發(fā)布時間：2017-09-02 05:09

  本文關(guān)鍵詞：不同等級環(huán)境中肉兔骨骼肌性狀與MyoG基因表達(dá)量及其DNA甲基化分析

  更多相關(guān)文章： 新西蘭兔 MyoG 普通環(huán)境 SPF環(huán)境 甲基化

【摘要】：隨著養(yǎng)兔業(yè)生產(chǎn)水平的不斷提高和市場消費需求的改變,兔的肌肉性狀逐漸成為將來育種工作中的熱點。肌肉性狀的形成受到遺傳、營養(yǎng)水平和生存環(huán)境等因素的共同影響,在表觀遺傳水平上研究環(huán)境對肌肉生長性狀的分子調(diào)控機(jī)制,對改善動物肉品質(zhì)和滿足人們對肉質(zhì)安全性的需求具有積極的意義。在Myo D基因家族中,Myo G基因是唯一的在所有骨骼肌細(xì)胞系中均可表達(dá)的基因,在骨骼肌分化過程中Myo G基因是起關(guān)鍵作用的因子,此基因通過調(diào)節(jié)成肌細(xì)胞的融合和肌纖維的形成在肌肉分化的過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。因此本實驗旨在利用Myo G基因作為本研究的表觀遺傳分子的候選基因,利用BSP和Q-PCR作為主要的分子實驗方法選取青島康大兔業(yè)發(fā)展有限公司連續(xù)培育六年的84日齡肉兔為試驗群體,其中普通環(huán)境新西蘭兔和SPF環(huán)境新西蘭兔6只,作為試驗材料來研究不同等級環(huán)境對肉兔生產(chǎn)性能的影響及其Myo G基因甲基化頻率和表達(dá)量與屠宰性狀的相關(guān)性分析。主要的實驗結(jié)果如下:(1)對兩種不同等級環(huán)境新西蘭兔的屠宰生產(chǎn)性狀分析,結(jié)果顯示SPF環(huán)境新西蘭兔宰前活重、全凈膛重、后腿重重量顯著高于普通環(huán)境中新西蘭兔(P0.05);SPF級兔的主要器官系數(shù)與普通級兔的主要器官系數(shù)相比,雖然心和肺差異不明顯(P0.05),但其余的幾個器官SPF級均顯著低于普通級新西蘭兔(P0.05)。(2)對兩種不同等級環(huán)境的新西蘭兔的背最長肌進(jìn)行切片實驗,分析兩種環(huán)境中新西蘭兔的肌纖維性狀的差異,結(jié)果顯示SPF級新西蘭兔的肌纖維直徑顯著小于普通環(huán)境(P0.05),密度顯著大于普通環(huán)境(P0.05)。(3)對兩種不同等級環(huán)境的新西蘭兔的后腿、背最長肌進(jìn)行熒光定量分析,結(jié)果顯示SPF環(huán)境新西蘭肉兔的后腿Myo G基因表達(dá)量顯著高于普通環(huán)境的后腿的表達(dá)量(P0.05),SPF環(huán)境新西蘭肉兔背腰Myo G基因表達(dá)量顯著低于普通環(huán)境(P0.05),而且還發(fā)現(xiàn)在兩種環(huán)境中都有后腿表達(dá)量背腰的表達(dá)量的規(guī)律。(4)對兩種環(huán)境中的新西蘭兔的后腿和背最長肌分別進(jìn)行Myo G基因啟動子區(qū)域即轉(zhuǎn)錄起始位點上游595bp至下游500bp左右的區(qū)域的甲基化分析,整體上發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄起始位點上游-80bp至下游+506bp區(qū)域處于高甲基化狀態(tài)(60%);啟動子區(qū)-331bp至-61bp區(qū)域處于低甲基化狀態(tài)(40%);Myo G基因啟動子區(qū)域-593bp至-346bp區(qū)域處于中度甲基化狀態(tài)(40%-60%)。而且發(fā)現(xiàn)兩種環(huán)境中的新西蘭兔后腿在Myo G基因啟動子區(qū)域-80bp至+328bp的甲基化頻率存在明顯的差異,即在Myo G基因啟動子-80bp至+328bp區(qū)域,SPF級環(huán)境肉兔后腿的甲基化率顯著小于普通級環(huán)境兔子后腿甲基化率(P0.05);兩種環(huán)境中的新西蘭兔背腰在Myo G基因啟動子區(qū)域-80bp至+506bp的甲基化頻率存在明顯的差異,即在Myo G基因啟動子-80bp至+506bp區(qū)域,SPF級環(huán)境肉兔背腰的甲基化率顯著大于普通級環(huán)境兔子背腰甲基化率(P0.05)。(5)通過對Myo G基因的啟動子區(qū)域的轉(zhuǎn)錄因子及其相關(guān)的結(jié)合位點預(yù)測分析再通過相關(guān)研究分析,推測AP-2、NF1F、E2F等對甲基化敏感的轉(zhuǎn)錄因子能在Moy G基因甲基化與其表達(dá)的關(guān)系上中起著不可忽視的影響作用,SP1、CTCF、YY1F等轉(zhuǎn)錄因子屬于DNA甲基化非依賴性結(jié)合因子可能在Moy G基因甲基化與其表達(dá)的關(guān)系上作用不是很大。以上結(jié)果可推測,在一定程度上環(huán)境可通過DNA甲基化的表觀遺傳修飾的分子調(diào)控機(jī)制來影響肉兔的生產(chǎn)性狀,并可推測Myo G基因的甲基化多態(tài)性可能作為未來的分子育種的分子標(biāo)記。
【關(guān)鍵詞】：新西蘭兔 MyoG 普通環(huán)境 SPF環(huán)境 甲基化
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S829.1
【目錄】：

• 符號說明4-8
• 中文摘要8-10
• Abstract10-13
• 前言13-26
• 1.1 肌肉的發(fā)育與品質(zhì)性能的研究14-15
• 1.1.1 肌肉的發(fā)育14
• 1.1.2 肌纖維與肌肉品質(zhì)性能的關(guān)系14-15
• 1.1.3 骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞與肌肉品質(zhì)的關(guān)系15
• 1.2 與肌肉生長性能相關(guān)的功能基因（MyoG)15-17
• 1.2.1 MyoG基因的結(jié)構(gòu)與功能特點15-16
• 1.2.2 MyoG基因?qū)∪庑誀钭饔玫难芯窟M(jìn)展16-17
• 1.2.3 MyoG基因的DNA甲基化研究17
• 1.3 DNA甲基化17-23
• 1.3.1 DNA甲基化的分子調(diào)控機(jī)制18-19
• 1.3.2 影響DNA甲基化的因素19-22
• 1.3.2.1 環(huán)境因素19
• 1.3.2.2 營養(yǎng)物質(zhì)19-20
• 1.3.2.3 化學(xué)因子20
• 1.3.2.4 物理因子20
• 1.3.2.5 溫度20-21
• 1.3.2.6 DNMT21
• 1.3.2.7 RNAi21
• 1.3.2.8 組蛋白的表觀修飾21-22
• 1.3.3 DNA甲基化在動植物生產(chǎn)中的應(yīng)用22-23
• 1.3.3.1 DNA甲基化在動植物雜種優(yōu)勢中的應(yīng)用22
• 1.3.3.2 DNA甲基化在動植物分子標(biāo)記中的應(yīng)用22-23
• 1.4 不同等級清潔環(huán)境中動物的研究23-25
• 1.4.1 不同等級清潔環(huán)境中鼠的研究24
• 1.4.2 不同等級清潔環(huán)境中家兔的研究24-25
• 1.4.3 不同等級清潔環(huán)境中雞的研究25
• 1.5 本研究的目的和意義25-26
• 2 材料與方法26-41
• 2.1 試驗動物26
• 2.1.1 飼料及配方26
• 2.1.2 實驗動物的飼養(yǎng)管理26
• 2.2 樣品采集26-27
• 2.3 主要試劑與儀器27-28
• 2.3.1 主要試劑配置27
• 2.3.2 主要的試劑27-28
• 2.3.3 主要的實驗儀器28
• 2.4 實驗方法28-39
• 2.4.1 新西蘭肉兔肌肉組織DNA提取28-29
• 2.4.2 甲基化克隆測序29-34
• 2.4.3 新西蘭肉兔肌肉組織RNA提取34-38
• 2.4.4 背腰肉切片38-39
• 2.5 統(tǒng)計分析39-40
• 2.6 關(guān)鍵的應(yīng)用軟件40-41
• 3 實驗結(jié)果與分析41-55
• 3.1 兩種不同環(huán)境新西蘭肉兔的屠宰生產(chǎn)性狀分析41-42
• 3.2 兩種不同環(huán)境背腰肌肉組織切片42-43
• 3.3 兩種不同環(huán)境MyoG定量結(jié)果及其分析43-45
• 3.3.1 RNA提取結(jié)果43
• 3.3.2 MyoG基因定量引物檢測43-44
• 3.3.3 后腿和背腰MyoG定量結(jié)果44-45
• 3.4 不同環(huán)境MyoG甲基化水平分析45-54
• 3.4.1 MyoG基因BSP引物設(shè)計45-48
• 3.4.2 不同環(huán)境肉兔背腰MyoG基因甲基化結(jié)果48-51
• 3.4.3 不同環(huán)境肉兔后退MyoG基因甲基化結(jié)果51-54
• 3.5 MyoG啟動子區(qū)的轉(zhuǎn)錄因子分析54-55
• 4 討論55-58
• 4.1 兩種不同等級環(huán)境肉兔生產(chǎn)性狀的討論55
• 4.2 兩種不同等級環(huán)境肉兔肌纖維性狀的討論55-56
• 4.3 兩種不同等級環(huán)境肉兔MyoG基因在背腰最長肌和后腿肌中基因表達(dá)量的討論56
• 4.4 兩種不同等級環(huán)境肉兔MyoG基因在背腰最長肌和后腿肌中的甲基化狀態(tài)的討論56-57
• 4.5 對MyoG啟動子區(qū)的轉(zhuǎn)錄因子的討論57-58
• 5 結(jié)論58-59
• 參考文獻(xiàn)59-66
• 致謝66

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本文編號：776551