本文關(guān)鍵詞：重組Pyrococcus yayanosii CH1-ferritin 對缺鐵性貧血雌性SD大鼠補(bǔ)鐵效果的研究

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【摘要】：鐵蛋白是生物機(jī)體代謝過程中一個重要的鐵貯存蛋白,它具有鐵貯存和鐵釋放作用。鐵蛋白在大部分生物體內(nèi)都有發(fā)現(xiàn),具有耐稀酸pH=2.1、耐稀堿pH--12.1和耐較高溫度70～75℃不變性等特性,鐵蛋白由外部的蛋白殼和內(nèi)部鐵核組成,鐵蛋白殼是一個由24個亞基組成的空心球形結(jié)構(gòu),蛋白殼直徑是12 nm,鐵核直徑是8 nm。缺鐵性貧血(iron deficiency anemia,IDA)是指由于動物機(jī)體內(nèi)鐵元素的缺乏,導(dǎo)致血紅蛋白含量減少引起的貧血性疾病。目的：本試驗(yàn)利用基因工程技術(shù)構(gòu)建高效表達(dá)菌株BL21-CH1-ferritin,并在BL21-CH1-ferritin中高效表達(dá)重組CH1-ferritin,對重組CH1-ferritin的物理化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行初步的探究；最后,利用自然礦化的重組CH1-ferritin對患有IDA的大鼠模型進(jìn)行補(bǔ)鐵試驗(yàn),對其補(bǔ)鐵效果進(jìn)初步的驗(yàn)證,為今后的科研及臨床研究提供參考依據(jù)。方法：在GenBank中找到Pyrococcus yayanosii CH1基因組序列,在該基因組中找到編碼鐵蛋白基因序列,通過對CH1-ferritin的密碼子偏好性進(jìn)行修飾,采用基因合成的方法直接合成目的片段。最后,構(gòu)建高效表達(dá)菌株BL21-CH1-ferritin,表達(dá)分離純化重組CH1-ferritin;利用自然礦化方法,使重組CH1-ferritin的蛋白殼內(nèi)形成礦化鐵核；構(gòu)建缺鐵性貧血雌性SD大鼠模型；采用灌胃方法,對動物模型進(jìn)行補(bǔ)鐵試驗(yàn),驗(yàn)證重組CH1-ferritin補(bǔ)鐵效果。結(jié)果：成功構(gòu)建高效表達(dá)菌株BL21-CH1-ferritin,純化得到重組CH1-ferritin,初步探究了其對不同溫度和不同pH的耐受性。最后,通過自然礦化反應(yīng),獲得了具有鐵核的重組CH1-ferritin。通過補(bǔ)鐵試驗(yàn),證明自然礦化CH1-ferritin具有良好的補(bǔ)鐵效果,空殼重組CH1-ferritin不具備補(bǔ)鐵效果。結(jié)論：在不改變氨基酸序列的情況下,通過堿基合成的基因序列也能夠表達(dá)出具有生物活性的鐵蛋白；自然礦化CH1-ferritin具有良好的補(bǔ)鐵效果。
【關(guān)鍵詞】：鐵蛋白 超嗜熱古桿菌 重組鐵蛋白 自然礦化 缺鐵性貧血模型
【學(xué)位授予單位】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S856
【目錄】：

• 摘要8-9
• Abstract9-11
• 縮略詞表11-12
• 第一章 文獻(xiàn)綜述12-23
• 1.1 鐵蛋白的簡介12-13
• 1.1.1 鐵蛋白的蛋白結(jié)構(gòu)12
• 1.1.2 H鏈鐵蛋白和L鏈鐵蛋白12-13
• 1.2 鐵蛋白的研究進(jìn)展13
• 1.3 鐵蛋白的自然礦化13-15
• 1.3.1 鐵蛋白自然礦化的簡介13-14
• 1.3.2 鐵蛋白自然礦化的原理14-15
• 1.3.3 進(jìn)鐵動力學(xué)測試15
• 1.4 鐵與鐵蛋白的生理作用15-17
• 1.4.1 鐵元素與生物體的關(guān)系15-16
• 1.4.2 鐵蛋白的主要生物學(xué)功能16
• 1.4.3 鐵在機(jī)體內(nèi)是如何轉(zhuǎn)運(yùn)的16-17
• 1.5 超嗜熱古桿菌的簡介17-18
• 1.5.1 超嗜熱古桿菌的簡介17
• 1.5.2 超嗜熱菌Pyrococcus yayanosii CH1簡介17-18
• 1.6 超嗜熱古桿菌的研究價值18
• 1.7 Pyrococcus yayanosii CH1-ferritin的密碼子修飾18-19
• 1.8 Pyrococcus yayanosii CH1-ferritin的研究價值19
• 1.9 缺鐵性貧血(iron deficiency anemia,IDA)的簡介19-20
• 1.9.1 缺鐵性貧血(iron deficiency anemia,IDA)的原因和危害19-20
• 1.9.2 缺鐵性貧血(iron deficiency anemia,IDA)的診斷及治療20
• 1.10 目前常用的補(bǔ)鐵劑20-21
• 1.11 雌性SD大鼠貧血模型的建立21-22
• 1.11.1 大鼠缺鐵日糧21
• 1.11.2 雌性SD大鼠貧血模型的建立方法21-22
• 1.12 本研究目的與意義22-23
• 第二章 重組CH1-ferritin的表達(dá)、鑒定、分離23-41
• 2.1 前言23
• 2.2 材料和方法23-33
• 2.2.1 試驗(yàn)材料23-24
• 2.2.2 試驗(yàn)儀器24-25
• 2.2.3 主要試劑的配制25-26
• 2.2.4 試驗(yàn)方法26-33
• 2.3 試驗(yàn)結(jié)果與分析33-39
• 2.3.1 修飾基因序列與原基因序列的比對結(jié)果33-34
• 2.3.2 表達(dá)菌株的PCR鑒定結(jié)果34
• 2.3.3 測序結(jié)果34-35
• 2.3.4 重組CH1-ferritin的單個亞基的蛋白分子量35-36
• 2.3.5 SDS-PAGE凝膠電泳結(jié)果36-37
• 2.3.6 溫度對重組CH1-ferritin二級結(jié)構(gòu)的影響37-38
• 2.3.7 不同pH值對重組CH1-ferritin二級結(jié)構(gòu)的影響38-39
• 2.4 討論39-40
• 2.4.1 密碼子偏好性分析39-40
• 2.4.2 重組CH1-ferritin的鑒定和純化40
• 2.4.3 重組CH1-ferritin的耐熱性和pH穩(wěn)定性40
• 2.5 小結(jié)40-41
• 第三章 重組CH1-ferritin對缺鐵模型大鼠補(bǔ)鐵效果的研究41-56
• 3.1 前言41
• 3.2 材料和方法41-47
• 3.2.1 試驗(yàn)試劑41-42
• 3.2.2 試驗(yàn)儀器42
• 3.2.3 試驗(yàn)試劑配制42-43
• 3.2.4 試驗(yàn)方法43-47
• 3.3 統(tǒng)計(jì)方法47
• 3.4 結(jié)果與分析47-52
• 3.4.1 進(jìn)鐵動力學(xué)測試47-48
• 3.4.2 重組CH1-ferritin的自然礦化結(jié)果48-49
• 3.4.3 自然礦化重組CH1-ferritin中鐵含量測定結(jié)果49-50
• 3.4.5 試驗(yàn)動物模型的構(gòu)建結(jié)果50-51
• 3.4.6 自然礦化重組CH1-ferritin的補(bǔ)鐵效果51-52
• 3.5 討論52-55
• 3.5.1 自然礦化CH1-ferritin的補(bǔ)鐵功能52-53
• 3.5.2 缺鐵性貧血模型的鑒定53
• 3.5.3 重組CH1-ferritin的自然礦化反應(yīng)53
• 3.5.4 重組CH1-ferritin在大鼠體內(nèi)的吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)53-54
• 3.5.5 重組CH1-ferritin存在的問題和不足54
• 3.5.6 重組CH1-ferritin未來與展望54-55
• 3.6 小結(jié)55-56
• 結(jié)論56-57
• 參考文獻(xiàn)57-60
• 致謝60

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本文編號：820531