本文關(guān)鍵詞：肌肉特異性表達MSTN siRNA與hF AD3在牛NCAPG-LCORL位點定點整合研究

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【摘要】：利用基因編輯技術(shù)可以實現(xiàn)多基因調(diào)控并培育轉(zhuǎn)基因動物新品種。本研究利用CRISPR/Cas9技術(shù),將肌肉特異性雙向共表達打靶載體5arm-shRNA-MRF 4-MRF4-hFAD3-3arm(MSTN siRNA-hFAD3)定點整合入已證明的安全整合位點NCAPG-LCORL位點。研究MSTN siRNA-hFAD3表達對肌肉和脂肪酸相關(guān)基因的表達及n3多不飽和脂肪酸含量的影響,以期達到既促進肌肉發(fā)育,同時增加肌肉中n-3多不飽和脂肪酸,有效改善肉質(zhì)、提高肉量的目的。結(jié)果表明：(1)CRISPR/Cas9成功介導(dǎo)MSTN siRNA-hFAD3肌肉特異性雙向共表達載體在NCAPG-LCORL位點定點整合入牛細胞基因組。(2)MSTN siRNA-hFAD3基因的表達在細胞水平顯示一定的肌肉特異性。(3)在定點整合的牛胎兒成纖維細胞及肌肉衛(wèi)星細胞中,脂肪相關(guān)基因的表達結(jié)果顯示,脂肪合成與脂肪分解的平衡向脂肪分解方向移動；肌肉發(fā)育相關(guān)基因表達量均上調(diào)；n6/n3比值均下降。(4)成功獲得了6株同源重組陽性單克隆細胞株,并通過體細胞克隆制備轉(zhuǎn)基因克隆胚胎。綜上所述,肌肉特異性MSTN siRNA-hFAD3在轉(zhuǎn)基因細胞中表達良好,可進一步用于轉(zhuǎn)基因克隆牛的生產(chǎn)。
【關(guān)鍵詞】：CRISP/Cas9 MSTN siRNA-hFAD3 NCAPG-LCORL 肌肉特異性
【學位授予單位】：內(nèi)蒙古大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：Q78;S823
【目錄】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-10
• 縮略詞表10-11
• 第一部分 試驗研究 肌肉特異性表達MSTN siRNA與hFAD3在牛NCAPG-LCORL位點定點整合研究11-56
• 前言11-13
• 1 材料與方法13-32
• 1.1 主要試劑及耗材13
• 1.2 方法13-32
• 2 結(jié)果32-48
• 2.1 MRF4啟動子細胞水平驗證結(jié)果32-34
• 2.2 gRNA的設(shè)計及切割載體的構(gòu)建結(jié)果34-35
• 2.3 打靶載體的構(gòu)建及鑒定結(jié)果35-39
• 2.4 細胞水平的功能驗證結(jié)果39-43
• 2.5 單克隆細胞篩選結(jié)果43-47
• 2.6 轉(zhuǎn)基因克隆胚胎的生產(chǎn)47-48
• 3 討論48-51
• 3.1 整合位點的選擇及打靶載體的構(gòu)建48
• 3.2 肌肉特異性雙向共表達載體對相關(guān)基因表達的影響48-50
• 3.3 肌肉特異性雙向共表達載體對脂肪酸中n6/n3比值的影響50
• 3.4 轉(zhuǎn)基因單克隆細胞克隆胚胎的發(fā)育效率50-51
• 4 結(jié)論51-52
• 參考文獻52-56
• 第二部分 文獻綜述 CRISPR/Cas9在哺乳動物基因組定點編輯的研究進展56-67
• 1 CRISPR/Cas系統(tǒng)的發(fā)展歷程56-57
• 2 新型CRISPR/Cas9系統(tǒng)57-59
• 2.1 Cas9 nickase (Cas9n)57
• 2.2 Dead Cas9 (dCas9)57-58
• 2.3 Light-activated Cas958-59
• 3 CRISPR/Cas9在哺乳動物基因組定點編輯中的應(yīng)用59-62
• 3.1 CRISPR/Cas9在哺乳動物基因組定點敲除中的應(yīng)用60-61
• 3.2 CRISPR/Cas9在哺乳動物基因組定點敲入中的應(yīng)用61-62
• 4 結(jié)語62-63
• 參考文獻63-67
• 致謝67-68
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文68

【相似文獻】

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 郭晶;肌肉特異性表達MSTN siRNA與hF AD3在牛NCAPG-LCORL位點定點整合研究[D];內(nèi)蒙古大學;2016年

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本文編號：770634