本文關(guān)鍵詞：HIV暴露嬰兒早期診斷策略研究與HIV-1 DNA濾紙片干血斑質(zhì)控品的制備及應(yīng)用

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【摘要】：第一部分HIV暴露嬰兒早期診斷策略研究研究背景HIV/AIDS (人類免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus)/艾滋病(Acquired Immune Deficiency Syndrome. AIDS))是全球面臨的重大公共衛(wèi)生問題,同樣也嚴(yán)重威脅著婦女和兒童的健康與生命。由于HIV感染母親的特異性抗體可進入胎／嬰兒體內(nèi),通常至嬰兒出生后12-18個月才能消失,因此常規(guī)的HIV抗體檢測(成人HIV感染診斷標(biāo)準(zhǔn)方法)無法準(zhǔn)確診斷18月齡內(nèi)的HIV感染嬰兒,而延誤其開始抗病毒治療的最佳時機。在發(fā)達(dá)國家,HIV核酸檢測(檢測細(xì)胞中HIV-1前病毒DNA或血漿內(nèi)HIVRNA)是1 8月齡內(nèi),特別是出生后數(shù)周內(nèi)嬰兒HIV感染診斷的常規(guī)檢測方法。近年來隨著HIV核酸檢測能力的提高和以濾紙為載體的干血斑(DBS)技術(shù)的應(yīng)用,極大地提高了HIV核酸檢測的可及性,以HIV DNA定性檢測為依據(jù)的嬰兒HIV感染早期診斷檢測逐漸在資源有限國家中得到廣泛應(yīng)用。本文對2005年至2015年在中國疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病預(yù)防控制中心參比實驗室進行HIV-1 DNA定性檢測的共計2575份HIV暴露嬰兒干血斑樣本,將檢測結(jié)果按HIV暴露嬰兒的月齡進行分組,計算并分析檢測結(jié)果的靈敏度、特異度和約登指數(shù),為我國HIV暴露嬰兒早期診斷策略的改進提供依據(jù)。目的對HIV暴露嬰兒不同月齡的干血斑樣本進行核酸定性檢測及分析,探索改進HIV暴露嬰兒早期診斷策略。對象和方法收集整理2005年至2015年曾在中國疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病預(yù)防控制中心參比實驗室檢測的HIV陽性孕產(chǎn)婦所生1161名嬰兒出生后不同時間點的干血斑樣本2575份,按HIV暴露嬰兒的月齡進行分組,使用雅培m2000系統(tǒng)進行定性檢測并分析。以HIV暴露嬰兒18月齡后的抗體檢測結(jié)果作為判定是否感染HIV的金標(biāo)準(zhǔn)。分別計算HIV暴露嬰兒出生后不同月齡核酸定性方法檢測干血斑樣本的結(jié)果的靈敏度、特異度和約登指數(shù),整理并進行分析。結(jié)果1)對于HIV暴露嬰兒出生后小于4周的樣本,靈敏度為50%(11/22),95%可信區(qū)間(Confidence interval,CI):0.288-0.712；特異度100%(174/174),95%Ch0.968～1.000；假陽性率：0；假陰性率50%；約登指數(shù)為0.5002)大于等于4周小于6周樣本,靈敏度100%(12/12),95%CI：0.699-1.000,特異度100%(128/128),95%CI:0.963-1.000,假陽性率0(0,0.301),假陰性0(0,0.036),約登指數(shù)為1：3)大于等于6周小于3個月樣本,靈敏度99.1%(111/112),95%CI：0.944～1.000,特異度99.5%(801/805),95% CI：0.986～0.998,假陽性0.035,95%CI：0.011-0.092,假陰性0.001,95%CI:0.000-0.008,約登指數(shù)為0.986；4)3月齡后樣本,靈敏度99.1%(112/113),95% CI:0.945-1.000,特異度99.7%(1205/1209),95% CI:0.991～0.999,假陽性0.034,95% CI:0.011-0.091,假陰性0.001,95% CI：0.000-0.005,約登指數(shù)為0.988。結(jié)論HIV暴露嬰兒在出生后4周內(nèi)核酸定性檢測靈敏度較低,僅為50%,4周齡以后具備極高靈敏度,均在99%以上；在特異度方面,各組特異度分別為100%、100%、99.5%和99.7%,無顯著性差異。我國HIV暴露嬰兒早期診斷策略的改進具有可行性。第二部分HIV-1 DNA濾紙片干血斑質(zhì)控品的制備及應(yīng)用研究背景由于來源于母親的HIV抗體的存在,血清學(xué)檢測僅用于排除HIV暴露嬰兒感染,不能作為HIV暴露嬰兒的確證手段。目前我國HIV暴露嬰兒早期診斷的檢測方法主要為HIV-1 DNA定性檢測,截至目前,我國共建立了7家區(qū)域性HIV暴露嬰兒感染早期診斷實驗室,負(fù)責(zé)對全國各區(qū)域進行HIV暴露嬰兒早期診斷,所用檢測儀器全部為雅培m2000系統(tǒng)。HIV早期診斷對于確認(rèn)HIV暴露嬰兒感染狀態(tài),及早進行抗病毒治療具有重要意義。因此,對各個實驗室進行HIV-1 DNA定性檢測能力驗證,可以及時發(fā)現(xiàn)實驗室檢測工作中存在的問題,確保實驗室檢測結(jié)果的可靠性,可以提高我國HIV暴露嬰兒早期診斷質(zhì)量控制整體水平和實驗室的技術(shù)能力。能力驗證質(zhì)控品的制備尤為重要,良好的質(zhì)控品應(yīng)具有成分分布均勻,理化性質(zhì)穩(wěn)定和容易制備的特點。本文建立并評價了一種利用8E5細(xì)胞制備HIV-1 DNA能力驗證濾紙片干血斑質(zhì)控品的方法,為HIV-1 DNA定性檢測能力驗證工作的開展提供了支持。目的制備用于HIV-1 DNA檢測的干血斑能力驗證質(zhì)控品并對其均一性和穩(wěn)定性進行評估。方法培養(yǎng)僅含單拷貝的缺陷型HIV-1基因的8E5細(xì)胞,使用HIV-1陰性全血進行倍比稀釋并滴加到濾紙片上制備成含有不同拷貝數(shù)8E5細(xì)胞的濾紙片干血斑。在不同溫度條件下放置不同時間,然后使用雅培R eal-time HIV-1定性檢測試劑盒對其進行檢測,整理并分析檢測結(jié)果。評價濾紙片干血斑能力驗證質(zhì)控品均一性和穩(wěn)定性。結(jié)果濾紙片干血斑隨機抽樣平行檢測結(jié)果完全一致；-20℃或4℃放置1年,室溫放置3個月或在37℃放置4天,檢測結(jié)果與制備結(jié)果一致。在應(yīng)用性評價中,參加能力驗證項目的7家實驗室2次檢測結(jié)果全部正確,制備的濾紙片干血斑作為質(zhì)控品效果良好。結(jié)論使用8E5細(xì)胞制備的HIV-1 DNA定性檢測能力驗證質(zhì)控品均一性、穩(wěn)定性良好,是一種可用于目前我國HIV-1 DNA定性檢測能力驗證的質(zhì)控品。
【關(guān)鍵詞】：HIV 嬰兒 干血斑 核酸定性檢測 能力驗證 質(zhì)控品 濾紙干血斑 HIV-1 DNA 8E5細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：中國疾病預(yù)防控制中心
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R725.1
【目錄】：

• 摘要6-9
• ABSTRACT9-14
• 前言14-24
• 第一部分 HIV暴露嬰兒早期診斷策略研究24-31
• 材料與方法24-27
• 結(jié)果27-29
• 討論29-31
• 結(jié)論31
• 第二部分 HIV-1 DNA濾紙片干血斑質(zhì)控品的制備及應(yīng)用31-54
• 材料與方法32-46
• 結(jié)果46-51
• 討論51-53
• 結(jié)論53-54
• 參考文獻(xiàn)54-57
• 附錄 1 已發(fā)表論著57-61
• 附錄 2 綜述61-69
• 參考文獻(xiàn)66-69
• 致謝69-70

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1 ;一種快速檢測濾紙干血樣本HIV-1 DNA的方法[J];國外醫(yī)學(xué)(臨床生物化學(xué)與檢驗學(xué)分冊);1999年06期

2 杜琳;HIV-1 DNA構(gòu)建物對黑猩猩的安全性與免疫原性[J];國外醫(yī)學(xué).預(yù)防.診斷.治療用生物制品分冊;1999年05期

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中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 范文成;HIV暴露嬰兒早期診斷策略研究與HIV-1 DNA濾紙片干血斑質(zhì)控品的制備及應(yīng)用[D];中國疾病預(yù)防控制中心;2016年

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本文編號：1074309