本文關(guān)鍵詞：PCV2靶向性多表位疫苗的構(gòu)建與免疫活性鑒定

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【摘要】：為構(gòu)建基于Ⅱ內(nèi)體靶向性的PCV2多表位疫苗,并進(jìn)行免疫活性鑒定。選取7個(gè)PCV2中和表位,組成表位串聯(lián)體,采用DNA Star Protean優(yōu)化組合方式及密碼子優(yōu)化,合成ep c DNA,定向插入p EG X-4T-1;通過(guò)三輪PCR重疊延伸構(gòu)建ep置換CLIP區(qū)的ep+Ⅱ重組體,經(jīng)X hoⅠ、X baⅠ位點(diǎn)定向克隆至pCI-neo多克隆位點(diǎn)處,構(gòu)建真核表達(dá)載體pCI-neo-ep+Ⅱ;轉(zhuǎn)染CO S-7細(xì)胞,免疫熒光、W estern-blot鑒定Ⅱ內(nèi)體靶向功能與ep表達(dá)蛋白免疫活性;提取pCI-neo-ep+Ⅱ免疫BALB/c小鼠,ELISA方法測(cè)定血清抗體,評(píng)價(jià)其免疫效力。結(jié)果顯示,優(yōu)化確定PCV2 ep串聯(lián)體c DNA大小為300 bp,編碼100位氨基酸殘基,并成功構(gòu)建了p EGX-4T-1-ep重組體;三輪PCR置換構(gòu)建了ep完整替換CLIP區(qū)ep+Ⅱ重組體,大小為873 bp,無(wú)Ⅱ、ep基因缺失和突變。免疫熒光抗體檢測(cè)顯示,Ⅱ內(nèi)體靶向功能不受置換ep影響;Western-blot鑒定表明,ep+Ⅱ重組蛋白獲得有效表達(dá),目的蛋白大小約32.1 ku,其與PCV2陽(yáng)性血清具有良好的免疫反應(yīng)性。小鼠免疫試驗(yàn)顯示,pCI-neo-ep+Ⅱ免疫ELISA抗體效價(jià)可達(dá)1∶1 600,明顯優(yōu)于非靶向性pCI-neo-ep的1∶1 200。結(jié)果表明,構(gòu)建了具有內(nèi)體靶向性PCV2多表位疫苗,明顯提高表位疫苗免疫抗體效價(jià),為PCV2新型疫苗研究奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院;山東綠都生物科技有限公司;
【關(guān)鍵詞】： PCV 靶向性 表位疫苗 免疫活性
【分類(lèi)號(hào)】：S855.3
【正文快照】： 豬圓環(huán)病毒2型(porcine circovirus type,2PCV2)感染是導(dǎo)致斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(post-w eaning m ultisytemic wasting syndrome,PM WS)的重要病原,該病臨床表現(xiàn)為進(jìn)行性消瘦、生長(zhǎng)遲緩、呼吸困難、貧血、黃疽和腹瀉等癥狀,以5~12周齡豬易感性高[1]。目前已將與PCV2感染

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本文編號(hào)：820235