本文關(guān)鍵詞：四川省動(dòng)物源金黃色葡萄球菌耐藥表型檢測(cè)及主要耐藥機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 金黃色葡萄球菌 血漿凝固酶 耐藥性 耐藥基因 分子分型

【摘要】：金黃色葡萄球菌是常見的人獸共患病原菌,對(duì)其進(jìn)行耐藥性研究具有重要意義。由于獸醫(yī)臨床抗菌藥物的不規(guī)范使用,動(dòng)物源金黃色葡萄球菌耐藥性日益嚴(yán)重。對(duì)動(dòng)物源金黃色葡萄球菌進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn),主要耐藥基因檢測(cè)及分子流行病學(xué)研究,有助于了解耐藥菌株的產(chǎn)生和傳播趨勢(shì),為臨床合理、規(guī)范用藥提供理論依據(jù)。本文自2007年到2013年從不同動(dòng)物源共分離得到236株金黃色葡萄球菌。對(duì)分離菌株進(jìn)行對(duì)11種抗生素的藥物敏感性檢測(cè)后發(fā)現(xiàn),除對(duì)苯唑西林表現(xiàn)出較高敏感性(敏感率大于80%)外,對(duì)其他藥物呈不同水平耐藥性,菌株對(duì)青霉素、氨芐西林、慶大霉素、卡那霉素、阿米卡星、紅霉素、阿奇霉素、四環(huán)素、環(huán)丙沙星和磺胺異嗯唑的耐藥率分別達(dá)92.8%、90.25%、47.88%、36.87%、39.83%、77.12%、58.47%、40.68%、26.28%、87.71%。本次菌株多重耐藥現(xiàn)象嚴(yán)重,以6耐、9耐菌株為主。隨著時(shí)間推移,菌株對(duì)不同抗菌藥物耐藥率呈上升趨勢(shì)。不同動(dòng)物源菌株耐藥性比較可見,豬源菌株對(duì)紅霉素、阿奇霉素耐藥率顯著高于禽源金黃色葡萄球菌(P0.05),而對(duì)其余9種藥物的耐藥率在不同動(dòng)物源菌株間無顯著性差異(P0.05)。金黃色葡萄球菌血漿凝固酶檢測(cè)試驗(yàn)顯示,236株金黃色葡萄球菌菌株中檢出159株血漿凝固酶陽性菌株；且血漿凝固酶陽性菌株對(duì)青霉素G、苯唑西林、慶大霉素、卡那霉素、阿米卡星、環(huán)丙沙星耐藥率顯著高于血漿凝固酶陰性菌株(P0.05),多重耐藥譜較血漿凝固酶陰性菌株更廣泛。pvl、tst毒力基因的PCR擴(kuò)增結(jié)果顯示,236株金黃色葡萄球菌尚未檢出相關(guān)毒力基因。本試驗(yàn)建立了blaZ-mecA二重PCR體系及aacA-aphD-ermA-mecA三重PCR體系,以及擴(kuò)增blaZ、mecA、aacA-aphD、ermA、ermB、ermC等6種耐藥基因的普通PCR體系。不同耐藥基因的PCR擴(kuò)增結(jié)果顯示,介導(dǎo)β-內(nèi)酰胺類耐藥的基因blaZ、mecA檢出率為63.98%和10.59%；介導(dǎo)大環(huán)內(nèi)酯類、林可胺類、鏈陽霉素B類(MLSB)的耐藥基因ermA、ermB、erm C檢出率分別為11.44%、83.05%和87.29%；介導(dǎo)氨基糖苷類耐藥基因aacA-aphD檢出率43.64%。檢出耐藥基因組合以blaZ=ermB=ermC與blaZ=ermB+ermC=aacA-aphD為主。隨著時(shí)間推移,菌株攜帶多耐藥基因種類增加。對(duì)24株mecA基因介導(dǎo)的MRSA菌株進(jìn)行SCCmec分型發(fā)現(xiàn),2008年及2009年分離株主要為HA-MRSA菌株,占70.83%,2013年分離株主要為CA-MRSA,占20.83%；所有MRSA中,以SCCmec Ⅲ型為主,共有12株占50%。PFGE分子分型結(jié)果顯示,24株MRSA菌株共分為14個(gè)聚類組,命名為A-H組;J組為主要類型,占25%(6/24)。以上結(jié)果說明,四川省不同動(dòng)物源金黃色葡萄球菌對(duì)不同抗菌藥物呈不同水平的耐藥性,菌株對(duì)藥物的耐藥率隨時(shí)間推移呈上升趨勢(shì),獸醫(yī)臨床應(yīng)加強(qiáng)對(duì)金黃色葡萄球菌耐藥性的監(jiān)測(cè)；四川省不同動(dòng)物源金黃色葡萄球菌漿凝固酶陽性率高達(dá)67.37%,且血漿凝固酶陽性菌比陰性菌株具有更嚴(yán)重的多重耐藥性,說明致病性菌株長期、普遍存在于金黃色葡萄球菌群中,應(yīng)加強(qiáng)對(duì)菌株血漿凝固酶以及耐藥性的檢測(cè)。本次檢測(cè)的MRSA SCCmec分型較復(fù)雜,其中以SCCmec Ⅲ型為主,且屬于Ⅲ型菌株攜帶的耐藥基因最多。隨分離時(shí)間的推移,菌株由HA-MRSA逐步向CA-MRSA轉(zhuǎn)變,且攜帶的耐藥基因更加豐富。MRSA菌株呈多克隆流行,獸醫(yī)臨床應(yīng)長期持續(xù)加強(qiáng)MRSA流行規(guī)律的監(jiān)測(cè)。
【關(guān)鍵詞】：金黃色葡萄球菌 血漿凝固酶 耐藥性 耐藥基因 分子分型
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S852.6
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 縮略詞表9-12
• 概述12-20
• 1 金黃色葡萄球菌概述12
• 2 金黃色葡萄球菌的主要毒理基因及其致病性12-14
• 2.1 血漿凝固酶12-13
• 2.2 殺白細(xì)胞素(PVL)13
• 2.3 毒性休克綜合癥毒素I(TSST-I)13-14
• 3 獸醫(yī)臨床金黃色葡萄球菌主要耐藥分子機(jī)制14-17
• 3.1 β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥機(jī)制14-15
• 3.2 大環(huán)內(nèi)酯類、林可胺類及鏈陽霉素B(Macrolides,Lincosamides,Streptogramins B,MLS_B)耐藥15-16
• 3.3 氨基糖苷類耐藥16
• 3.4 其他耐藥機(jī)制16-17
• 4 MRSA的分子分型研究17-18
• 4.1 SCCmec分型研究17-18
• 4.2 多位點(diǎn)序列分型(MLST)18
• 4.3 脈沖場(chǎng)凝膠電泳PFGE18
• 5 研究目的18-20
• 第一章 金黃色葡萄球菌的分離鑒定及耐藥表型檢測(cè)20-34
• 1 材料與方法20-25
• 1.1 材料20-22
• 1.2 方法22-25
• 2 結(jié)果25-31
• 2.1 金黃色葡萄球菌的分離、鑒定25-27
• 2.2 金黃色葡萄球菌對(duì)11種抗菌藥物的耐藥表型檢測(cè)結(jié)果27-29
• 2.3 不同來源菌株對(duì)不同抗菌藥物的耐藥情況29-31
• 3 討論31-33
• 3.1 金黃色葡萄球菌的分離鑒定31
• 3.2 金黃色葡萄球菌耐藥性情況31-33
• 4 小結(jié)33-34
• 第二章 金黃色葡萄球菌的毒力因子檢測(cè)34-43
• 1. 材料與方法34-37
• 1.1 材料34-35
• 1.2 方法35-37
• 2. 結(jié)果與分析37-40
• 2.1 金黃色葡萄球菌血漿凝固酶檢測(cè)情況37-38
• 2.2 血漿凝固酶陽性菌與陰性菌耐藥情況比較38-40
• 2.3 毒力基因PCR檢測(cè)結(jié)果40
• 3. 討論40-41
• 4. 小結(jié)41-43
• 第三章 金黃色葡萄球菌主要耐藥基因檢測(cè)43-57
• 1. 材料與方法43-46
• 1.1 材料43-44
• 1.2 方法44-46
• 2. 結(jié)果46-53
• 2.1 紙片擴(kuò)散法檢測(cè)結(jié)果46-47
• 2.2 MRSA與MSSA耐藥性比較結(jié)果47-48
• 2.3 多重PCR體系的建立48-51
• 2.4 金黃色葡萄球菌多種藥基因的檢測(cè)51-53
• 3. 討論53-56
• 4. 小結(jié)56-57
• 第四章 MRSA菌株的分子分型57-72
• 1. 材料與方法57-65
• 1.1 材料57-60
• 1.2 方法60-65
• 2. 結(jié)果65-69
• 2.1 SCCmec基因分型鑒定結(jié)果65-67
• 2.2 PFGE鑒定結(jié)果67-69
• 3. 討論69-71
• 4. 小結(jié)71-72
• 參考文獻(xiàn)72-79
• 致謝79-80
• 附錄80-83
• 攻讀碩士期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文83

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：829306