本文關(guān)鍵詞：奶牛隱性乳房炎病原菌的分離以及綠原酸的抗炎機(jī)制研究

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【摘要】：為了調(diào)查貴陽市某奶牛場奶牛隱性乳房炎的病原菌種類及綠原酸(CGA)的抗炎作用機(jī)制。本文采用加州乳房炎檢測法(CMT法)檢測泌乳奶牛并對患病奶牛乳汁進(jìn)行病原菌的分離、純化及生化鑒定。利用實驗動物炎癥模型,觀察CGA對急性炎癥的影響、對毛細(xì)血管通透性增加的影響、對脂多糖(LPS)導(dǎo)致乳腺病理學(xué)變化的影響來評價其對炎性乳腺組織的保護(hù)作用;采用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)方法檢測CGA對乳腺上皮細(xì)胞(MECs)分泌炎性因子白介素6(IL-6)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)的影響,初步探討CGA的抗炎機(jī)制。結(jié)果表明:引起奶牛隱性乳房炎的病原菌中革蘭氏陰性菌46株,占27.54%;革蘭氏陽性球菌121株,占72.46%。腹腔注射給藥劑量為0.2mg·mL-1時,CGA對炎性所致的小鼠耳廓腫脹及毛細(xì)血管通透性較空白對照組都有顯著或極顯著下降(P0.05,P0.01)。在25μL0.25mg·mL-1 LPS作用于妊娠母鼠,乳腺組織剖檢變化、病理組織學(xué)及電鏡透射觀察炎癥明顯,CGA不同濃度組(25mg·kg-1、50mg·kg-1、75mg·kg-1)的乳腺組織充血及腫脹程度減輕、腺泡壁逐漸變薄、腺泡內(nèi)中性粒細(xì)胞分泌減少、細(xì)胞器損傷數(shù)量減少或減輕,呈劑量依賴性。50mg·kg-1、75mg·kg-1 CGA組能極顯著降低LPS導(dǎo)致的肥大細(xì)胞(MC)數(shù)量增加(P0.01)。20μg·mL-1、200μg·mL-1 CGA組能極顯著減少LPS介導(dǎo)MECs的TNF-α分泌(P0.01),CGA各組能極顯著減少LPS介導(dǎo)MECs的IL-6分泌(P0.01)。結(jié)果提示:引起奶牛隱性乳房炎的致病菌以革蘭氏陽性菌為主,這將為臨床診療提供方向。CGA具有良好的抗炎活性,可減少LPS導(dǎo)致的乳腺組織的損傷,通過抑制LPS導(dǎo)致MECs炎性因子TNF-α、IL-6的釋放發(fā)揮抗炎作用。這些結(jié)果為臨床奶牛乳房炎的防治提供理論依據(jù),CGA作為抗炎藥物在奶牛隱性乳房炎防控中有潛在的應(yīng)用前景。
【關(guān)鍵詞】：隱性乳房炎 綠原酸 乳腺上皮細(xì)胞 抗炎機(jī)制 病原菌
【學(xué)位授予單位】：貴州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S858.23
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-8
• 縮略語8-9
• 前言9-12
• 第一章 實驗動物與材料12-16
• 1.1 實驗動物12
• 1.2 主要藥物及試劑12
• 1.3 主要溶液的配制12-15
• 1.4 主要實驗儀器15-16
• 第二章 實驗方法16-20
• 2.1 奶牛隱性乳房炎病原菌的分離鑒定16-17
• 2.1.1 奶牛隱性乳房炎的診斷及乳樣采集16
• 2.1.2 細(xì)菌的分離培養(yǎng)及培養(yǎng)特性鑒定16
• 2.1.3 病原菌的鑒定16-17
• 2.2 CGA對實驗性炎癥藥效學(xué)的評價17-18
• 2.2.1 CGA對急性炎癥的影響17
• 2.2.2 CGA對毛細(xì)血管通透性增加的影響17-18
• 2.2.3 CGA對LPS導(dǎo)致小鼠乳腺炎組織形態(tài)學(xué)的影響18
• 2.3 CGA對LPS導(dǎo)致MECs分泌炎性細(xì)胞因子TNF-ɑ、IL-6 的影響18-19
• 2.3.1 MTT法篩選CGA作用于MECs的適宜濃度18-19
• 2.3.2 ELISA法測定TNF-ɑ、IL-6 的分泌量19
• 2.4 統(tǒng)計學(xué)處理19-20
• 第三章 實驗結(jié)果20-30
• 3.1 奶牛隱性乳房炎病原菌的分離鑒定20-22
• 3.1.1 送檢乳樣細(xì)菌檢出結(jié)果20
• 3.1.2 細(xì)菌革蘭氏染色鏡檢結(jié)果20
• 3.1.3 生化鑒定結(jié)果20
• 3.1.4 細(xì)菌種類鑒定結(jié)果20-22
• 3.2 CGA對實驗性炎癥藥效學(xué)評價結(jié)果22-28
• 3.2.1 CGA對急性炎癥的影響22
• 3.2.2 CGA對毛細(xì)血管通透性增加的影響22-24
• 3.2.3 CGA對LPS導(dǎo)致小鼠乳腺炎組織形態(tài)學(xué)的影響24-28
• 3.3 CGA對LPS導(dǎo)致MECs分泌炎性細(xì)胞因子TNF-ɑ、IL-6 的影響28-30
• 3.3.1 CGA作用于MECs的適宜濃度28
• 3.3.2 TNF-ɑ、IL-6 分泌量測定結(jié)果28-30
• 第四章 討論30-32
• 第五章 小結(jié)32-33
• 文章綜述33-46
• 參考文獻(xiàn)46-53
• 附錄I53-54
• 附錄II54-55
• 附錄Ⅲ55-58
• 致謝58-59

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本文編號：868575