本文關鍵詞：不同培養(yǎng)方法對山羊瘤胃上皮細胞生長及角蛋白18表達量的影響

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【摘要】：本試驗旨在研究不同培養(yǎng)方法對山羊瘤胃上皮細胞生長及角蛋白18(CK18)表達量的影響。采集42日齡山羊的瘤胃上皮組織,分別采用酶消化法和組織塊法對其進行體外培養(yǎng)。通過光學顯微鏡觀察原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)階段的細胞形態(tài),檢測第5代山羊瘤胃上皮細胞的生長曲線,并采用細胞免疫熒光法對山羊瘤胃上皮細胞進行鑒定。結(jié)果顯示:1)經(jīng)0.25%胰蛋白酶+0.02%乙二胺四乙酸消化獲得的原代培養(yǎng)山羊瘤胃上皮細胞于2 d開始貼壁生長,5 d細胞開始明顯增多,10 d細胞數(shù)量達到最大。2)經(jīng)組織塊法獲得的原代培養(yǎng)山羊瘤胃上皮細胞于4 d開始"爬出"組織塊,8 d細胞開始明顯增多,14 d細胞數(shù)量達到最大。3)經(jīng)免疫熒光染色顯示2種方法獲得的細胞胞漿內(nèi)CK18均呈陽性表達且細胞純度后者明顯高于前者。4)組織塊法獲得的細胞CK18表達量顯著高于酶消化法(P0.05)。綜合得出,與酶消化法相比,應用組織塊法可成功獲得純度更高的山羊瘤胃上皮細胞。
【作者單位】： 中國科學院亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)過程重點實驗室亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所湖南省農(nóng)業(yè)生態(tài)過程重點實驗室;湖南農(nóng)業(yè)大學生物科學技術學院;
【關鍵詞】： 山羊 瘤胃 上皮細胞 原代培養(yǎng) 分離 CK
【基金】：國家自然科學基金項目(31201826) 中央駐湘科研機構技術創(chuàng)新發(fā)展專項(2013TF3006)
【分類號】：S827
【正文快照】： 瘤胃是反芻動物消化代謝和營養(yǎng)物質(zhì)吸收最重要的場所。瘤胃壁由黏膜、黏膜下層、肌層、漿膜4層構成。瘤胃上皮屬于復層上皮,由黏膜向漿膜面分為4層:角質(zhì)化細胞層、顆粒細胞層、棘狀細胞層和基底層。瘤胃上皮有著重要的生理作用,如養(yǎng)分吸收與運輸、揮發(fā)性脂肪酸代謝、對瘤胃壁

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