本文關(guān)鍵詞：訓練對蒙古馬肌肉發(fā)育相關(guān)基因MyoG的表達量影響研究

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【摘要】：蒙古馬屬世界上耐力較強的馬,它具有耐勞、抗寒、耐疾病、生命力強等特點,能適應艱苦環(huán)境與粗放的飼養(yǎng)管理。蒙古馬在我國各個地區(qū)都很常見,其主產(chǎn)區(qū)是內(nèi)蒙古自治區(qū)和外蒙古。13世紀蒙古軍隊騎著蒙古馬走遍了整個歐亞大陸,正是這樣的特殊人為選育方式造就了蒙古馬的超強耐力,他們能夠在賽場上連續(xù)快速奔跑百余公里。這樣超強的耐力性狀無非由基因和環(huán)境決定。因此,為揭示蒙古馬超強耐力性狀形成的遺傳學機理,從基因的角度揭示蒙古馬超強耐力性狀形成的原理,本研究對6匹遺傳背景相似的蒙古馬,進行了為期四個月的超負荷運動訓練,分別在訓練前后采集肌肉樣本,對蒙古馬骨骼肌轉(zhuǎn)錄組進行了測定,尋找與蒙古馬耐力相關(guān)的調(diào)控通路。通過以上步驟發(fā)現(xiàn)MyoG基因與肌肉發(fā)育有直接相關(guān)。隨后對MyoG基因進行了表達量驗證分析,并對肌肉細胞進行培養(yǎng)、傳代,在生長最旺盛的時期提取總RNA。然后采取熒光定量PCR技術(shù)對蒙古馬訓練前后正常肌肉組織和培養(yǎng)傳代后的肌肉組織中與肌肉發(fā)育相關(guān)的MyoG基因進行對比研究,發(fā)現(xiàn)該基因在對蒙古馬進行長時間的訓練后在肌肉組織中的表達量有顯著提高,但在訓練前將肌細胞進行細胞體外培養(yǎng)后,該基因的表達量無明顯的變化,這說明通過訓練后MyoG基因的表達上調(diào),促進肌肉的生長,從而使蒙古馬的能量來源更加廣泛,對耐力性形成有極好的促進作用,而細胞培養(yǎng)傳代對基因的表達無明顯的影響。
【關(guān)鍵詞】：蒙古馬 耐力訓練 轉(zhuǎn)錄組 肌肉發(fā)育 基因表達驗證
【學位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S821.81
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-8
• 縮略詞表8-9
• 1 引言9-13
• 1.1 蒙古馬的分布及特征9
• 1.2 蒙古馬的耐力9-10
• 1.3 運動訓練對耐力的作用10
• 1.4 馬運動學研究進展10-11
• 1.5 轉(zhuǎn)錄組學的研究意義11-13
• 2 本研究的目的意義及技術(shù)路線13-14
• 2.1 本研究目的和意義13
• 2.1.1 研究目的13
• 2.1.2 研究意義13
• 2.2 本研究的技術(shù)路線13-14
• 3 實驗材料與方法14-23
• 3.1 實驗材料14-16
• 3.1.1 實驗用馬及其訓練原則14
• 3.1.2 實驗樣品的采集14
• 3.1.3 實驗儀器設(shè)備14-15
• 3.1.4 實驗試劑材料15-16
• 3.2 實驗方法16-23
• 3.2.1 蒙古馬骨骼肌細胞的體外培養(yǎng)16-17
• 3.2.1.1 骨骼肌細胞分離及培養(yǎng)16
• 3.2.1.2 骨骼肌細胞純化16-17
• 3.2.1.3 骨骼肌細胞傳代17
• 3.2.1.4 骨骼肌細胞冷凍與復蘇17
• 3.2.1.5 骨骼肌細胞鑒定17
• 3.2.2 試劑盒法提取肌肉組織及培養(yǎng)肌細胞總RNA17-18
• 3.2.3 總RNA的質(zhì)量檢測18-20
• 3.2.3.1 檢驗總RNA的完整性18
• 3.2.3.2 測定總RNA的純度18
• 3.2.3.3 肌肉轉(zhuǎn)錄組高通量測序文庫制備與文庫測序18-20
• 3.2.3.4 蒙古馬訓練前后肌肉組織及培養(yǎng)肌細胞總RNA反轉(zhuǎn)錄合成cDNA20
• 3.2.4 蒙古馬訓練前后肌肉發(fā)育相關(guān)基因的表達量測定20-23
• 3.2.4.1 引物設(shè)計20-21
• 3.2.4.2 引物溶解及稀釋21
• 3.2.4.3 PCR擴增21
• 3.2.4.4 實時熒光定量PCR體系及條件21-23
• 4 實驗結(jié)果與分析23-29
• 4.1 蒙古馬肌肉細胞體外培養(yǎng)結(jié)果23
• 4.2 蒙古馬訓練前后肌肉及肌肉細胞總RNA的提取結(jié)果23-24
• 4.3 訓練前后差異表達基因的篩選24-25
• 4.4 訓練前后差異基因的Gene Ontology功能富集分析25-26
• 4.5 與肌肉生長相關(guān)基因的確定26
• 4.6 蒙古馬訓練前后正常肌肉組織和肌細胞培養(yǎng)后的MyoG基因的定量驗證26-29
• 4.6.1 MyoG和18srRNA基因PCR擴增結(jié)果27-28
• 4.6.2 蒙古馬訓練前后正常細胞和培養(yǎng)傳代后MyoG基因的表達差異分析28-29
• 5 討論29-30
• 6 展望30-31
• 致謝31-32
• 參考文獻32-34
• 作者簡介34

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