本文關(guān)鍵詞：耐藥性fosA3基因在豬源大腸桿菌中流行特點及傳播機制研究

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【摘要】：大腸桿菌是構(gòu)成機體腸道正常菌群的組成部分,曾被認(rèn)為是非致病菌且廣泛分布于自然界中。近幾年,因感染大腸桿菌而引起機體的腹瀉、敗血癥及乳房炎等疾病頻繁發(fā)生,嚴(yán)重制約著畜牧養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。大腸桿菌容易對多種抗生素產(chǎn)生耐藥性,而且能夠通過質(zhì)粒攜帶相關(guān)耐藥基因的方式在不同菌株之間流行、傳播,給臨床抗感染治療帶來了嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。磷霉素是人醫(yī)臨床的專用抗菌藥物,包括我國在內(nèi)的世界多數(shù)國家禁止將其應(yīng)用于獸醫(yī)臨床。然而,近幾年我國動物源細(xì)菌出現(xiàn)了對磷霉素的耐藥性,而且耐藥率呈現(xiàn)逐年上升的趨勢。目前的研究證實,fosA3基因是導(dǎo)致磷霉素耐藥的主要機制,但對于fosA3基因在我國動物源大腸桿菌中的流行特點和傳播機制目前尚不清楚。因此,開展fosA3基因在大腸桿菌中的流行情況及傳播機制的研究已迫不及待。本研究對廣東佛山各豬場采集的樣本進行了大腸桿菌fosA3基因陽性菌株的分離、篩選和鑒定,共得到54株攜帶fosA3基因的大腸桿菌;應(yīng)用脈沖場凝膠電泳方法分析菌株的親緣性,最終獲得34株不同克隆譜型的菌株,該結(jié)果與MLST分型方法一致。提取34株野生菌質(zhì)粒并擴增fosA3基因,初步確定fosA3基因位于質(zhì)粒上。為進一步分析fosA3基因傳播機制,應(yīng)用體外膜接合轉(zhuǎn)移和Southern雜交試驗對fosA3基因進行定位。結(jié)果顯示,攜帶該基因的質(zhì)粒能夠通過菌種間的接觸而進行水平轉(zhuǎn)移,并且大部分?jǐn)y帶該基因的質(zhì)粒大小為~97kb。測序結(jié)果顯示,攜帶fosA3基因的質(zhì)粒多數(shù)為IncFII型接合轉(zhuǎn)移質(zhì)粒,由其側(cè)翼的兩個插入序列IS26攜帶其形成復(fù)合轉(zhuǎn)座子進行轉(zhuǎn)移。本研究選取9種藥物測試野生菌株及接合子的藥物敏感性及檢測相關(guān)耐藥基因,結(jié)果顯示:34株大腸桿菌野生菌株均耐受6種以上抗生素,其中對頭孢噻肟、四環(huán)素、多西環(huán)素、氯霉素和磷霉素的耐藥率均表現(xiàn)為100%;對慶大霉素、氟苯尼考、環(huán)丙沙星和阿米卡星的耐藥率均在70%以上;34株接合子除對環(huán)丙沙星表現(xiàn)為敏感外,對磷霉素、頭孢噻肟、慶大霉素、四環(huán)素、阿米卡星、氯霉素、氟苯尼考和多西環(huán)素均表現(xiàn)出不同程度抗性;本研究在進行氯霉素類藥物相關(guān)耐藥基因擴增過程中,發(fā)現(xiàn)了對氟苯尼考耐藥的cfr和floR基因;檢測介導(dǎo)β內(nèi)酰胺類抗生素相關(guān)耐藥基因,主要為blaCTX-M-1基因、blaCTX-M-9和blaTEM基因;檢測介導(dǎo)氨基糖苷類抗生素相關(guān)耐藥基因主要為rmtA和rmtB基因;檢測介導(dǎo)四環(huán)素類抗生素相關(guān)耐藥基因,接合子僅檢測到tetR基因。本研究初步探明了fosA3基因在豬源大腸桿菌中的傳播機制,為臨床指導(dǎo)合理用藥及控制其快速傳播提供理論依據(jù)
【關(guān)鍵詞】：大腸桿菌 fosA3 Southern雜交 cfr 傳播機制
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.61
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-8
• 前言8-9
• 1.1 研究目的及意義8
• 1.2 研究的主要內(nèi)容8-9
• 第一篇 文獻綜述9-15
• 第一章 大腸桿菌研究進展9-12
• 1.1 大腸桿菌概述9-10
• 1.2 大腸桿菌的耐藥性及研究狀況10-12
• 第二章 磷霉素耐藥性研究現(xiàn)狀12-15
• 2.1 磷霉素及其衍生物研究進展12-13
• 2.2 磷霉素及其衍生物的耐藥機制13
• 2.3 fosA3基因的研究進展13-15
• 第二篇 研究內(nèi)容15-61
• 第一章 豬源磷霉素耐藥大腸桿菌的分離、鑒定及分子分型15-32
• 1.1 前言15
• 1.2 材料15-16
• 1.3 方法16-26
• 1.4 結(jié)果與分析26-29
• 1.5 討論29-31
• 1.6 小結(jié)31-32
• 第二章 fosA3基因陽性大腸桿菌耐藥性與基因定位研究32-60
• 2.1 前言32
• 2.2 材料與方法32-47
• 2.3 結(jié)果47-57
• 2.4 討論57-59
• 2.5 小結(jié)59-60
• 第三章 結(jié)論60-61
• 參考文獻61-69
• 作者簡介69-70
• 致謝70-71

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