本文關(guān)鍵詞：BMPs在小鼠椎間盤發(fā)育中差異表達(dá)譜及對(duì)椎間盤細(xì)胞影響的研究

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【摘要】：青少年特發(fā)性脊柱側(cè)彎(adolescent idiopathic scoliosis AIS)是一種嚴(yán)重的發(fā)育畸形，特指初診年齡在10~18周歲的特發(fā)性脊柱側(cè)彎患兒。因其發(fā)病原因至今都不清楚，因此對(duì)于AIS的治療主要是對(duì)癥治療，治療效果并不十分理想。骨形態(tài)發(fā)生蛋白(bone morphogenetic proteins,BMPs)作為一種多功能的成骨相關(guān)因子，對(duì)胚胎期的骨形成及生后的成骨有極其重要的作用。提示我們可以從BMPs的角度，去解釋臨床上一些骨形成方面異常的疾病如特發(fā)性脊柱側(cè)彎（idiopathic scoliosis IS）。 本研究將探索在小鼠脊柱椎間盤生長過程中成骨相關(guān)BMPs的表達(dá)情況及對(duì)椎間盤細(xì)胞成骨和成軟骨的影響，為從骨骼發(fā)育異常角度解釋青少年特發(fā)性脊柱側(cè)彎的發(fā)生發(fā)展提供重要的基礎(chǔ)研究。 第一部分骨形成蛋白信號(hào)分子在小鼠椎間盤發(fā)育中的表達(dá) 目的：探索促進(jìn)成骨相關(guān)的骨形成蛋白-2、-4、-6、-7、-9（BMP-2、-4、-6、-7、-9）以及抑制成骨作用的BMP-3在小鼠不同發(fā)育年齡段椎間盤中的表達(dá)水平及變化趨勢(shì)，為椎間盤發(fā)育過程中BMP信號(hào)途徑的研究奠定重要基礎(chǔ)。 方法：解剖獲取出生后1d、3d、1周、1個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月齡小鼠的椎間盤及胸腰椎脊柱。RT-PCR檢測(cè)BMP-2、-3、-4、-6、-7、-9在生后不同年齡段小鼠椎間盤的表達(dá)情況，免疫印跡及免疫組織化學(xué)驗(yàn)證在RT-PCR中有明顯表達(dá)差異的BMP-3、-6。 結(jié)果：RT-PCR結(jié)果顯示BMP-2、-7、-9的表達(dá)在小鼠椎間盤組織中有一定的基礎(chǔ)表達(dá)，但隨著年齡增大沒有明顯的變化趨勢(shì)，而BMP-3和BMP-6的表達(dá)整體呈現(xiàn)出下降的趨勢(shì)，BMP-4在椎間盤中無表達(dá)，，免疫印跡及免疫組織化學(xué)結(jié)果也證實(shí)BMP-3和BMP-6，隨著小鼠椎間盤的發(fā)育表達(dá)降低。 結(jié)論：各成骨BMPs在正常小鼠脊柱的發(fā)育過程中表達(dá)水平不同，其中BMP-3和-6可能發(fā)揮著與其他成骨BMPs不同的生理作用。 第二部分BMPs對(duì)胚胎小鼠椎間盤細(xì)胞成軟骨及成骨作用 目的：探索成骨作用的BMP-2及抑制成骨作用的BMP-3對(duì)胚胎小鼠椎間盤細(xì)胞的成軟骨及成骨作用，為BMPs用于臨床治療椎間盤相關(guān)疾病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：利用腺病毒介導(dǎo)的BMP-2和-3在胚胎小鼠椎間盤細(xì)胞中過表達(dá)， RT-PCR檢測(cè)Osteocalcin(OC)、 Osteoprotegerin(OPG)和Osteopontin(OPN)成骨相關(guān)指標(biāo)mRNA水平的表達(dá)， Alkalinephosphatase(ALP)讀數(shù)及ALP染色檢測(cè)ALP的活性。 結(jié)果：BMP-2和BMP-3過表達(dá)對(duì)于椎間盤纖維環(huán)（annulus fibrosusAF）細(xì)胞的成骨沒有作用。但可促進(jìn)椎間盤髓核（nucleus pulposus NP）細(xì)胞的成骨，其中BMP-2和BMP-3均可促進(jìn)OC mRNA的表達(dá)升高，而僅BMP-2可促進(jìn)其OPG和OPN的mRNA表達(dá)升高。NP細(xì)胞在BMP-2和-3腺病毒感染后ALP活性明顯增強(qiáng)，在AF細(xì)胞中則沒有觀察到這種變化。 結(jié)論： BMP-2和-3均可促進(jìn)胚胎小鼠NP細(xì)胞的成骨作用，但對(duì)AF細(xì)胞的成骨用沒有影響。
【關(guān)鍵詞】：骨形成蛋白 椎間盤 差異性表達(dá) 骨形態(tài)發(fā)生蛋白 纖維環(huán)細(xì)胞 髓核細(xì)胞 成骨
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R726.8
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對(duì)照5-6
• 摘要6-9
• ABSTRACT9-13
• 前言13-18
• 參考文獻(xiàn)15-18
• 第一部分 骨形成蛋白信號(hào)分子在小鼠椎間盤發(fā)育中的表達(dá)18-30
• 1 材料和方法18-21
• 1.1 主要材料及試劑18-19
• 1.2 獲取各年齡段小鼠的脊柱及椎間盤19
• 1.3 提取 RNA19-20
• 1.4 提取蛋白20
• 1.5 逆轉(zhuǎn)錄 RNA 及 Touch-down RT-PCR20
• 1.6 免疫印跡20-21
• 1.7 免疫組織化學(xué)21
• 1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析21
• 2 結(jié)果21-26
• 2.1 RT-PCR21-22
• 2.2 Western blotting 檢測(cè) BMP-3 與 BMP-6 的表達(dá)及變化趨勢(shì)22-23
• 2.3 H-E 染色23
• 2.4 免疫組織化學(xué)23-26
• 3 討論26-27
• 參考文獻(xiàn)27-30
• 第二部分 BMP-2 和 BMP-3 對(duì)胚胎小鼠椎間盤細(xì)胞成骨作用30-42
• 1. 材料與方法30-33
• 1.1 主要材料和試劑30-31
• 1.2 研究方法31-33
• 1.3 統(tǒng)計(jì)分析33
• 2 結(jié)果33-37
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及病毒感染情況33-34
• 2.2 RT-PCR 檢測(cè)成骨相關(guān)指標(biāo)34-35
• 2.3 ALP 讀數(shù)35-36
• 2.4 ALP 染色36-37
• 3 討論37-39
• 參考文獻(xiàn)39-42
• 全文總結(jié)42-43
• 研究展望43-44
• 文獻(xiàn)綜述44-57
• 參考文獻(xiàn)51-57
• 致謝57-58
• 攻讀碩士期間所發(fā)表的論文58-59

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 譚祖鍵,胡蘊(yùn)玉;骨形態(tài)發(fā)生蛋白3基因轉(zhuǎn)染成纖維細(xì)胞后細(xì)胞形態(tài)及生物學(xué)變化[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2002年05期

本文編號(hào)：1039953