本文關鍵詞：細菌共培養(yǎng)對豬源糞腸球菌生物學特性的影響

  更多相關文章： 糞腸球菌N41 生長特性 毒力基因 熒光定量PCR 生物膜 黏附

【摘要】：糞腸球菌是人和動物腸道的一種條件致病菌,但近年來糞腸球菌在醫(yī)院內(nèi)對人和動物感染日益增多。細菌與細菌以及細菌與病毒之間存在著較為常見的混合感染,混合感染過程中各微生物之間的相互作用和相互影響不清楚,尤其是腸球菌這種毒力較弱的細菌與其他微生物混合感染后的相互影響還不清楚。大腸桿菌O157:H7、沙門氏菌和金黃色葡萄球菌與腸球菌一樣也是人和動物腸道或皮膚常見的病原體,目前在糞腸球菌致病過程中這三種細菌對其影響尤其是在分子水平的影響仍不清楚。本研究通過在體外共培養(yǎng)條件將這三種細菌與糞腸球菌N41共培養(yǎng)后,觀察其細菌生長曲線變化,以及N41相關毒力基因轉錄水平的變化,然后體外觀察共培養(yǎng)后N41的生物膜形成能力、黏附、抗吞噬作用,為研究細菌間相互作用機制以及豬源糞腸球菌混合感染的預防和治療打下良好的基礎。生長特性影響通過對共培養(yǎng)條件下大腸桿菌O157:H7、沙門氏菌和金黃色葡萄球菌對糞腸球菌N41分離株生長特性以及與單獨培養(yǎng)時生長特性相比,各種細菌共培養(yǎng)后其生長特性均受到不同程度的影響。共培養(yǎng)后,這三種細菌的生長都受到糞腸球菌N41的不同程度的抑制作用。其中,大腸桿菌菌體峰濃度降低約30倍,沙門氏菌菌體峰濃度降低約110倍,而金黃色葡萄球菌菌體峰濃度降低約8倍。此外共培養(yǎng)后,大腸桿菌O157:H7和沙門氏菌對糞腸球菌N41株具有較弱的抑制作用,而金黃色葡萄球菌和N41共培養(yǎng)后,N41菌體濃度上升967倍,可見金黃色葡萄球菌對N41有較強的促進作用。毒力基因轉錄水平影響依據(jù)生長曲線,分別提取對數(shù)中期(ML)、對數(shù)后期(LL)、穩(wěn)定前期(EL)和穩(wěn)定期(S)的總RNA,并根據(jù)GenBank上已發(fā)表的糞腸球菌V583菌株的基因序列設計26種毒力基因引物,進行SYBR Green I實時熒光定量PCR測定。結果顯示,糞腸球菌N41與大腸桿菌O157:H7共培養(yǎng)時,在N41菌株26種毒力基因中,大腸桿菌O157:H7促進了ebpABC、fsrAB、gel E、ace、esp等13種毒力基因在四個不同生長時期的轉錄,而毒力基因CylR1、CylR2、psr、atn、efaA和AS在四個生長時期變化不明顯。糞腸球菌N41與沙門氏菌共培養(yǎng)時,沙門氏菌促進了ebpA、ebpC、gelE、ace、esp、fsrA、psr等12種毒力基因在四個不同生長時期的轉錄,而毒力基因CylR1、Cyl R2、efaA和AS在四個生長時期變化不明顯。糞腸球菌N41與金黃色葡萄球菌共培養(yǎng)時,金黃色葡萄球菌促進了ebpABC、fsrABC、gel E、ace、esp、cylL-L、cylL-S等22種毒力基因在四個不同生長時期的轉錄,毒力基因efaA和AS在四個生長時期變化不明顯。此外分別與三種細菌共培養(yǎng)后,毒力基因SlyA和sprE在四個生長期中的轉錄量都處于下降趨勢。由此表明,大腸桿菌O157:H7、沙門氏菌和金黃色葡萄球菌整體都促進了糞腸球菌N41菌株多種毒力基因mRNA的轉錄水平。體外黏附、侵入抗吞噬影響體外觀察共培養(yǎng)細菌的生物膜形成量,N41的黏附和抗吞噬作用。在生物被膜試驗中,金黃色葡萄球菌與N41共培養(yǎng)后生物膜形成總量增加,差異顯著。細菌黏附試驗的比較結果顯示,N41與沙門氏菌和金黃色葡萄球菌共培養(yǎng)后,黏附到豬腸上皮細胞的N41菌落總數(shù)都有明顯變化,差異顯著。在小鼠腹腔巨噬細胞吞噬試驗中,N41與金黃色葡萄球菌共培養(yǎng)后,N41對小鼠腹腔巨噬細胞的抗吞噬作用有明顯變化,差異顯著。這說明與沙門氏菌共培養(yǎng)后,N41菌株的黏附能力增強了,而與金黃色葡萄球菌共培養(yǎng)后,N41菌株的黏附和抗吞噬能力都增強了。
【關鍵詞】：糞腸球菌N41 生長特性 毒力基因 熒光定量PCR 生物膜 黏附
【學位授予單位】：河南農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S852.61
【目錄】：

• 致謝4-6
• 摘要6-8
• 文獻綜述8-20
• 引言20-21
• 試驗一 共培養(yǎng)后豬源糞腸球菌N41株的生長特性21-27
• 1 材料21-22
• 2 方法22-23
• 3 結果與分析23-25
• 4 討論25-27
• 試驗二 共培養(yǎng)后豬源糞腸球菌N41株毒力基因mRNA水平的變化情況27-43
• 1 材料27-28
• 2 方法28-31
• 3 結果與分析31-39
• 4 討論39-43
• 試驗三 共培養(yǎng)對豬源糞腸球菌N41生物膜形成、黏附作用和抗吞噬作用的影響43-51
• 1 材料43-44
• 2 方法44-47
• 3 結果與分析47-49
• 4 討論49-51
• 全文總結51-52
• 參考文獻52-62
• 發(fā)表論文62-63
• 英文摘要63-64

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本文編號：856487