本文關(guān)鍵詞：E.tenella感染對雛雞ChIL-17及相關(guān)細胞因子表達的影響

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【摘要】：雞球蟲病(Coccidiosis)是嚴重危害養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展的胞內(nèi)寄生原蟲病,主要激發(fā)產(chǎn)生以細胞免疫為主的免疫應(yīng)答。IL-17家族細胞因子主要由Th17細胞分泌,在許多感染性疾病、自身免疫性疾病和炎癥性疾病中發(fā)揮重要作用。目前針對IL-17在疾病感染中的作用研究多是以哺乳動物為對象,有關(guān)球蟲感染對ChIL-17家族細胞因子表達的影響報道較少。本課題通過建立人工感染E.tenella模型,以實時熒光定量PCR技術(shù)為手段,檢測E.tenella感染后不同時間點雛雞盲腸扁桃體和脾臟ChIL-17A、Ch IL-17F、ChIL-17RA及相關(guān)細胞因子表達動態(tài)變化,初步探討了E.tenella感染對ChIL-17家族細胞因子表達的影響,主要研究結(jié)果如下:1.人工感染E.tenella模型的建立為建立適合后續(xù)試驗的人工感染E.tenella模型,分別用1×104、5×104、10×104、15×104個/只E.tenella孢子化卵囊口服接種14日齡雛雞,并記錄不同劑量組雛雞在接種后的臨床表現(xiàn)、血便記分和病變值等指標。結(jié)果顯示,接種劑量為5×104的雛雞臨床癥狀明顯,死亡率為10%,糞便排出卵囊數(shù)多,相對增重率和病變值居中,所建立的模型可用于檢測E.tenella感染后ChIL-17及相關(guān)細胞因子的表達水平。2.雛雞ChIL-17及相關(guān)細胞因子表達水平實時熒光定量PCR檢測方法的建立本試驗自主設(shè)計或引用文獻中ChIL-17及相關(guān)細胞因子的引物序列,建立檢測它們表達水平的實時熒光定量PCR方法。結(jié)果顯示,擴增的所有基因目的片段大小與預(yù)期相符;建立的實時熒光定量PCR方法溶解曲線均呈單峰,其溶解溫度在82.5℃~88℃之間;標準曲線稀釋度均為6個點以上,相關(guān)系數(shù)為0.982~1.000,斜率為-3.129~-3.299;PCR擴增效率為101.0%~108.7%;變異系數(shù)均小于2.5%,全部符合實時熒光定量pcr檢測技術(shù)要求。表明所建立的實時熒光定量pcr方法穩(wěn)定性好、可靠性高、特異性強,可作為后續(xù)試驗研究e.tenella感染對chil-17a、chil-17f和chil-17ra及相關(guān)細胞因子的表達影響的技術(shù)檢測方法。3.e.tenella感染對雛雞chil-17a、chil-17f及chil-17ra表達的影響為研究e.tenella感染后雛雞盲腸扁桃體和脾臟chil-17a、chil-17f及chil-17ra表達情況,用e.tenella孢子化卵囊(5×104個/只)口服感染14日齡非免疫小公雞,于0h、2h、4h、6h、12h、24h、3d、5d、7d九個不同時間點分別同時提取對照組和試驗組雛雞盲腸扁桃體和脾臟總rna,采用實時熒光定量pcr方法檢測兩種組織中三個基因的表達水平。盲腸扁桃體各基因檢測結(jié)果顯示,chil-17a的表達水平在感染后持續(xù)下調(diào),感染后3d達到最低水平,僅為感染前(0h)的0.0097倍(p0.01);而chil-17f在感染早期明顯上調(diào),感染后2h和4h分別上調(diào)3.07倍(p0.05)和6.49倍(p0.01),與chil-17a表達變化相反;chil-17ra于感染后24h和7d分別上調(diào)1.73倍和2.21倍(p0.01)。脾臟各基因檢測結(jié)果顯示,chil-17a表達水平稍微下調(diào),無顯著差異,但在感染后7d上調(diào)為感染前(0h)的2.71倍(p0.05);chil-17f感染后2h表達水平降低為0h的0.13倍(p0.01),6h上調(diào)為0h的1.81倍(p0.01),隨后在24h和7d兩個時間點分別下調(diào)為0h的0.21倍(p0.01)和0.38倍(p0.05);chil-17ra僅在2h檢測到其表達下調(diào)0.60倍(p0.05),其余時間點的表達水平無顯著差異。結(jié)果表明盲腸扁桃體和脾臟chil-17a、chil-17f及chil-17ra都參與了雛雞抗e.tenella感染的反應(yīng),其中盲腸扁桃體chil-17a和chil-17f在感染早期(2h~4h)的相反表達動態(tài)說明二者在雛雞防御e.tenella感染的早期具有不同的免疫調(diào)節(jié)功能,而這一具體調(diào)節(jié)機制還有待進一步的研究加以闡明。4.e.tenella感染對雛雞其它相關(guān)細胞因子表達的影響為探究chil-17與其它相關(guān)細胞因子之間的相互作用,針對性的選擇由th1和th2細胞分泌且與il-17分化相關(guān)的il-6、ifn-γ、gm-csf以及il-12四個相關(guān)細胞因子進行e.tenella感染后表達變化的檢測。結(jié)果顯示,e.tenella感染后2h,盲腸扁桃體gm-csf和il-12分別上調(diào)2.96倍(p0.01)和18.63倍(p0.01);感染后4h,盲腸扁桃體il-6表達水平上調(diào)(p0.01),il-12表達水平持續(xù)上調(diào)到峰值,為0h的133.95倍(p0.01),脾臟il-6、gm-csf和il-12表達水平急劇上調(diào)至峰值,表達水平分別為0h的9.65倍、340.19倍和119.83倍(p0.01);隨后6h和12h兩個時間點中,盲腸扁桃體和脾臟il-6、ifn-γ以及il-12表達水平無顯著差異,盲腸扁桃體gm-csf持續(xù)下調(diào)表達;感染后24h,脾臟IL-6上調(diào)為0h的3.14倍(P0.05);感染后第3d和第5d,盲腸扁桃體GM-CSF依然穩(wěn)定的下調(diào)表達(P0.05),而脾臟IFN-γ表達水平分別上調(diào)為0h的391.08倍和138.28倍(P0.01),盲腸扁桃體IFN-γ在第5d時上調(diào)為0h的6.31倍(P0.01),達到上調(diào)高峰;感染后第7d,盲腸扁桃體IL-6達到上調(diào)高峰,表達水平上調(diào)為0h的4.91倍(P0.01)。結(jié)果表明,雛雞IL-6、IL-12、IFN-γ和GM-CSF都參與了抗E.tenella感染的免疫反應(yīng)。IFN-γ在感染后期表達水平上調(diào),GM-CSF表達下調(diào),表明在雛雞抗E.tenella感染后期,介導(dǎo)細胞免疫的Th1型細胞因子發(fā)揮著主導(dǎo)作用。總之,本研究用5×104個/只E.tenella孢子化卵囊接種雛雞以建立人工感染模型,檢測感染后Ch IL-17及其它相關(guān)細胞因子的表達變化。結(jié)果表明,ChIL-17A、ChIL-17F及ChIL-17RA都參與了雛雞抗E.tenella感染的反應(yīng);推測Th17細胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)和Th1介導(dǎo)的細胞免疫反應(yīng)是雛雞抗E.tenella感染的主要免疫應(yīng)答反應(yīng)類型。Th17細胞分泌的ChIL-17主要參與宿主早期抗E.tenella感染的炎癥反應(yīng);隨著時間的推移和感染的發(fā)展,Th1型細胞因子IFN-γ表達水平極顯著上調(diào),宿主的免疫反應(yīng)向Th1型偏移,同時抑制Th2型細胞因子的分泌從而使GM-CSF表達下調(diào)。
【關(guān)鍵詞】：柔嫩艾美耳球蟲 ChIL-17A ChIL-17F ChIL-17RA 實時熒光定量PCR
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S858.31
【目錄】：

• 摘要6-9
• Abstract9-12
• 第一章 文獻綜述12-22
• 1.1 雞球蟲病概述12-14
• 1.2 細胞因子與雞球蟲的感染與免疫14-22
• 第二章 前言22-24
• 第三章 人工感染E. tenella模型的建立24-30
• 3.1 試驗材料24-25
• 3.2 試驗方法25-26
• 3.3 試驗結(jié)果26-28
• 3.4 分析與討論28-29
• 3.5 結(jié)論29-30
• 第四章 雛雞ChIL-17及相關(guān)細胞因子表達水平實時熒光定量PCR檢測方法的建立30-46
• 4.1 試驗材料30-31
• 4.2 試驗方法31-35
• 4.3 試驗結(jié)果35-43
• 4.4 分析與討論43-44
• 4.5 結(jié)論44-46
• 第五章 E. tenella感染對雛雞ChIL-17A、ChIL-17F及ChIL-17RA表達的影響46-54
• 5.1 試驗材料46
• 5.2 試驗方法46-47
• 5.3 試驗結(jié)果47-50
• 5.4 分析與討論50-52
• 5.5 結(jié)論52-54
• 第六章 E. tenella感染對雛雞相關(guān)細胞因子表達的影響54-62
• 6.1 試驗材料54
• 6.2 試驗方法54-55
• 6.3 試驗結(jié)果55-58
• 6.4 分析與討論58-60
• 6.5 結(jié)論60-62
• 第七章 全文結(jié)論及創(chuàng)新點62-64
• 7.1 全文結(jié)論62
• 7.2 創(chuàng)新點62-64
• 參考文獻64-76
• 致謝76-78
• 攻讀碩士期間論文發(fā)表情況78

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中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 陳露;E.tenella感染對雛雞ChIL-17及相關(guān)細胞因子表達的影響[D];西南大學(xué);2016年

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本文編號：844190