本文關(guān)鍵詞：豬圓環(huán)病毒2d亞型衣殼蛋白在昆蟲細(xì)胞中的表達(dá)

  更多相關(guān)文章： 豬圓環(huán)病毒d亞型 衣殼蛋白 桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng) 基因分型

【摘要】：為了在昆蟲細(xì)胞中表達(dá)豬圓環(huán)毒病2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)衣殼蛋白,本研究設(shè)計(jì)合成引物從臨床病料中擴(kuò)增獲得豬圓環(huán)病毒(Porcine circovirus,PCV)山東株衣殼蛋白基因缺失核定位區(qū)的序列,并進(jìn)行序列分析。將該片段克隆到桿狀病毒供體載體p Fast Bac-1上,然后轉(zhuǎn)化大腸桿菌(Escherichia coli)DH10-Bac感受態(tài)細(xì)胞,獲得重組穿梭桿粒,將該桿粒轉(zhuǎn)染到sf9昆蟲細(xì)胞中,觀察重組桿狀病毒致細(xì)胞病變效應(yīng),并采用PCR、間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)、十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和Western blot鑒定衣殼蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果表明,擴(kuò)增獲得的豬圓環(huán)病毒山東株屬于PCV2d亞型,與我國(guó)目前使用的商品化疫苗株(PCV2a及PCV2b亞型)在160~180 aa抗原位點(diǎn)有差異。成功構(gòu)建了重組供體質(zhì)粒p Fast Bac1-PCV2d-Cap和重組穿梭桿粒Bacmid-PCV2d-Cap,獲得的重組桿狀病毒在昆蟲細(xì)胞中成功表達(dá)了約24 k D的PCV2d-Cap,該蛋白可以與豬圓環(huán)病毒陽(yáng)性血清及His標(biāo)簽抗體發(fā)生反應(yīng),證明具有良好的反應(yīng)原性。本研究是我國(guó)首次采用桿狀病毒系統(tǒng)表達(dá)PCV2d亞型衣殼蛋白,為制備PCV2d亞單位疫苗以及酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)試劑盒、防范PCV2d亞型流行提供了理論依據(jù)。
【作者單位】： 青島農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省高校預(yù)防獸醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 豬圓環(huán)病毒d亞型 衣殼蛋白 桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng) 基因分型
【基金】：國(guó)家科技基礎(chǔ)性工作專項(xiàng)項(xiàng)目(No.2012FY111000) 山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系生豬產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)(No.SDAIT-06-022-08) 山東省自主創(chuàng)新及成果轉(zhuǎn)化專項(xiàng)(No.2014ZZCX07105)
【分類號(hào)】：S852.65
【正文快照】： 豬圓環(huán)病毒(Porcine circovirus,PCV)是目前發(fā)現(xiàn)的最小的一種動(dòng)物病毒,屬于圓環(huán)病毒科(Circoviri-dae)圓環(huán)病毒屬(Circovirus),為無(wú)囊膜、單鏈負(fù)股DNA病毒(Allan et al.,2012)。該病毒有2個(gè)血清型,即PCV1和PCV2(Lv et al.,2014;Ssemadaali etal.,2015)。PCV2又可分為5個(gè)基因亞

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