本文關(guān)鍵詞：慢病毒介導(dǎo)的靶向NDV P基因shRNA對NDV復(fù)制的抑制作用

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【摘要】：小干擾RNA(siRNA)誘導(dǎo)的RNA降解可以特異性地抑制病毒感染,它作為一種有效的抗病毒治療方法正被廣泛研究。為了探討慢病毒介導(dǎo)的shRNA對NDV復(fù)制的抑制效果,從而為新城疫病毒的抗病毒研究奠定基礎(chǔ),本研究以新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)P基因?yàn)榘谢?構(gòu)建了靶向NDV P基因的shRNA重組慢病毒表達(dá)載體RNAi-341和RNAi-671。將其與輔助細(xì)胞共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,獲得包裝好的重組慢病毒;在雞胚成纖維細(xì)胞(Chicken embryo fibroblast,CEF)和SPF雞胚上進(jìn)行了干擾實(shí)驗(yàn),并通過熒光定量PCR和病毒滴度測定檢測shRNA對NDV的抑制效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn),RNAi-341和RNAi-671均能抑制FLAG-P蛋白在293T細(xì)胞中的瞬時表達(dá)。在CEF細(xì)胞感染后16h后,NDV的病毒滴度分別降低了66.6倍和30.6倍;在雞胚感染48h后,RNAi-341和RNAi-671組NDV病毒的增殖量分別減少99%和98%。RNAi-341與RNAi-671不僅能抑制P基因的轉(zhuǎn)錄,還能顯著降低NP、M、F、HN和L基因的轉(zhuǎn)錄水平。與RNAi-671相比,RNAi-341的抑制效果更好。研究結(jié)果表明,慢病毒介導(dǎo)的靶向P基因的shRNA具有抗病毒作用,能夠抑制NDV在CEF和雞胚中的復(fù)制,從而為臨床防治NDV提供一個新方法。
【作者單位】： 山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所山東省畜禽疫病防治與繁育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 新城疫病毒 shRNA P基因 慢病毒載體
【基金】：公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(xiàng)(201303033,201003012) 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)資金(CARS-42-Z12)
【分類號】：S852.65
【正文快照】： 新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)屬于副粘病毒科副粘病毒亞科腮腺炎病毒屬,為不分節(jié)段負(fù)鏈RNA病毒[1]。NDV基因組長約15Kb[2-3],包含6個閱讀框,基因排列方式為3′-NP-P-M-F-HN-L-5′[4],依次編碼6種結(jié)構(gòu)蛋白,即核衣殼蛋白(NP)、磷蛋白(P)、基質(zhì)蛋白(M)、融合蛋白(F)，

本文編號：733722