本文關鍵詞：L-聚組氨酸抑制LPS引起的豬精子凋亡及其對精液品質(zhì)的影響

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【摘要】：豬精液液態(tài)保存是人工授精技術的基礎,在精液液態(tài)保存過程中,精液中細菌溶菌產(chǎn)生的脂多糖(LPS)不僅能降低精液品質(zhì)、縮短精子壽命、誘導精子凋亡,而且還能隨著輸精進入母畜生殖道內(nèi)引起母畜生殖道免疫反應,造成生殖道免疫細胞極增而吞噬精子。L-聚組氨酸(L-pHis)能與LPS結合,但其能否抑制LPS對精子凋亡的影響尚未見報道。本研究中,通過向豬精液中添加L-pHis,檢測其對豬精液細菌濃度、LPS濃度、精液品質(zhì)是否造成影響,以及能否降低豬精子的凋亡率,并初步闡釋其作用機制。研究中共收集24頭公豬的精液,每4-5個個體的精液混合形成5個樣本池(n=5),用BTS稀釋液稀釋至密度為4×106/mL,然后將精液液態(tài)保存(17℃)和37℃進行試驗。首先在0、6、12、36、72、120h測定精液稀釋后液態(tài)保存過程中精液中細菌菌落濃度以及精漿中LPS濃度隨時間的變化；然后以稀釋精液為對照組,分別添加多粘菌素B(PMB)至PMB濃度為100μg/mL為PMB組,L-聚組氨酸(L-pHis)至L-pHis為100μg/mL為L-聚組氨酸組,液態(tài)保存下于0、6、12、36、72、120h檢測三個組中細菌濃度、LPS濃度、精液品質(zhì)(精子活率、精子活力指數(shù)、運動速率)和精子的凋亡率,37℃保存下于0、1、3、6、9、12、24h檢測三個組中精液品質(zhì)(精子活率、精子活力指數(shù)、運動速率)和凋亡率;最后通過添加2μg/mL Anti-CD14于精液中,阻斷LPS-TLR4的結合,初步闡釋L-pHis抑制LPS誘導精子凋亡的作用機制。研究結果表明：(1)豬精液在液態(tài)保存過程中,細菌濃度從36h開始迅速增加,36h(4980±381.58 CFU/mL)、72h (12920±2833.66 CFU/mL)、120h(40020±4755.38 CFU/mL)細菌濃度持續(xù)顯著增加(P0.05),細菌平均濃度達到1.02×104 CFU/mL;精液LPS濃度隨保存時間無顯著性變化(P0.05),其平均濃度達到4.70±0.21 EU/mL。(2)在精液稀釋液中添加100μg/mL L-pHis或100μg/mL PMB對液態(tài)精液保存中LPS的濃度沒有顯著影響(P0.05),但是它們能提高在液態(tài)保存和37℃下精液品質(zhì)(精子活力指數(shù)、精子速率、精子活率)和降低精液細菌濃度。(3)液態(tài)保存和37℃保存下在精液稀釋液中添加100μg/mL L-pHis和100μg/mL PMB均能顯著抑制精子凋亡(P0.05),但PMB抑制精子凋亡能力優(yōu)于L-pHis(P0.05)。(4)L-pHis不能特異性清除精液中LPS,但是通過添加Anti-CD14或L-pHis后,LPS引起精子的凋亡率顯著降低(P0.05),L-pHis可能通過與TLR4結合,阻斷LPS誘導的精子凋亡途徑,降低了精子的凋亡。結論：在精液液態(tài)保存中加入100μg/mL L-pHis能夠有效提升精液品質(zhì),L-pHis能夠阻斷LPS誘導的精子凋亡從而降低精子凋亡率。
【關鍵詞】：精子 凋亡 L-聚組氨酸 多粘菌素B
【學位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S828
【目錄】：

• 摘要8-10
• Abstract10-12
• 1 文獻綜述12-20
• 1.1 人工授精技術與精液液態(tài)保存12-13
• 1.2 精液中病原性微生物對精子的影響13-14
• 1.2.1 病原性微生物的來源及分類13
• 1.2.2 革蘭氏陰性菌對精液質(zhì)量的影響13-14
• 1.2.3 革蘭氏陰性菌引起精子的凋亡14
• 1.3 精液品質(zhì)評定指標14-16
• 1.3.1 常規(guī)指標15
• 1.3.2 精子凋亡指標15-16
• 1.4 精液中LPS對精子質(zhì)量及母畜的影響16-18
• 1.4.1 LPS對精液品質(zhì)的影響16
• 1.4.2 LPS引起母畜生殖道應急16-17
• 1.4.3 LPS-TLR4信號傳導機制17-18
• 1.5 精液中清除LPS的研究進展18-19
• 1.5.1 PMB清除LPS的研究18
• 1.5.2 L-pHis清除LPS的研究18
• 1.5.3 殼聚糖與TLR4競爭性結合18-19
• 1.5.4 其它LPS-TLR4通路阻斷劑19
• 1.6 研究目的與意義19-20
• 2. 材料和方法20-25
• 2.1 試驗材料20-22
• 2.1.1 試驗動物20
• 2.1.2 主要儀器設備20-21
• 2.1.3 藥品及主要試劑的配制21-22
• 2.2 實驗步驟22-24
• 2.2.1 精液的采集及稀釋22
• 2.2.2 試驗設計22-23
• 2.2.3 精液品質(zhì)檢測23-24
• 2.3 數(shù)據(jù)處理24-25
• 3 實驗結果25-36
• 3.1 精液液態(tài)保存過程中細菌濃度的變化25
• 3.2 精液液態(tài)保存中LPS濃度的變化25-26
• 3.3 L-pHis和PMB對精液品質(zhì)的影響26-33
• 3.3.1 L-pHis和PMB對精液中細菌增殖的影響26
• 3.3.2 L-pHis和PMB對精子活力的影響26-28
• 3.3.3 L-pHis和PMB對精子運動速率的影響28-30
• 3.3.4 L-pHis和PMB對精子活率的影響30-33
• 3.4 L-pHis和PMB對精子凋亡的影響33-35
• 3.5 L-pHis抑制豬精子凋亡的機制35-36
• 3.5.1 LPS濃度測定35
• 3.5.2 Anti-CD14抑制試驗35-36
• 4 討論36-41
• 4.1 BTS在豬精液液態(tài)保存中的應用36-37
• 4.2 影響豬精液液態(tài)保存的因素37
• 4.3 PMB對精液質(zhì)量的影響37-39
• 4.4 PMB的抗凋亡作用39-40
• 4.5 L-pHis的抗凋亡作用40-41
• 5. 結論41-42
• 參考文獻42-51
• 致謝51-52
• 攻讀碩士期間發(fā)表文章52

【參考文獻】

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本文編號：828824