本文關(guān)鍵詞：肌肉特異性表達(dá)MSTN siRNA與hF AD3在牛NCAPG-LCORL位點(diǎn)定點(diǎn)整合研究

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【摘要】：利用基因編輯技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)多基因調(diào)控并培育轉(zhuǎn)基因動(dòng)物新品種。本研究利用CRISPR/Cas9技術(shù),將肌肉特異性雙向共表達(dá)打靶載體5arm-shRNA-MRF 4-MRF4-hFAD3-3arm(MSTN siRNA-hFAD3)定點(diǎn)整合入已證明的安全整合位點(diǎn)NCAPG-LCORL位點(diǎn)。研究MSTN siRNA-hFAD3表達(dá)對(duì)肌肉和脂肪酸相關(guān)基因的表達(dá)及n3多不飽和脂肪酸含量的影響,以期達(dá)到既促進(jìn)肌肉發(fā)育,同時(shí)增加肌肉中n-3多不飽和脂肪酸,有效改善肉質(zhì)、提高肉量的目的。結(jié)果表明：(1)CRISPR/Cas9成功介導(dǎo)MSTN siRNA-hFAD3肌肉特異性雙向共表達(dá)載體在NCAPG-LCORL位點(diǎn)定點(diǎn)整合入牛細(xì)胞基因組。(2)MSTN siRNA-hFAD3基因的表達(dá)在細(xì)胞水平顯示一定的肌肉特異性。(3)在定點(diǎn)整合的牛胎兒成纖維細(xì)胞及肌肉衛(wèi)星細(xì)胞中,脂肪相關(guān)基因的表達(dá)結(jié)果顯示,脂肪合成與脂肪分解的平衡向脂肪分解方向移動(dòng)；肌肉發(fā)育相關(guān)基因表達(dá)量均上調(diào)；n6/n3比值均下降。(4)成功獲得了6株同源重組陽(yáng)性單克隆細(xì)胞株,并通過(guò)體細(xì)胞克隆制備轉(zhuǎn)基因克隆胚胎。綜上所述,肌肉特異性MSTN siRNA-hFAD3在轉(zhuǎn)基因細(xì)胞中表達(dá)良好,可進(jìn)一步用于轉(zhuǎn)基因克隆牛的生產(chǎn)。
【關(guān)鍵詞】：CRISP/Cas9 MSTN siRNA-hFAD3 NCAPG-LCORL 肌肉特異性
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：Q78;S823
【目錄】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-10
• 縮略詞表10-11
• 第一部分 試驗(yàn)研究 肌肉特異性表達(dá)MSTN siRNA與hFAD3在牛NCAPG-LCORL位點(diǎn)定點(diǎn)整合研究11-56
• 前言11-13
• 1 材料與方法13-32
• 1.1 主要試劑及耗材13
• 1.2 方法13-32
• 2 結(jié)果32-48
• 2.1 MRF4啟動(dòng)子細(xì)胞水平驗(yàn)證結(jié)果32-34
• 2.2 gRNA的設(shè)計(jì)及切割載體的構(gòu)建結(jié)果34-35
• 2.3 打靶載體的構(gòu)建及鑒定結(jié)果35-39
• 2.4 細(xì)胞水平的功能驗(yàn)證結(jié)果39-43
• 2.5 單克隆細(xì)胞篩選結(jié)果43-47
• 2.6 轉(zhuǎn)基因克隆胚胎的生產(chǎn)47-48
• 3 討論48-51
• 3.1 整合位點(diǎn)的選擇及打靶載體的構(gòu)建48
• 3.2 肌肉特異性雙向共表達(dá)載體對(duì)相關(guān)基因表達(dá)的影響48-50
• 3.3 肌肉特異性雙向共表達(dá)載體對(duì)脂肪酸中n6/n3比值的影響50
• 3.4 轉(zhuǎn)基因單克隆細(xì)胞克隆胚胎的發(fā)育效率50-51
• 4 結(jié)論51-52
• 參考文獻(xiàn)52-56
• 第二部分 文獻(xiàn)綜述 CRISPR/Cas9在哺乳動(dòng)物基因組定點(diǎn)編輯的研究進(jìn)展56-67
• 1 CRISPR/Cas系統(tǒng)的發(fā)展歷程56-57
• 2 新型CRISPR/Cas9系統(tǒng)57-59
• 2.1 Cas9 nickase (Cas9n)57
• 2.2 Dead Cas9 (dCas9)57-58
• 2.3 Light-activated Cas958-59
• 3 CRISPR/Cas9在哺乳動(dòng)物基因組定點(diǎn)編輯中的應(yīng)用59-62
• 3.1 CRISPR/Cas9在哺乳動(dòng)物基因組定點(diǎn)敲除中的應(yīng)用60-61
• 3.2 CRISPR/Cas9在哺乳動(dòng)物基因組定點(diǎn)敲入中的應(yīng)用61-62
• 4 結(jié)語(yǔ)62-63
• 參考文獻(xiàn)63-67
• 致謝67-68
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文68

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 郭晶;肌肉特異性表達(dá)MSTN siRNA與hF AD3在牛NCAPG-LCORL位點(diǎn)定點(diǎn)整合研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2016年

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本文編號(hào)：770634