本文關(guān)鍵詞：結(jié)核菌中藥抗菌增效劑的篩選及黃連總生物堿對PhoPR雙組份系統(tǒng)基因轉(zhuǎn)錄水平的影響

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【摘要】：結(jié)核病(Tuberculosis,TB)是由革蘭氏陽性細(xì)菌——結(jié)核分枝桿菌引起的一種慢性、消耗性人畜共患傳染病。結(jié)核病不僅威脅到動(dòng)物的生命安全,也影響到人類的健康。目前治療結(jié)核病以一、二線化學(xué)藥物為主,但由于長期的不合理用藥,導(dǎo)致大量耐藥結(jié)核菌的產(chǎn)生,給治療帶來了巨大的困難,尋找新的治療方案勢在必行。中藥是我國特有的自然資源,并且具有在治療疾病時(shí)不易產(chǎn)生耐藥性和副作用等優(yōu)點(diǎn),因此本試驗(yàn)旨在從我國的中藥資源中篩選出新的、理想的結(jié)核分枝桿菌多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑或抗菌增效劑,并對其抗菌增效的機(jī)理進(jìn)行初步的研究和探討。本試驗(yàn)通過比例法對44株鹿源結(jié)核菌進(jìn)行多藥耐藥性的檢測,結(jié)果顯示只有MT-7、MB-1確定為多藥耐藥結(jié)核菌,以其作為試驗(yàn)?zāi)Ｐ途Ｓ盟岱ê痛继岱ㄖ苽?4種中藥的浸膏,將浸膏溶解后通過微量稀釋(Microdilution alamar blueassay,MABA)法作用于多藥耐藥菌MT-7、MB-1,以標(biāo)準(zhǔn)敏感菌H37Rv為對照,結(jié)果顯示黃連、獨(dú)活和側(cè)柏葉有明顯的抗結(jié)核活性,其中黃連水粗提物和乙醇粗提物效果最佳。將篩選出有抗結(jié)核菌作用的中藥提取物與RFP和INH通過棋盤法聯(lián)合作用于MT-7、MB-1、H37Rv,其結(jié)果顯示黃連醇提物與RFP聯(lián)合作用MT-7、MB-1、H37Rv,顯示有協(xié)同作用,表明黃連醇提物是RFP的抗菌增效劑。提取和純化黃連浸膏中的總生物堿,以核酸染料法測定黃連水粗提物、乙醇粗提物、純化物中總堿的含量,采用MABA法測定黃連提取物、黃連生物堿與小檗堿的抗結(jié)核菌的活性,結(jié)果顯示,純化物總生物堿含量最高且抗結(jié)核菌的效果最佳,比單體小檗堿的效果還要好。用分離及純化得到的黃總生物堿通過棋盤法與六種抗結(jié)核化學(xué)藥物合用,結(jié)果顯示黃連總堿與RFP合用對MT-7、MB-1、H37Rv均有協(xié)同作用,其FIC值均≤0.5,表明黃連生物堿是RFP的抗菌增效劑;同時(shí)檢測了黃連總堿和小檗堿對細(xì)胞的毒性,黃連總堿和小檗堿在≥100μg/mL時(shí)對細(xì)胞具有毒性作用,此劑量遠(yuǎn)高于黃連總堿和小檗堿對結(jié)核菌的MIC值。因此,從毒性方面來看,該試驗(yàn)結(jié)果可以為臨床黃連總堿用藥提供依據(jù)。分別用不同濃度的黃連總生物堿、黃連總生物堿與RFP聯(lián)合作用MT-7、MB-1、H37Rv,提取總RNA,采用熒光定量PCR方法分析比較與耐藥性有關(guān)PhoPR雙組分系統(tǒng)的PhoP和PhoR的基因的表達(dá)水平,其結(jié)果顯示,在高濃度黃連生物堿作用時(shí),多藥耐藥結(jié)核菌MT-7、MB-1的PhoP和PhoR的基因的表達(dá)水平明顯下降,說明黃連總生物堿降低MB-1、MT-7的耐藥性;并且黃連總生物堿與RPF聯(lián)合作用時(shí),多藥耐藥結(jié)核菌MT-7、MB-1的PhoP和PhoR的基因的表達(dá)水平明顯下降,說明黃連總生物堿與RFP能協(xié)同抑制結(jié)核菌,進(jìn)一步表明黃連生物堿是RFP抗菌增效劑,其抗菌增效機(jī)制需要進(jìn)一步深入研究。本研究選取有抑菌作用的24種中藥,并成功篩選出有明顯抗菌增效作用的中藥黃連,從而為解決動(dòng)物源結(jié)核分枝桿菌的耐藥性問題做出了有益的探索。
【關(guān)鍵詞】：鹿源結(jié)核菌 中藥 抗菌增效劑 黃連總生物堿 PhoPR雙組分系統(tǒng)
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.618
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-9
• 前言9-10
• 第一篇 文獻(xiàn)綜述10-22
• 第一章 結(jié)核病篇10-15
• 1.1 鹿結(jié)核病的概述10-12
• 1.2 多藥耐藥結(jié)核病的概述12-15
• 第二章 中藥抗菌增效劑的研究15-18
• 2.1 中藥抗結(jié)核分枝桿菌的研究15-16
• 2.2 中藥耐藥抑制劑的研究16-18
• 第三章 結(jié)核菌PhoPR雙組份系統(tǒng)的研究現(xiàn)狀18-22
• 3.1 PhoPR雙組份系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)18
• 3.2 PhoPR與細(xì)胞壁或細(xì)胞膜18-19
• 3.3 PhoPR與結(jié)核分枝桿菌的毒力19-20
• 3.4 PhoPR對結(jié)核分枝桿菌在巨噬細(xì)胞生存的影響20-21
• 3.5 PhoPR與結(jié)核分枝桿菌的新型疫苗有關(guān)21-22
• 第二篇 研究內(nèi)容22-59
• 第一章 結(jié)核菌中藥抗菌增效劑的篩選22-34
• 1.1 材料22-23
• 1.2 方法23-28
• 1.3 結(jié)果28-33
• 1.4 討論33
• 1.5 小結(jié)33-34
• 第二章 黃連總生物堿抗菌增效作用的研究34-48
• 2.1 材料34-35
• 2.2 方法35-39
• 2.3 結(jié)果39-45
• 2.4 討論45-47
• 2.5 小結(jié)47-48
• 第三章 黃連總生物堿對結(jié)核菌PhoPR雙組份系統(tǒng)基因轉(zhuǎn)錄水平的影響48-59
• 3.1 材料48-49
• 3.2 方法49-53
• 3.3 結(jié)果53-57
• 3.4 討論57-58
• 3.5 小結(jié)58-59
• 結(jié)論59-60
• 參考文獻(xiàn)60-67
• 作者簡介67-68
• 致謝68

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：900533