本文關(guān)鍵詞：肉種雞場孵化后期死亡雞胚禽支原體感染調(diào)查

  更多相關(guān)文章： 禽支原體 分離培養(yǎng) 雞胚 感染 耐藥性監(jiān)測

【摘要】：垂直傳播是禽支原體病代代相傳的主要原因,因此控制禽支原體感染的首要任務(wù)做好建立無病雞群的工作。但支原體自身的變異特性、免疫逃逸功能決定了禽支原體病比急性、烈性傳染病更加難于控制,通過疫苗免疫和藥物治療很難消滅支原體。在各種防控支原體措施中,免疫尤其活疫苗免疫依然是綜合控制的核心和重點(diǎn)。為了解目前國內(nèi)種雞場禽支原體防控效果,本研究對(duì)某肉種雞場孵化后期胚胎死亡進(jìn)行禽支原體感染情況調(diào)查并進(jìn)行敏感藥物篩選,以期提出更完善的肉種雞場支原體防控措施。支原體分離困難,其中主要在于分離樣品的選擇。對(duì)于死胚中禽支原體分離如何選擇樣品國內(nèi)尚無詳細(xì)無報(bào)道。為確定死胚禽支原體最佳分離部位,本研究人工感染雞胚,雞胚死亡后分別選擇卵黃囊、絨毛尿囊膜、卵黃、口咽分泌物、肺進(jìn)行MG分離培養(yǎng),最終確定死胚最佳分離部位為卵黃囊。為了了解孵化后期死胚中禽支原體感染情況,本研究從山東某疑似禽支原體感染的種雞場采集樣品,采用分離培養(yǎng)和PCR同時(shí)檢測死胚中禽支原體,以確定其禽支原體感染率,評(píng)價(jià)禽支原體防控效果,同時(shí)獲得禽支原體臨床分離株進(jìn)行耐藥性分析。分離培養(yǎng)獲得3株MG,未分離到MS。根據(jù)MG 16s rDNA和MG MGc2基因保守區(qū)域,合成了兩對(duì)特異性引物,分別對(duì)100份樣品進(jìn)行PCR檢測,根據(jù)電泳及部分PCR產(chǎn)物測序結(jié)果,最終判定該養(yǎng)殖場MG的感染率為59%。本研究檢測了12株MG臨床分離株對(duì)14種抗菌藥的敏感性。藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果顯示,鹽酸沃尼妙林、延胡索酸泰妙菌素、強(qiáng)力霉素敏感性最高,MIC平均值分別為0.028μg/m L、0.167μg/m L和0.29μg/m L,其次是鹽酸大觀霉素、水溶性氟苯尼考、酒石酸泰樂菌素、鹽酸左氧氟沙星、鹽酸恩諾沙星,MIC平均值在2.5～10μg/m L之間,而對(duì)鹽酸林可霉素、水溶性阿奇霉素、乳酸諾氟沙星、硫酸丁胺卡那霉素、磷酸替米考星、酒石酸吉他霉素敏感性較低,MIC平均值在20～160μg/mL之間。
【關(guān)鍵詞】：禽支原體 分離培養(yǎng) 雞胚 感染 耐藥性監(jiān)測
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S858.31
【目錄】：

• 摘要9-10
• Abstract10-12
• 前言12-23
• 1 病原學(xué)12-14
• 1.1 禽支原體種類12
• 1.2 形態(tài)和染色12-13
• 1.3 培養(yǎng)特性13
• 1.4 生化特性13
• 1.5 抵抗力13-14
• 2 致病機(jī)理14-16
• 2.1 MG致病機(jī)理14-15
• 2.2 MS致病機(jī)理15-16
• 3 臨床癥狀與剖檢變化16-17
• 3.1 MG臨床癥狀與剖檢變化16
• 3.2 MS臨床癥狀與剖檢變化16-17
• 3.2.1 臨床癥狀16-17
• 3.2.2 剖檢變化17
• 4 支原體的診斷17-19
• 4.1 病原體的分離和鑒定17
• 4.2 血清學(xué)方法17-18
• 4.3 分子生物學(xué)方法18-19
• 5 防制措施19-23
• 5.1 藥物預(yù)防19-20
• 5.1.1 西藥預(yù)防19-20
• 5.1.2 中藥防治20
• 5.2 疫苗預(yù)防20-22
• 5.2.1 MG活苗20-21
• 5.2.2 MG滅活疫苗21-22
• 5.3 管理預(yù)防22-23
• 5.3.1 控制水平傳播控制22
• 5.3.2 雞群凈化22
• 5.3.3 種蛋處理22-23
• 引言23-24
• 第一章 從死胚中分離禽支原體樣品采集方法的研究24-33
• 1 材料24-27
• 1.1 菌株與雞胚24
• 1.2 主要試劑24-25
• 1.3 禽支原體培養(yǎng)基配制25-27
• 1.4 主要儀器27
• 2 方法27-29
• 2.1 人工感染雞胚27-28
• 2.1.1 菌株選擇27
• 2.1.2 顏色變化單位（CCU）的測定及待檢菌液的稀釋27-28
• 2.1.3 雞胚接種28
• 2.2 支原體分離培養(yǎng)28
• 2.2.1 樣品處理28
• 2.2.2 分離培養(yǎng)28
• 2.3 PCR擴(kuò)增及測序28-29
• 2.3.1 引物設(shè)計(jì)28
• 2.3.2 DNA模板的制備28-29
• 2.3.3 PCR反應(yīng)29
• 3 結(jié)果29-32
• 3.1 人工感染雞胚29-30
• 3.2 細(xì)菌分離30
• 3.3 支原體分離培養(yǎng)30-31
• 3.4 PCR擴(kuò)增及測序31-32
• 4 討論32-33
• 第二章 死胚中禽支原體分離鑒定及感染率調(diào)查33-42
• 1 材料33-37
• 1.1 樣品采集與處理33-34
• 1.2 主要試劑34
• 1.3 支原體分離鑒定34-35
• 1.3.1 雞胚及弱雛34
• 1.3.2 樣品處理34
• 1.3.3 分離培養(yǎng)34
• 1.3.4 純化34
• 1.3.5 細(xì)菌L型鑒定34
• 1.3.6 菌體形態(tài)觀察34
• 1.3.7 菌落著色34
• 1.3.7 雞紅細(xì)胞吸附試驗(yàn)34
• 1.3.8 16sDNA鑒定及系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建34-35
• 1.4 PCR法檢測死胚胚卵黃囊中支原體感染率35-37
• 1.4.1 DNA提取35
• 1.4.2 引物設(shè)計(jì)35-36
• 1.4.3 PCR擴(kuò)增36-37
• 2 結(jié)果37-39
• 2.1 支原體的分離鑒定37-38
• 2.1.1 分離培養(yǎng)37
• 2.1.2 L形細(xì)菌檢驗(yàn)37
• 2.1.3 菌落著色37
• 2.1.4 菌體形態(tài)觀察37
• 2.1.5 雞紅細(xì)胞吸附試驗(yàn)37-38
• 2.1.6 16sDNA鑒定及系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建38
• 2.2 PCR法檢測死胚及弱雛禽支原體感染率38-39
• 3 討論39-42
• 第三章 雞毒支原體臨床分離株的耐藥性檢測42-48
• 1 材料與方法42-43
• 1.1 試驗(yàn)菌株42
• 1.2 抗菌藥42
• 1.3 藥物敏感性檢測42-43
• 1.3.1 顏色變化單位（CCU）的測定及待檢菌液的稀釋42
• 1.3.2 最低抑菌濃度（MIC）的測定42-43
• 2 結(jié)果43-45
• 3 討論45-48
• 參考文獻(xiàn)48-55
• 致謝55

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