發(fā)布時(shí)間：2017-09-10 22:01

  本文關(guān)鍵詞：脂質(zhì)運(yùn)載蛋白2（Lcn2）在早期妊娠小鼠子宮中的表達(dá)及功能

  更多相關(guān)文章： 脂質(zhì)運(yùn)載蛋白2 胚胎著床 細(xì)胞增殖 炎癥

【摘要】：胚胎著床是具有著床能力的胚胎與具有接受能力的子宮相互作用的過程,二者相互獨(dú)立但又必須同步,對(duì)早期妊娠的確立極為重要。著床發(fā)生后,胚胎逐漸侵入到子宮內(nèi)膜中,使基質(zhì)細(xì)胞發(fā)生廣泛地增殖及分化,這一過程稱之為蛻膜化。脂質(zhì)運(yùn)載蛋白2(Lipocalin-2,Lcn2)是一種分泌型的脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,與炎癥、感染及腫瘤轉(zhuǎn)移等病理過程相關(guān),能運(yùn)輸白三烯、血小板活化因子等親脂性分子。Lcn2在小鼠的發(fā)情前期及發(fā)情期、小鼠妊娠前兩天的子宮腔上皮及腺上皮都有較強(qiáng)的表達(dá),但在小鼠早期妊娠過程中的調(diào)節(jié)及功能仍不清楚。本研究對(duì)Lcn2在早期妊娠小鼠子宮中的表達(dá)、調(diào)節(jié)及功能做了進(jìn)一步的分析。我們采用原位雜交的方法,檢測(cè)了Lcn2在小鼠早期妊娠、假孕、延遲激活著床及人工誘導(dǎo)蛻膜化中mRNA水平表達(dá)。結(jié)果顯示,Lcn2在小鼠早期妊娠第1~2天的子宮腔上皮中強(qiáng)表達(dá),第3~4天逐漸減弱,第4天幾乎不表達(dá)。在卵巢切除小鼠中,Lcn2對(duì)雌激素的刺激極為敏感,并表現(xiàn)出一定的時(shí)間依賴性,在24小時(shí)達(dá)到峰值。利用雌激素受體(estrogen receptor,ER)激動(dòng)劑及ERα敲除小鼠證實(shí),雌激素主要通過ERα調(diào)節(jié)Lcn2。大腸桿菌及金黃色葡萄球菌可誘導(dǎo)Lcn2在子宮中的表達(dá)。LPS也可刺激Lcn2在子宮上皮大量表達(dá)。前列腺素對(duì)于起始著床和蛻膜化具有重要作用,Lcn2在妊娠第5天子宮中的表達(dá)位置與mPGES1類似,都在胚胎周圍的基質(zhì)細(xì)胞中表達(dá),而非著床點(diǎn)都不表達(dá)。在基質(zhì)細(xì)胞中加入Lcn2重組蛋白可使mPGES1的表達(dá)量增加,干涉Lcn2后mPGES1的表達(dá)量有所降低。mPGES1是合成PGE2的終端限速酶,Lcn2在胚胎著床前后可能通過調(diào)節(jié)mPGES1的表達(dá)控制PGE2的合成,有助于血管的通透性增強(qiáng),促進(jìn)胚胎著床。在小鼠基質(zhì)細(xì)胞中,孕酮能顯著性地誘導(dǎo)Lcn2上調(diào),但加入其受體抑制劑RU486后可阻斷對(duì)Lcn2的誘導(dǎo)作用。Lcn2啟動(dòng)子上存在c-Myc結(jié)合位點(diǎn),c-Myc又是Akt下游的一個(gè)靶分子,在加入Akt及c-Myc抑制劑后,可阻斷孕酮對(duì)基質(zhì)細(xì)胞中Lcn2表達(dá)的誘導(dǎo)作用,表明孕酮在基質(zhì)細(xì)胞中可通過Akt-c-Myc通路調(diào)節(jié)Lcn2的表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：脂質(zhì)運(yùn)載蛋白2 胚胎著床 細(xì)胞增殖 炎癥
【學(xué)位授予單位】：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S814
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-6
• 中英文縮略詞表6-10
• 1 前言10-18
• 1.1 胚胎著床及蛻膜化10-11
• 1.2 胚胎著床及蛻膜化相關(guān)分子11-14
• 1.2.1 類固醇激素及其受體11-12
• 1.2.2 Lif/Stat3信號(hào)通路12-13
• 1.2.3 前列腺素類13-14
• 1.3 Lcn2研究進(jìn)展14-18
• 1.3.1 Lcn2的結(jié)構(gòu)及生物學(xué)特性14-15
• 1.3.2 調(diào)節(jié)Lcn2的相關(guān)分子15-16
• 1.3.3 Lcn2與腎臟損傷16
• 1.3.4 Lcn2與脂質(zhì)代謝16-17
• 1.3.5 Lcn2與癌癥17
• 1.3.6 Lcn2與生殖17-18
• 1.4 本研究的目的和意義18
• 2 材料與方法18-37
• 2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物18
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料的收集18
• 2.3 動(dòng)物模型的建立18-20
• 2.3.1 早期妊娠18-19
• 2.3.2 假孕小鼠模型19
• 2.3.3 延遲和激活模型19
• 2.3.4 人工誘導(dǎo)蛻膜化19-20
• 2.3.5 類固醇激素處理20
• 2.3.6 LPS處理20
• 2.3.7 大腸桿菌及金黃色葡萄球菌處理假孕小鼠20
• 2.4 原位雜交探針制備20-26
• 2.4.1 菌種和主要試劑20
• 2.4.2 PCR引物設(shè)計(jì)20-21
• 2.4.3 總RNA的提取21-22
• 2.4.4 RNA反轉(zhuǎn)錄合成cDNA22
• 2.4.5 PCR擴(kuò)增22-23
• 2.4.6 PCR產(chǎn)物凝膠電泳23
• 2.4.7 PCR產(chǎn)物膠回收23
• 2.4.8 PCR產(chǎn)物與pGEM-T載體的連接23-24
• 2.4.9 重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化及鑒定24-25
• 2.4.10 陽(yáng)性克隆質(zhì)粒的提取25
• 2.4.11 目的片段的擴(kuò)增、回收、提純25-26
• 2.4.12 地高辛標(biāo)記cRNA探針26
• 2.5 原位雜交26-30
• 2.5.1 原位雜交相關(guān)器皿的準(zhǔn)備26-27
• 2.5.2 原位雜交相關(guān)試劑的配制27-29
• 2.5.3 冰凍切片29
• 2.5.4 原位雜交步驟29-30
• 2.6 Western Blot30-35
• 2.6.1 Western Blot相關(guān)試劑配制30-33
• 2.6.2 蛋白樣品的制備33
• 2.6.3 蛋白濃度的測(cè)定33-34
• 2.6.4 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳34
• 2.6.5 Western Blot流程34-35
• 2.7 小鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞的分離培養(yǎng)及處理35-36
• 2.7.1 細(xì)胞培養(yǎng)的準(zhǔn)備工作35
• 2.7.2 基質(zhì)細(xì)胞原代培養(yǎng)35-36
• 2.7.3 體外誘導(dǎo)蛻膜化及P4處理36
• 2.7.4 Lcn2 siRNA轉(zhuǎn)染36
• 2.8 Real-time RT-PCR36-37
• 2.8.1 Real-time PCR實(shí)驗(yàn)步驟36-37
• 2.8.2 數(shù)據(jù)分析37
• 2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析37
• 3 結(jié)果37-53
• 3.1 Lcn2原位雜交探針的制備37-39
• 3.2 Lcn2在早期妊娠小鼠子宮中的表達(dá)39-40
• 3.3 Lcn2在假孕小鼠子宮中的表達(dá)40-41
• 3.4 Lcn2在延遲與激活著床子宮中的表達(dá)41
• 3.5 Lcn2在人工誘導(dǎo)蛻膜化中的表達(dá)41-42
• 3.6 雌激素及其受體對(duì)Lcn2表達(dá)的影響42-45
• 3.6.1 類固醇激素對(duì)Lcn2表達(dá)的影響42-43
• 3.6.2 E2處理不同時(shí)間對(duì)子宮中Lcn2表達(dá)的影響43-44
• 3.6.3 ER受體激動(dòng)劑對(duì)Lcn2表達(dá)的影響44-45
• 3.6.4 E2在ERα 敲除鼠中對(duì)Lcn2表達(dá)的影響45
• 3.7 小鼠基質(zhì)細(xì)胞分離效果鑒定45-46
• 3.8 基質(zhì)細(xì)胞中孕酮對(duì)Lcn2表達(dá)的調(diào)節(jié)46-48
• 3.8.1 體外誘導(dǎo)蛻膜化對(duì)Lcn2表達(dá)的調(diào)節(jié)46-47
• 3.8.2 P4在基質(zhì)細(xì)胞中對(duì)Lcn2的調(diào)節(jié)47-48
• 3.9 PI3K/Akt-c-Myc參與P4對(duì)Lcn2的調(diào)節(jié)48
• 3.10 Lcn2在基質(zhì)細(xì)胞中對(duì)mPGES1的調(diào)節(jié)48-51
• 3.11 LPS對(duì)Lcn2及mPGES1的調(diào)節(jié)51
• 3.12 大腸桿菌及金黃色葡萄球菌對(duì)Lcn2的刺激作用51-53
• 4 討論53-56
• 4.1 Lcn2可能參與子宮上皮細(xì)胞的增殖53-54
• 4.2 Lcn2可能對(duì)維持子宮內(nèi)微環(huán)境的穩(wěn)定具有重要作用54-55
• 4.3 Lcn2在小鼠基質(zhì)細(xì)胞中可能促進(jìn)PGE2的合成55-56
• 4.4 在基質(zhì)細(xì)胞中P4通過Akt-c-Myc調(diào)節(jié)Lcn256
• 5 結(jié)論56-57
• 致謝57-58
• 參考文獻(xiàn)58-64

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 須靜;胡曉波;;中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白的研究進(jìn)展[J];檢驗(yàn)醫(yī)學(xué);2012年10期

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3 沈佳,張永蓮,劉強(qiáng),趙健;猴附睪特異性表達(dá)基因LCN6第5號(hào)內(nèi)含子的克隆及分析[J];華東理工大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2005年03期

4 范衡宇,楊增明;環(huán)氧合酶(COX)與哺乳動(dòng)物生殖[J];生殖與避孕;2000年06期

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本文編號(hào)：826848