發(fā)布時間：2017-09-17 18:31

  本文關(guān)鍵詞：豬流行性腹瀉病毒變異毒株、經(jīng)典毒株及弱毒疫苗株多重RT-PCR鑒別檢測方法的建立及應(yīng)用

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【摘要】：為建立豬流行性腹瀉病毒(PEDV)變異毒株、經(jīng)典毒株及弱毒疫苗株快速鑒別檢測方法,根據(jù)Gen Bank中公布的PEDV變異毒株、經(jīng)典毒株及弱毒疫苗株的S基因和ORF3基因,設(shè)計合成2對特異性擴(kuò)增引物,用以擴(kuò)增PEDV S基因和ORF3基因,通過目的片段的數(shù)量和片段大小來判斷PEDV的毒株類型;通過對退火溫度等反應(yīng)條件的優(yōu)化,建立了檢測不同PEDV毒株類型的多重RT-PCR鑒別檢測方法。結(jié)果顯示,所建立的多重RT-PCR鑒別檢測方法能特異性區(qū)分PEDV變異毒株、經(jīng)典毒株和弱毒疫苗株;PEDV變異毒株擴(kuò)增出2條目的條帶,分別為234 bp的ORF3基因片段和826 bp的S基因片段;PEDV經(jīng)典毒株擴(kuò)增出1條目的條帶,片段大小為234 bp的ORF3基因片段;而弱毒疫苗株擴(kuò)增出1條目的條帶,片段大小為185 bp的ORF3基因片段;與豬傳染性胃腸炎病毒、A群豬輪狀病毒、豬嵴病毒、豬繁殖與呼吸綜合癥病毒、豬偽狂犬病毒、豬瘟病毒、豬圓環(huán)病毒2型、豬乙型腦炎病毒、豬細(xì)環(huán)病毒及豬細(xì)小病毒均無交叉反應(yīng);敏感性試驗顯示,該方法能檢測到的最低核酸濃度為2.3×10-4ng/μl;且該方法具有良好的重復(fù)性。利用該方法對采集自廣西部分地區(qū)的91份臨床腹瀉樣品進(jìn)行檢測,樣品中PEDV陽性樣品有64份,其中變異毒株占89.06%(57/64),經(jīng)典毒株占4.69%(3/64),弱毒疫苗株占6.25%(4/64)。結(jié)果表明,該多重RT-PCR鑒別檢測方法特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡單,為豬流行性腹瀉的流行病學(xué)及病原的鑒別診斷研究提供了可供借鑒的技術(shù)手段。
【作者單位】： 廣西獸醫(yī)研究所廣西畜禽疫苗新技術(shù)重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 豬流行性腹瀉病毒 變異毒株 經(jīng)典毒株 弱毒疫苗株 RT-PCR 鑒別診斷
【基金】：廣西水產(chǎn)畜牧科技推廣應(yīng)用項目(桂漁牧科201633044,201633041,201633034) 南寧市西鄉(xiāng)塘區(qū)科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)計劃項目(2014304)
【分類號】：S852.65
【正文快照】： 豬流行性腹瀉(porcine epidemic diarrhea,PED)是由豬流行性腹瀉病毒(porcine epidemic diarrheavirus,PEDV)引起的豬的一種高度接觸性腸道傳染病,該病的主要特征是急性水樣腹瀉、嘔吐和脫水死亡;各種年齡階段的豬只均易感,對1~2周齡哺乳仔豬危害最為嚴(yán)重,病死率可高達(dá)90%~100

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本文編號：871036