本文關(guān)鍵詞：Gnα11和Gnαs在不同毛色綿羊皮膚中的表達(dá)與定位分析

  更多相關(guān)文章： Gnα11 Gnαs 綿羊 QRT-PCR 免疫熒光

【摘要】：天然的毛色不僅是毛用動物特有的生物學(xué)性狀,而且還具有很高的經(jīng)濟(jì)學(xué)價(jià)值。G蛋白信號通路在調(diào)節(jié)動物毛色形成的過程中起著至關(guān)重要的作用,其中,Gnα11和Gnas分別是異源三聚體G蛋白α亞基下游中的兩個(gè)小亞基。在內(nèi)皮素信號途徑中,Gnα11通過內(nèi)皮素的作用調(diào)控毛色的形成,其中內(nèi)皮素及其受體對黑色素細(xì)胞的成熟和分化具有促進(jìn)作用。在黑皮質(zhì)素信號路徑中,Gnas通過黑色素皮質(zhì)素途徑發(fā)揮作用,并調(diào)節(jié)單個(gè)黑色素細(xì)胞中不同類型色素的形成。因此,Gnα11和Gnas可能與動物毛色的形成有關(guān)。為了探討Gnα11和Gnas與綿羊毛色形成的關(guān)系,本試驗(yàn)通過PCR擴(kuò)增綿羊皮膚組織的Gnα11和Gnas基因序列,并對其在不同毛色綿羊皮膚中的表達(dá)與定位進(jìn)行研究。試驗(yàn)結(jié)果顯示：1. RT-PCR擴(kuò)增得到Gnα11和Gnas的部分基因條帶,測序結(jié)果與擴(kuò)增條帶大小相符,長度分別為300bp和139bp,說明Gnα11和Gnas均可在綿羊皮膚上正常表達(dá)。2. QRT-PCR結(jié)果顯示,Gnα11mRNA在黑色和白色綿羊皮膚中的相對表達(dá)量分別是1.8323±0.0864和1.0955±0.1238,黑色綿羊是白色綿羊的1.7倍；Gnas mRNA在黑色和白色綿羊皮膚中的相對表達(dá)量分別是2.8068±0.2343和1.1732±0.1647,黑色綿羊是白色綿羊的2.4倍。以上表明,Gnα11和Gnas在黑色綿羊皮膚中的mRNA表達(dá)量均極顯著高于白色綿羊(P0.01),說明兩者與綿羊毛色的表型有一定的相關(guān)性。3. Western blotting結(jié)果顯示,黑色和白色綿羊皮膚組織總蛋白均可與兔抗Gnα11多克隆抗體和兔抗Gnas多克隆抗體結(jié)合并發(fā)生免疫陽性反應(yīng),兩個(gè)蛋白分子質(zhì)量分別約為42 kDa和111 kDa。在黑色和白色綿羊皮膚中,Gnα11蛋白的相對表達(dá)量分別是0.4843±0.1292和0.2388±0.0889,黑色綿羊是白色綿羊的2.0倍：Gnas蛋白的相對表達(dá)量分別是0.4421±0.0435和0.2678±0.0720,黑色綿羊是白色綿羊的1.7倍,可見Gnα11和Gnas在黑色綿羊皮膚中的蛋白表達(dá)量均顯著高于白色綿羊(P0.05)。4.免疫組織化學(xué)和免疫熒光試驗(yàn)均檢測到：Gnα11主要表達(dá)于綿羊皮膚組織的毛囊外根鞘組織;Gnas在綿羊皮膚組織的毛囊外根鞘組織和毛乳頭都有表達(dá),表明Gnα11和Gnas均可作為標(biāo)記蛋白參與綿羊毛色的形成。綜上所述,Gnα11和Gnas在不同毛色綿羊皮膚組織中均有表達(dá)和定位,而且表達(dá)量存在一定的差異性,推測Gnα11和Gnas可能與綿羊毛色的形成有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：Gnα11 Gnαs 綿羊 QRT-PCR 免疫熒光
【學(xué)位授予單位】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S826
【目錄】：

• 摘要7-9
• 前言9-10
• 文獻(xiàn)綜述10-24
• 1 黑色素細(xì)胞的研究概述10-16
• 1.1 黑色素細(xì)胞的起源10-13
• 1.2 黑色素細(xì)胞的分類13-16
• 2 黑色素的研究概述16-19
• 2.1 黑色素的分類16-17
• 2.2 黑色素的合成17-19
• 3 G蛋白偶聯(lián)信號系統(tǒng)的基本結(jié)構(gòu)19-20
• 4 MC1R/Gαs信號通路的結(jié)構(gòu)及功能20-21
• 4.1 MC1R基因結(jié)構(gòu)20
• 4.2 MC1R/Gαs信號通路的功能20-21
• 5 內(nèi)皮素/Gαq信號通路的結(jié)構(gòu)及功能21-24
• 5.1 內(nèi)皮素的基本結(jié)構(gòu)21-22
• 5.2 內(nèi)皮素/Gαq信號通路的功能22-24
• 材料與方法24-35
• 1 試驗(yàn)材料24-27
• 1.1 試驗(yàn)動物及取材24
• 1.2 主要儀器24
• 1.3 主要試劑24-25
• 1.4 主要溶液的配制25-27
• 2 試驗(yàn)方法27-35
• 2.1 Gnα11和Gnαs基因部分序列的克隆及分析27-29
• 2.1.1 皮膚組織總RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄合成cDNA27
• 2.1.2 PCR引物的設(shè)計(jì)與合成27-28
• 2.1.3 PCR產(chǎn)物的擴(kuò)增28-29
• 2.2 QRT-PCR反應(yīng)29-30
• 2.2.1 QRT-PCR引物的設(shè)計(jì)29-30
• 2.2.2 QRT-PCR反應(yīng)體系的建立30
• 2.2.3 QRT-PCR數(shù)據(jù)分析30
• 2.3 Western blotting30-32
• 2.3.1 綿羊皮膚組織總蛋白的提取30
• 2.3.2 蛋白含量的測定30
• 2.3.3 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳30-31
• 2.3.4 轉(zhuǎn)膜31-32
• 2.3.5 雜交32
• 2.3.6 顯色32
• 2.3.7 Western blotting圖像分析及數(shù)據(jù)處理32
• 2.4 Gnα11和Gnαs蛋白的定位32-35
• 2.4.1 石蠟切片的制備32-33
• 2.4.2 免疫組織化學(xué)33-34
• 2.4.3 免疫熒光技術(shù)34-35
• 結(jié)果與分析35-44
• 1 綿羊Gnα11和Gnαs基因部分序列的克隆及分析結(jié)果35-37
• 1.1 總RNA的檢測結(jié)果35
• 1.2 RT-PCR的擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果35-36
• 1.3 RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的測序結(jié)果36-37
• 2 Gnα11和Gnαs在不同毛色綿羊皮膚組織中的基因表達(dá)結(jié)果37-39
• 2.1 Gnα11和Gnαs基因的擴(kuò)增動力學(xué)曲線和溶解曲線37-39
• 2.2 Gnα11和Gnαs基因在不同毛色綿羊皮膚中的表達(dá)結(jié)果39
• 3 Gnα11和Gnαs在不同毛色綿羊皮膚組織中的蛋白表達(dá)結(jié)果39-41
• 4 Gnα11和Gnαs在不同毛色綿羊皮膚組織中的蛋白定位結(jié)果41-44
• 4.1 免疫組織化學(xué)定位結(jié)果41-43
• 4.2 免疫熒光技術(shù)定位結(jié)果43-44
• 討論44-47
• 1 Gnα11在不同毛色綿羊皮膚組織中的表達(dá)差異44-45
• 2 Gnαs在不同毛色綿羊皮膚組織中的表達(dá)差異45-46
• 3 Gnα11和Gnαs在綿羊皮膚組織中的表達(dá)定位46-47
• 全文總結(jié)47-48
• 參考文獻(xiàn)48-55
• ABSTRACT55-57
• 致謝57

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本文編號：921153