本文關(guān)鍵詞：LAMP與PCR技術(shù)在兒童肺炎支原體檢測中的應(yīng)用及昆明地區(qū)肺炎支原體流行病學(xué)分析

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【摘要】：目的：肺炎支原體是引起兒童支原體肺炎的主要病原體,也是兒童呼吸道感染的常見病原體之一。臨床上常用血清學(xué)檢測方法與其他常見呼吸道病原體嗜肺軍團菌(Legionella Pneumophila, LP)、Q熱立克次體(Coxiella burnetii, CB)、肺炎衣原體(Chlamydia pneumoniae, CP)、腺病毒(Adenoviridae, ADV)、呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus, RSV)、甲型流感病毒(Influenza A virus)、乙型流感病毒(Influenza B virus)和副流感病毒(HPIVs)共同檢測。肺炎支原體感染常見于兒童,成人中也可感染。臨床上肺炎支原體可通過紅霉素,四環(huán)素與氯霉素等大環(huán)內(nèi)酯類抗生素進行控制與治療。是否能夠準(zhǔn)確的檢測出致病病原,從而采取有效措施進行疾病防控,這一直是目前的研究重點。分子生物學(xué)檢測技術(shù)已經(jīng)廣泛用于臨床診斷,其中PCR技術(shù)目前已經(jīng)研究得十分成熟。相比之下環(huán)介導(dǎo)等溫擴增(LAMP)屬于近20年來新發(fā)展的分子生物學(xué)檢測技術(shù)。本試驗建立LAMP檢測肺炎支原體的方法,與PCR技術(shù)對比,討論兩種方法的特點以及特異性及敏感度。方法：通過LAMP引物專業(yè)軟件設(shè)計4條引物,建立起LAMP檢測肺炎支原體的方法；讓檢測樣本與常見的呼吸道病原體嗜肺軍團菌與腺病毒同時進行LAMP反應(yīng),驗證所設(shè)計LAMP檢測方法的特異性。對標(biāo)準(zhǔn)量的MP-DNA以加倍稀釋的方法同時進行LAMP及PCR反應(yīng),對比兩種方法的敏感度。結(jié)論：結(jié)果顯示LAMP特異性強,在嗜肺軍團菌與腺病毒共同進行LAMP反應(yīng)中無擴增；LAMP在檢測肺炎支原體的實驗中敏感度高于PCR,LAMP技術(shù)可檢測稀釋10-4的樣本,而PCR可檢測出稀釋10-2的樣本,LAMP技術(shù)在檢測肺炎支原體上的敏感度高于PCR。目的：肺炎支原體(mycoplasma pneumoniae, MP)是兒童社區(qū)獲得性肺炎的常見病原體,全年均可發(fā)病。其最常見的臨床表現(xiàn)為呼吸道癥狀,如發(fā)熱,咳嗽,氣喘等,還可引起多種肺外并發(fā)癥,如腦炎,心肌炎,皮膚傷害,泌尿系統(tǒng)及消化道受累等癥狀,少數(shù)患兒可同時發(fā)生多種并發(fā)癥,若不及時干預(yù),嚴(yán)重者可危及生命。本次對我院2014年度因肺炎住院的患兒的實驗室檢測數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析,旨在為臨床早期合理診斷與治療提供科學(xué)依據(jù)。方法：選取2014年1月-2014年12月被診斷為肺炎的住院患兒,收集到3256例患兒的血清,運用間接免疫熒光技術(shù)(Indirect immunofluorescence assay.IIFA)檢測MP特異性抗體MP-IgM。結(jié)果：在3256例小兒血清中春季陽性率為10.6%,夏季為14.2%,秋季為25.8%,冬季為35.1%。平均發(fā)病率為21.4%,通過SPSS 17.0分析數(shù)據(jù)可以得知四季發(fā)病率間有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),其中秋冬季檢出率明顯高于其他兩季,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。1歲的陽性率為8%；1-3歲陽性病例為108例,陽性率為13%；3-6歲陽性率為21%；6歲陽性率為22%。我們通過SPSS17.0(P0.05)分析可得不同年齡間的數(shù)據(jù)有統(tǒng)計學(xué)意義,其中3-6歲以上的兒童的發(fā)病率明顯高于其他的年齡組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論：昆華醫(yī)院入院的肺炎支原體肺炎(mycoplasma pneumoniae pneumonia, MPP)患兒中,秋冬季為高發(fā)期,.其中3-6歲的患兒為易感人群。
【關(guān)鍵詞】：肺炎支原體 環(huán)介導(dǎo)等溫擴增 聚合酶鏈反應(yīng) 肺炎 兒童 肺炎支原體 肺炎支原體肺炎 年齡 季節(jié)
【學(xué)位授予單位】：昆明理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R725.6
【目錄】：

• 第一部分 摘要6-7
• Part Ⅰ Abstract7-8
• 第二部分 摘要8-9
• Part Ⅱ Abstract9-13
• 縮略詞13-15
• 第一部分 LAMP與PCR技術(shù)在兒童肺炎支原體檢測中的應(yīng)用15-41
• 第一章 緒論15-28
• 1.1 病原學(xué)15-16
• 1.2 肺炎支原體常見的保守序列16-17
• 1.2.1 P1基因16
• 1.2.2 P30基因16
• 1.2.3 P116基因16-17
• 1.3 診斷方法的研究進展17-20
• 1.3.1 分離培養(yǎng)法17
• 1.3.2 血清學(xué)檢測方法17-19
• 1.3.3 分子基因檢測方法19-20
• 1.4 恒等溫擴增方法簡介20-26
• 1.4.1 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)21
• 1.4.2 核酸等溫擴增技術(shù)21-23
• 1.4.3 環(huán)節(jié)導(dǎo)恒等溫擴展技術(shù)原理23-25
• 1.4.4 環(huán)節(jié)導(dǎo)恒等溫擴增技術(shù)的特點25-26
• 1.4.5 環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)的應(yīng)用26
• 1.5 研究目的及意義26-28
• 第二章 材料與方法28-35
• 2.1 材料與儀器28-29
• 2.1.1 主要試劑28
• 2.1.2 試劑的配制28-29
• 2.2 實驗儀器29-30
• 2.3 實驗方法30-31
• 2.3.1 標(biāo)本來源30-31
• 2.3.2 PCR引物的設(shè)計31
• 2.4 樣本采集與DNA的提取31-32
• 2.5 反應(yīng)體系優(yōu)化32-33
• 2.5.1 PCR反應(yīng)體系32
• 2.5.2 LAMP反應(yīng)體系32-33
• 2.6 特異性檢測33
• 2.7 敏感度檢測33-35
• 2.7.1 LAMP反應(yīng)的敏感度檢測33-34
• 2.7.2 PCR反應(yīng)的敏感度檢測34-35
• 第三章 實驗結(jié)果與分析35-38
• 3.1 PCR反應(yīng)的構(gòu)建35
• 3.2 LAMP反應(yīng)的構(gòu)建35-36
• 3.3 LAMP特異性的研究36
• 3.4 PCR反應(yīng)的敏感度36-37
• 3.5 PCR反應(yīng)的敏感度37-38
• 第四章 討論38-40
• 第五章 結(jié)論與展望40-41
• 5.1 結(jié)論40
• 5.2 展望40-41
• 第二部分 昆華醫(yī)院肺炎支原體發(fā)病情況的分析41-59
• 第一章 緒論41-50
• 1.1 流行病學(xué)41
• 1.2 MP傳播途徑及臨床表現(xiàn)41-44
• 1.2.1 MP傳播途徑41-42
• 1.2.2 MP臨床表現(xiàn)42-44
• 1.3 致病機理的研究44-46
• 1.4 肺炎支原體的防控46-47
• 1.5 其他地區(qū)肺炎支原體流行病學(xué)調(diào)查47-48
• 1.6 研究目的及意義48-50
• 第二章 材料與方法50-52
• 2.1 材料50
• 2.1.1 血清的采集50
• 2.2 臨床血清學(xué)檢測方法50-51
• 2.3 實驗室檢測結(jié)果判定51
• 2.3.1 陽性結(jié)果判定51
• 2.3.2 陰性結(jié)果判定51
• 2.4 臨床資料的收集51
• 2.5 統(tǒng)計學(xué)分析51-52
• 第三章 實驗結(jié)果與分析52-56
• 3.1 肺炎支原體肺炎診斷標(biāo)準(zhǔn)52
• 3.2 實驗室檢驗結(jié)果的判定52-53
• 3.3 不同季節(jié)的感染情況53-54
• 3.4 不同年齡段的感染情況54-56
• 第四章 討論56-58
• 第五章 結(jié)論與展望58-59
• 5.1 結(jié)論58
• 5.2 展望58-59
• 參考文獻59-68
• 致謝68-70
• 文獻綜述70-74
• 參考文獻72-74
• 附錄A 論文發(fā)表74-75
• 附錄B 其他需要說明內(nèi)容75

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