本文關(guān)鍵詞：E.tenella感染對(duì)雛雞ChIL-17及相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)的影響

  更多相關(guān)文章： 柔嫩艾美耳球蟲 ChIL-17A ChIL-17F ChIL-17RA 實(shí)時(shí)熒光定量PCR

【摘要】：雞球蟲病(Coccidiosis)是嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展的胞內(nèi)寄生原蟲病,主要激發(fā)產(chǎn)生以細(xì)胞免疫為主的免疫應(yīng)答。IL-17家族細(xì)胞因子主要由Th17細(xì)胞分泌,在許多感染性疾病、自身免疫性疾病和炎癥性疾病中發(fā)揮重要作用。目前針對(duì)IL-17在疾病感染中的作用研究多是以哺乳動(dòng)物為對(duì)象,有關(guān)球蟲感染對(duì)ChIL-17家族細(xì)胞因子表達(dá)的影響報(bào)道較少。本課題通過建立人工感染E.tenella模型,以實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)為手段,檢測(cè)E.tenella感染后不同時(shí)間點(diǎn)雛雞盲腸扁桃體和脾臟ChIL-17A、Ch IL-17F、ChIL-17RA及相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)動(dòng)態(tài)變化,初步探討了E.tenella感染對(duì)ChIL-17家族細(xì)胞因子表達(dá)的影響,主要研究結(jié)果如下:1.人工感染E.tenella模型的建立為建立適合后續(xù)試驗(yàn)的人工感染E.tenella模型,分別用1×104、5×104、10×104、15×104個(gè)/只E.tenella孢子化卵囊口服接種14日齡雛雞,并記錄不同劑量組雛雞在接種后的臨床表現(xiàn)、血便記分和病變值等指標(biāo)。結(jié)果顯示,接種劑量為5×104的雛雞臨床癥狀明顯,死亡率為10%,糞便排出卵囊數(shù)多,相對(duì)增重率和病變值居中,所建立的模型可用于檢測(cè)E.tenella感染后ChIL-17及相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)水平。2.雛雞ChIL-17及相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)水平實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立本試驗(yàn)自主設(shè)計(jì)或引用文獻(xiàn)中ChIL-17及相關(guān)細(xì)胞因子的引物序列,建立檢測(cè)它們表達(dá)水平的實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法。結(jié)果顯示,擴(kuò)增的所有基因目的片段大小與預(yù)期相符;建立的實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法溶解曲線均呈單峰,其溶解溫度在82.5℃~88℃之間;標(biāo)準(zhǔn)曲線稀釋度均為6個(gè)點(diǎn)以上,相關(guān)系數(shù)為0.982~1.000,斜率為-3.129~-3.299;PCR擴(kuò)增效率為101.0%~108.7%;變異系數(shù)均小于2.5%,全部符合實(shí)時(shí)熒光定量pcr檢測(cè)技術(shù)要求。表明所建立的實(shí)時(shí)熒光定量pcr方法穩(wěn)定性好、可靠性高、特異性強(qiáng),可作為后續(xù)試驗(yàn)研究e.tenella感染對(duì)chil-17a、chil-17f和chil-17ra及相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)影響的技術(shù)檢測(cè)方法。3.e.tenella感染對(duì)雛雞chil-17a、chil-17f及chil-17ra表達(dá)的影響為研究e.tenella感染后雛雞盲腸扁桃體和脾臟chil-17a、chil-17f及chil-17ra表達(dá)情況,用e.tenella孢子化卵囊(5×104個(gè)/只)口服感染14日齡非免疫小公雞,于0h、2h、4h、6h、12h、24h、3d、5d、7d九個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)分別同時(shí)提取對(duì)照組和試驗(yàn)組雛雞盲腸扁桃體和脾臟總rna,采用實(shí)時(shí)熒光定量pcr方法檢測(cè)兩種組織中三個(gè)基因的表達(dá)水平。盲腸扁桃體各基因檢測(cè)結(jié)果顯示,chil-17a的表達(dá)水平在感染后持續(xù)下調(diào),感染后3d達(dá)到最低水平,僅為感染前(0h)的0.0097倍(p0.01);而chil-17f在感染早期明顯上調(diào),感染后2h和4h分別上調(diào)3.07倍(p0.05)和6.49倍(p0.01),與chil-17a表達(dá)變化相反;chil-17ra于感染后24h和7d分別上調(diào)1.73倍和2.21倍(p0.01)。脾臟各基因檢測(cè)結(jié)果顯示,chil-17a表達(dá)水平稍微下調(diào),無顯著差異,但在感染后7d上調(diào)為感染前(0h)的2.71倍(p0.05);chil-17f感染后2h表達(dá)水平降低為0h的0.13倍(p0.01),6h上調(diào)為0h的1.81倍(p0.01),隨后在24h和7d兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別下調(diào)為0h的0.21倍(p0.01)和0.38倍(p0.05);chil-17ra僅在2h檢測(cè)到其表達(dá)下調(diào)0.60倍(p0.05),其余時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)水平無顯著差異。結(jié)果表明盲腸扁桃體和脾臟chil-17a、chil-17f及chil-17ra都參與了雛雞抗e.tenella感染的反應(yīng),其中盲腸扁桃體chil-17a和chil-17f在感染早期(2h~4h)的相反表達(dá)動(dòng)態(tài)說明二者在雛雞防御e.tenella感染的早期具有不同的免疫調(diào)節(jié)功能,而這一具體調(diào)節(jié)機(jī)制還有待進(jìn)一步的研究加以闡明。4.e.tenella感染對(duì)雛雞其它相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)的影響為探究chil-17與其它相關(guān)細(xì)胞因子之間的相互作用,針對(duì)性的選擇由th1和th2細(xì)胞分泌且與il-17分化相關(guān)的il-6、ifn-γ、gm-csf以及il-12四個(gè)相關(guān)細(xì)胞因子進(jìn)行e.tenella感染后表達(dá)變化的檢測(cè)。結(jié)果顯示,e.tenella感染后2h,盲腸扁桃體gm-csf和il-12分別上調(diào)2.96倍(p0.01)和18.63倍(p0.01);感染后4h,盲腸扁桃體il-6表達(dá)水平上調(diào)(p0.01),il-12表達(dá)水平持續(xù)上調(diào)到峰值,為0h的133.95倍(p0.01),脾臟il-6、gm-csf和il-12表達(dá)水平急劇上調(diào)至峰值,表達(dá)水平分別為0h的9.65倍、340.19倍和119.83倍(p0.01);隨后6h和12h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)中,盲腸扁桃體和脾臟il-6、ifn-γ以及il-12表達(dá)水平無顯著差異,盲腸扁桃體gm-csf持續(xù)下調(diào)表達(dá);感染后24h,脾臟IL-6上調(diào)為0h的3.14倍(P0.05);感染后第3d和第5d,盲腸扁桃體GM-CSF依然穩(wěn)定的下調(diào)表達(dá)(P0.05),而脾臟IFN-γ表達(dá)水平分別上調(diào)為0h的391.08倍和138.28倍(P0.01),盲腸扁桃體IFN-γ在第5d時(shí)上調(diào)為0h的6.31倍(P0.01),達(dá)到上調(diào)高峰;感染后第7d,盲腸扁桃體IL-6達(dá)到上調(diào)高峰,表達(dá)水平上調(diào)為0h的4.91倍(P0.01)。結(jié)果表明,雛雞IL-6、IL-12、IFN-γ和GM-CSF都參與了抗E.tenella感染的免疫反應(yīng)。IFN-γ在感染后期表達(dá)水平上調(diào),GM-CSF表達(dá)下調(diào),表明在雛雞抗E.tenella感染后期,介導(dǎo)細(xì)胞免疫的Th1型細(xì)胞因子發(fā)揮著主導(dǎo)作用。總之,本研究用5×104個(gè)/只E.tenella孢子化卵囊接種雛雞以建立人工感染模型,檢測(cè)感染后Ch IL-17及其它相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)變化。結(jié)果表明,ChIL-17A、ChIL-17F及ChIL-17RA都參與了雛雞抗E.tenella感染的反應(yīng);推測(cè)Th17細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)和Th1介導(dǎo)的細(xì)胞免疫反應(yīng)是雛雞抗E.tenella感染的主要免疫應(yīng)答反應(yīng)類型。Th17細(xì)胞分泌的ChIL-17主要參與宿主早期抗E.tenella感染的炎癥反應(yīng);隨著時(shí)間的推移和感染的發(fā)展,Th1型細(xì)胞因子IFN-γ表達(dá)水平極顯著上調(diào),宿主的免疫反應(yīng)向Th1型偏移,同時(shí)抑制Th2型細(xì)胞因子的分泌從而使GM-CSF表達(dá)下調(diào)。
【關(guān)鍵詞】：柔嫩艾美耳球蟲 ChIL-17A ChIL-17F ChIL-17RA 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S858.31
【目錄】：

• 摘要6-9
• Abstract9-12
• 第一章 文獻(xiàn)綜述12-22
• 1.1 雞球蟲病概述12-14
• 1.2 細(xì)胞因子與雞球蟲的感染與免疫14-22
• 第二章 前言22-24
• 第三章 人工感染E. tenella模型的建立24-30
• 3.1 試驗(yàn)材料24-25
• 3.2 試驗(yàn)方法25-26
• 3.3 試驗(yàn)結(jié)果26-28
• 3.4 分析與討論28-29
• 3.5 結(jié)論29-30
• 第四章 雛雞ChIL-17及相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)水平實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立30-46
• 4.1 試驗(yàn)材料30-31
• 4.2 試驗(yàn)方法31-35
• 4.3 試驗(yàn)結(jié)果35-43
• 4.4 分析與討論43-44
• 4.5 結(jié)論44-46
• 第五章 E. tenella感染對(duì)雛雞ChIL-17A、ChIL-17F及ChIL-17RA表達(dá)的影響46-54
• 5.1 試驗(yàn)材料46
• 5.2 試驗(yàn)方法46-47
• 5.3 試驗(yàn)結(jié)果47-50
• 5.4 分析與討論50-52
• 5.5 結(jié)論52-54
• 第六章 E. tenella感染對(duì)雛雞相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)的影響54-62
• 6.1 試驗(yàn)材料54
• 6.2 試驗(yàn)方法54-55
• 6.3 試驗(yàn)結(jié)果55-58
• 6.4 分析與討論58-60
• 6.5 結(jié)論60-62
• 第七章 全文結(jié)論及創(chuàng)新點(diǎn)62-64
• 7.1 全文結(jié)論62
• 7.2 創(chuàng)新點(diǎn)62-64
• 參考文獻(xiàn)64-76
• 致謝76-78
• 攻讀碩士期間論文發(fā)表情況78

【相似文獻(xiàn)】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 陳露;E.tenella感染對(duì)雛雞ChIL-17及相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)的影響[D];西南大學(xué);2016年

，

本文編號(hào)：844190