本文關(guān)鍵詞：馬流產(chǎn)沙門氏菌鞭毛蛋白fljB的原核表達及免疫原性分析

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【摘要】：馬流產(chǎn)沙門氏菌病又稱馬副傷寒(equine paratyphoid),是由馬流產(chǎn)沙門氏菌(Salmonella abortus equi)引起馬屬動物流產(chǎn)的傳染病,同時該病還可引起公馬關(guān)節(jié)突出和馬駒的腹瀉。馬屬動物感染本病后會成為該病的攜帶者,繼而還會成為其他疾病的感染源。馬流產(chǎn)沙門氏菌的II相鞭毛蛋白fljB,可構(gòu)成鞭毛抗原(H抗原),該鞭毛蛋白對該菌在機體內(nèi)的侵襲及擴散起到了關(guān)鍵作用,侵襲宿主后會導致機體產(chǎn)生強烈的免疫應(yīng)答。本研究利用本實驗室分離鑒定的馬流產(chǎn)沙門氏菌新疆分離株,根據(jù)Genbank上已發(fā)表的fljB基因序列,設(shè)計一對特異性引物,擴增fljB基因并測序,利用生物軟件對fljB進行序列分析,結(jié)果表明,馬流產(chǎn)沙門氏菌新疆分離株fljB基因序列與已發(fā)表馬流產(chǎn)沙門氏菌株同源性很高。將fljB基因片段克隆至pET-28a載體中,經(jīng)酶切鑒定,成功構(gòu)建原核重組體pET-28a-fljB,轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21(DE3)感受態(tài)細胞,經(jīng)誘導表達并純化后,重組蛋白fljB經(jīng)SDS-PAGE檢測表明,該重組蛋白分子量約為42 kD。Western blotting檢測顯示,其可與馬流產(chǎn)沙門氏菌全菌血清反應(yīng),表現(xiàn)出良好的抗原性。將純化的fljB蛋白免疫小鼠,特異性抗體滴度可達到1∶64000。本實驗成功克隆馬流產(chǎn)沙門氏菌鞭毛蛋白flj B,構(gòu)建了pET-28a-fljB原核重組體,將純化后的重組蛋白免疫小鼠產(chǎn)生良好的體液免疫,初步驗證了重組表達的馬流產(chǎn)沙門氏菌fljB鞭毛蛋白具有良好的免疫原性,為今后利用該蛋白進行相關(guān)研究奠定基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：馬流產(chǎn)沙門氏菌 fljB基因克隆 原核表達 免疫原性分析
【學位授予單位】：新疆農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S852.61
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 英文縮略詞表9-10
• 第1章 緒論10-22
• 1.1 沙門氏菌的介紹10-11
• 1.2 馬流產(chǎn)沙門氏菌病的癥狀及流行病學特點11-12
• 1.3 馬流產(chǎn)沙門氏菌特征12
• 1.4 馬流產(chǎn)沙門氏菌毒力和致病性12-15
• 1.4.1 毒力島12-14
• 1.4.2 內(nèi)毒素和外毒素14
• 1.4.3 菌毛14-15
• 1.5 沙門氏菌鞭毛蛋白15-17
• 1.6 鞭毛蛋白的免疫原性17-19
• 1.7 馬流產(chǎn)沙門氏菌病的預(yù)防和控制19-21
• 1.8 研究意義21-22
• 第2章 馬流產(chǎn)沙門氏菌鞭毛蛋白fljB的克隆及序列分析22-30
• 2.1 材料22-23
• 2.1.1 菌種與質(zhì)粒22
• 2.1.2 主要試劑22-23
• 2.1.3 主要儀器23
• 2.2 實驗方法23-27
• 2.2.1 細菌的培養(yǎng)23
• 2.2.2 分離菌基因組的提取23-24
• 2.2.3 引物的合成24
• 2.2.4 聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）24
• 2.2.5 fljB的PCR產(chǎn)物回收24-25
• 2.2.6 載體質(zhì)粒的提取25
• 2.2.7 pET-28a-fljB表達載體構(gòu)建25-26
• 2.2.8 細菌的轉(zhuǎn)化26
• 2.2.9 pET-28a-fljB重組質(zhì)粒的鑒定26
• 2.2.10 XJMS-97株fljB基因序列分析26-27
• 2.3 實驗結(jié)果27-28
• 2.3.1 fljB基因的PCR擴增27
• 2.3.2 重組質(zhì)粒pET-28a-fljB雙酶切鑒定27
• 2.3.3 不同沙門氏菌fljB的同源性分析和遺傳進化分析27-28
• 2.4 討論28-30
• 第3章 馬流產(chǎn)沙門氏菌鞭毛蛋白fljB的原核表達與純化30-36
• 3.1 材料30
• 3.1.1 菌株與質(zhì)粒30
• 3.1.2 主要試劑30
• 3.2 實驗方法30-33
• 3.2.1 fljB重組體的轉(zhuǎn)化30-31
• 3.2.2 fljB蛋白的誘導表達、純化及誘導時間的優(yōu)化31
• 3.2.3 fljB重組蛋白的聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）31-32
• 3.2.4 fljB目的蛋白的純化32
• 3.2.5 Western blotting32-33
• 3.3 實驗結(jié)果33-35
• 3.3.1 fljB重組蛋白表達產(chǎn)物的SDS-PAGE檢測結(jié)果33
• 3.3.2 目的蛋白的純化結(jié)果33-34
• 3.3.3 Western blotting分析結(jié)果34-35
• 3.4 討論35-36
• 第4章 馬流產(chǎn)沙門氏菌鞭毛蛋白fljB多克隆抗體的制備36-41
• 4.1 材料36-37
• 4.1.1 蛋白及實驗動物36
• 4.1.2 主要試劑36
• 4.1.3 主要儀器36-37
• 4.2 實驗方法37-38
• 4.2.1 抗原乳化37
• 4.2.2 實驗動物免疫37
• 4.2.3 免疫小鼠血清中fljB抗體的檢測37-38
• 4.3 實驗結(jié)果38-39
• 4.4 討論39-41
• 第5章 結(jié)論41-42
• 參考文獻42-53
• 致謝53-54
• 作者簡介54

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 焦炳華,余偉明,周炳榮;R亞組分為天然馬流產(chǎn)沙門氏菌內(nèi)毒素制劑中的生物學活性成分[J];第二軍醫(yī)大學學報;1991年02期

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李陽;馬流產(chǎn)沙門氏菌鞭毛蛋白fljB的原核表達及免疫原性分析[D];新疆農(nóng)業(yè)大學;2016年

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本文編號：942315