本文關(guān)鍵詞：氨基胍對(duì)IL-1β誘導(dǎo)下大鼠軟骨細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子通路的影響

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【摘要】：通過(guò)白介素-1β(IL-1β)誘導(dǎo)大鼠原代軟骨細(xì)胞,模擬骨關(guān)節(jié)炎中軟骨細(xì)胞,研究氨基胍(AG)對(duì)IL-1β誘導(dǎo)的誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)、環(huán)氧酶-2(COX-2)表達(dá)及NF-kB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響,探討AG是否能有效抑制IL-1β誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞NF-kB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,為氨基胍治療骨關(guān)節(jié)炎提供有效的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。以體外培養(yǎng)的SD大鼠髖關(guān)節(jié)軟骨的第3代的大鼠軟骨細(xì)胞為研究對(duì)象,根據(jù)氨基胍、IL-1β的濃度和其作用細(xì)胞的時(shí)間,實(shí)驗(yàn)分為X、Z組。X組分為5個(gè)亞組,包括A1組(不加任何刺激因子)、B1組(10 ng/mL IL-1β)、D1組(10 ng/mL IL-1β和0.3 mM AG)、D3組(10 ng/m L IL-1β和1 mM AG)、D5組(10 ng/m L IL-1β和3 mM AG)。將各亞組與細(xì)胞一起孵育2h。Z組分為6個(gè)亞組,包括A2組(不加任何刺激因子)、B2組(10 ng/m L IL-1β)、C組(3mM AG)、D2組(10 ng/m L IL-1β和0.3 mM AG)、D4組(10 ng/m L IL-1β和1 mM AG)、D6組(10 ng/m L IL-1β和3 mM AG)。將各亞組與細(xì)胞一起孵育24h。通過(guò)蛋白質(zhì)免疫印跡檢測(cè)軟骨細(xì)胞中p-IKKα/β、p-p65、p65、IκBα、p-IκBα、i NOS和COX-2表達(dá);免疫組化法檢測(cè)p65核移位。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:(1)與IL-1β處理組相比,不同濃度(0.3 mM、1 mM、3 mM)的AG能促使IL-1β誘導(dǎo)下p-IKKα/β和p-IκBα蛋白量均顯著降低,p65和IκBα的蛋白量均顯著升高,p0.01。當(dāng)AG濃度為0.3 mM時(shí),p-p65蛋白量沒(méi)有明顯變化,p0.05;AG濃度為1 mM和3 mM時(shí),p-p65蛋白的量均顯著降低。當(dāng)AG濃度為1 mM時(shí),細(xì)胞內(nèi)p-IKKα/β、p-IκBα和p-p65蛋白量均達(dá)到最低,p65和IκBα蛋白量均達(dá)到最高。(2)與IL-1β處理組相比,3 mM AG作用于軟骨細(xì)胞,軟骨細(xì)胞胞漿i NOS和COX-2蛋白含量顯著降低,p0.01;不同濃度(0.3 mM、1 mM、3 mM)的AG能促使IL-1β誘導(dǎo)下i NOS和COX-2表達(dá)量均顯著降低,p0.01。并且隨著AG濃度的增高,抑制效果逐漸增強(qiáng)。(3)IL-1β誘導(dǎo)下SD大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的胞核呈現(xiàn)黃綠色,p65集中在細(xì)胞核內(nèi)。IL-1β和AG共同作用軟骨細(xì)胞后,細(xì)胞質(zhì)呈現(xiàn)黃綠色,p65集中在細(xì)胞質(zhì)內(nèi),表明AG明顯抑制了IL-1β誘導(dǎo)下NF-κB/p65核轉(zhuǎn)位。本實(shí)驗(yàn)研究表明氨基胍通過(guò)抑制NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,下調(diào)IL-1β誘導(dǎo)大鼠軟骨細(xì)胞合成i NOS和COX-2,從而保護(hù)軟骨細(xì)胞免受破壞作用。
【關(guān)鍵詞】：氨基胍 大鼠軟骨細(xì)胞 白介素-1β NF-κB信號(hào)通路 環(huán)氧合酶-2
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S857.16
【目錄】：

• 摘要8-9
• 英文摘要9-11
• 1 引言11-22
• 1.1 骨關(guān)節(jié)炎概述11-19
• 1.1.1 關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)變化11-12
• 1.1.2 骨關(guān)節(jié)炎發(fā)病原因12
• 1.1.3 骨關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制12-16
• 1.1.4 骨關(guān)節(jié)炎介導(dǎo)軟骨代謝失衡的相關(guān)信號(hào)通路16-19
• 1.2 氨基胍研究進(jìn)展19-20
• 1.2.1 氨基胍的藥用價(jià)值19
• 1.2.2 氨基胍的藥理活性19-20
• 1.2.3 氨基胍與骨關(guān)節(jié)炎20
• 1.3 本實(shí)驗(yàn)研究目的及意義20-22
• 2 材料與方法22-31
• 2.1 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑22-24
• 2.1.1 主要儀器22
• 2.1.2 主要化學(xué)試劑和生物耗材22-23
• 2.1.3 主要試劑的配制23-24
• 2.2 大鼠軟骨細(xì)胞的培養(yǎng)與處理24-25
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作24
• 2.2.2 大鼠軟骨細(xì)胞的培養(yǎng)24-25
• 2.3 實(shí)驗(yàn)分組25-26
• 2.4 軟骨細(xì)胞鑒定26
• 2.4.1 軟骨細(xì)胞II型膠原免疫組化鑒定26
• 2.4.2 軟骨細(xì)胞蛋白多糖鑒定26
• 2.5 CCK8法檢測(cè)細(xì)胞活性變化26-27
• 2.6 各組軟骨細(xì)胞中目的蛋白含量的測(cè)定27-29
• 2.6.1 Western及IP細(xì)胞裂解方法提取各組細(xì)胞的總蛋白27
• 2.6.2 各組中樣品濃度測(cè)定27
• 2.6.3 蛋白樣品的處理27-28
• 2.6.4 Western Blot檢測(cè)目的蛋白28-29
• 2.7 軟骨細(xì)胞NF-κB核轉(zhuǎn)位免疫組化實(shí)驗(yàn)29-30
• 2.8 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的分析與統(tǒng)計(jì)30-31
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-40
• 3.1 軟骨培養(yǎng)及細(xì)胞鑒定31-32
• 3.1.1 軟骨細(xì)胞培養(yǎng)形態(tài)觀察31
• 3.1.2 甲苯胺蘭染色31-32
• 3.1.3 II型膠原免疫組化染色32
• 3.2 不同濃度氨基胍對(duì)軟骨細(xì)胞活力的影響32-33
• 3.3 氨基胍對(duì)IL-1β誘導(dǎo)SD大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞NF-κB信號(hào)通路的影響33-38
• 3.3.1 氨基胍對(duì)IL-1β誘導(dǎo)SD大鼠軟骨細(xì)胞p-IKKα/β的表達(dá)影響33-34
• 3.3.2 氨基胍對(duì)IL-1β誘導(dǎo)SD大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞IκBα的表達(dá)影響34-35
• 3.3.3 氨基胍對(duì)IL-1β誘導(dǎo)SD大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞p-IκBα的表達(dá)影響35-36
• 3.3.4 氨基胍對(duì)IL-1β誘導(dǎo)SD大鼠軟骨細(xì)胞p65的表達(dá)影響36
• 3.3.5 氨基胍對(duì)IL-1β誘導(dǎo)SD大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞p-p65的表達(dá)影響36-37
• 3.3.6 氨基胍對(duì)IL-1β誘導(dǎo)SD大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞NF-κB的核轉(zhuǎn)位的影響37-38
• 3.4 氨基胍對(duì)IL-1β誘導(dǎo)SD大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞i NOS的表達(dá)影響38-39
• 3.5 氨基胍對(duì)IL-1β誘導(dǎo)SD大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞COX-2 的表達(dá)影響39-40
• 4 討論40-45
• 4.1 氨基胍對(duì)IL-1β誘導(dǎo)SD大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞NF-κB信號(hào)通路的影響40-42
• 4.1.1 氨基胍對(duì)IL-1β誘導(dǎo)SD大鼠軟骨細(xì)胞p-IKKα/β的表達(dá)影響40-41
• 4.1.2 氨基胍對(duì)IL-1β誘導(dǎo)SD大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞p-IκBα和IκBα的表達(dá)影響41
• 4.1.3 氨基胍對(duì)IL-1β誘導(dǎo)SD大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞p-p65和p65的表達(dá)影響41-42
• 4.1.4 氨基胍對(duì)IL-1β誘導(dǎo)SD大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞NF-κB p65核移位的影響42
• 4.2 氨基胍對(duì)IL-1β誘導(dǎo)SD大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞i NOS的表達(dá)影響42-43
• 4.3 氨基胍對(duì)IL-1β誘導(dǎo)SD大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞COX-2 的表達(dá)影響43-45
• 5 結(jié)論45-46
• 致謝46-47
• 參考文獻(xiàn)47-57
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文57

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本文編號(hào)：803712