3mRNA的表達情況，其相對表達量分別為0.10±0.05、0.25±0.10和0.23±0.11，三組相比有顯著性差異（P0.01）；進一步兩兩比較，膽道閉鎖組MTA3mRNA的表達低于膽總管囊腫組（P0.01）與正常組（P0.01），而膽總管囊腫組與正常組相比無顯著性差異（P0.05）。 2Snail1的表達：Snail1蛋白在膽道閉鎖、膽總管囊腫及正常肝組織中陽性表達率分別為66.67%、23.53%和20.00%，三組相比有顯著性差異（P0.01）；進一步兩兩比較，膽道閉鎖組Snail1蛋白的表達高于膽總管囊腫組（P0.05）與正常組（P0.05），而膽總管囊腫組與正常組相比無顯著性差異（P0.05）。應用RT-PCR法檢測三組中Snail1mRNA的表達情況，其相對表達量分別為0.09±0.03、0.05±0.03和0.05±0.03，三組相比有顯著性差異（P0.01）；進一步兩兩比較，膽道閉鎖組Snail1mRNA的表達高于膽總管囊腫組（P0.01）與正常組（P0.01），，而膽總管囊腫組與正常組相比無顯著性差異（P0.05）。 3E-cadherin的表達：E-cadherin蛋白在膽道閉鎖、膽總管囊腫及正常肝組織中陽性表達率分別為33.33%、94.12%和90.00%，三組相比有顯著性差異（P0.01）；進一步兩兩比較，膽道閉鎖組E-cadherin蛋白的表達低于膽總管囊腫組（P0.01）與正常組（P0.01），而膽總管囊腫組與正常組相比無顯著性差異（P0.05）。應用RT-PCR法檢測三組中E-cadherin mRNA的表達情況，其相對表達量分別為0.32±0.16、0.69±0.22和0.75±0.23，三組相比有顯著性差異（P0.01）；進一步兩兩比較，膽道閉鎖組E-cadherin mRNA的表達低于膽總管囊腫組（P0.01）與正常組（P0.01），而膽總管囊腫組與正常組相比無顯著性差異（P0.05）。 4三種基因mRNA及蛋白表達相關性：在mRNA水平及蛋白水平，MTA3與Snail1均呈負相關（r=-0.862, P0.01; r=-0.671, P0.01）；Snail1與E-cadherin均呈負相關（r=-0.715, P0.01; r=-0.571, P0.01）；MTA3與E-cadherin均呈正相關（r=0.752, P0.01; r=0.671, P0.01）。 結論：膽道閉鎖中Snail1基因呈高表達，MTA3、E-cadherin均呈低表達，提示三者可能與膽道閉鎖的發(fā)生密切相關；膽道閉鎖中MTA3和E-cadherin的表達呈正相關，和Snail1的表達呈負相關，提示MTA3減少，可能會降低對Snail1的抑制，導致Snail1對E-cadherin的抑制加強，而減少E-cadherin表達，發(fā)生EMT，肝內外膽管上皮細胞極性及細胞間粘附被破壞，促進肝內外膽道炎癥與纖維化進展，造成硬化性膽管炎，從而參與膽道閉鎖的發(fā)生與發(fā)展。
【關鍵詞】：膽道閉鎖 上皮-間質轉化 轉移相關基因3 Snail1 E-cadherin 免疫組織化學 逆轉錄-多聚酶鏈反應
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R726.5
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 英文縮寫11-12
• 前言12
• 材料與方法12-19
• 結果19-22
• 附圖22-30
• 附表30-33
• 討論33-36
• 結論36-37
• 參考文獻37-42
• 綜述 先天性膽道閉鎖的發(fā)病機制42-58
• 參考文獻49-58
• 致謝58-59
• 個人簡歷59

【參考文獻】

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1 郭麗俊;王金桃;楊大明;;宮頸細胞學ASCUS的臨床意義及處理探討[J];基層醫(yī)學論壇;2010年14期

本文編號：1088808