發(fā)布時(shí)間：2017-08-22 18:34

  本文關(guān)鍵詞：A型產(chǎn)氣莢膜梭菌類毒素疫苗的臨床應(yīng)用和保護(hù)效果評(píng)價(jià)

  更多相關(guān)文章： A型產(chǎn)氣莢膜梭菌 類毒素疫苗 間接ELISA 血清抗體

【摘要】：產(chǎn)氣莢膜梭菌(Clostridium perfringens),又稱魏氏梭菌,存在于很多健康動(dòng)物的腸道中,當(dāng)飼養(yǎng)和環(huán)境條件改變時(shí),可引起畜禽的的產(chǎn)氣莢膜梭菌病,一旦發(fā)病,會(huì)導(dǎo)致畜禽迅速死亡,病程極短,往往在未得到有效治療前便死亡。近年來產(chǎn)氣莢膜梭菌病已經(jīng)致使養(yǎng)殖業(yè)遭受巨大經(jīng)濟(jì)損失。其中A型產(chǎn)氣莢膜梭菌是引起家兔腹瀉性腸炎的主要致病菌,該菌在腸道內(nèi)繁殖產(chǎn)生α毒素導(dǎo)致家兔發(fā)病。此類病的發(fā)病急、死亡率高、發(fā)病后用藥治療效果不明顯,因此為了有效預(yù)防和控制產(chǎn)氣莢膜梭菌病的發(fā)生,研制高效、安全的類毒素疫苗和評(píng)價(jià)其效力刻不容緩。ELISA方法,具有特異、敏感、迅速、可以大批量檢測(cè)抗體的優(yōu)勢(shì),可用于檢測(cè)和診斷產(chǎn)氣莢膜梭菌病,也可應(yīng)用于疫苗保護(hù)效果的評(píng)價(jià)及流行病學(xué)調(diào)查。本研究對(duì)A型產(chǎn)氣莢膜梭菌標(biāo)準(zhǔn)菌種(NCTC528)進(jìn)行復(fù)蘇、增菌、產(chǎn)毒,得到以α毒素為主的外毒素溶液。將制備的外毒素通過甲醛滅活,與白油佐劑混合乳化后,成功制備了A型產(chǎn)氣莢膜梭菌類毒素疫苗;另一方面;將外毒素經(jīng)過過濾除菌,飽和硫酸銨沉淀等方法對(duì)外毒素蛋白進(jìn)行提取。以毒素蛋白作為間接ELISA的包被抗原,摸索優(yōu)化反應(yīng)條件,最終建立了產(chǎn)氣莢膜梭菌毒素抗體檢測(cè)的間接ELISA方法。運(yùn)用該方法對(duì)免疫過疫苗的家兔進(jìn)行抗體水平的連續(xù)監(jiān)測(cè),以此來確定疫苗的最小免疫劑量和合理的免疫程序。疫苗臨床保護(hù)效果的評(píng)價(jià)試驗(yàn):將疫苗分為4個(gè)不同的劑量,分別對(duì)28日齡和45日齡的家兔各400只首免,28日齡家兔長至45日齡時(shí)對(duì)家兔進(jìn)行二免;通過攻毒保護(hù)實(shí)驗(yàn)和對(duì)血清抗體效價(jià)的連續(xù)監(jiān)測(cè),結(jié)果顯示,當(dāng)家兔血清抗體效價(jià)達(dá)到6.83×100log2左右時(shí),疫苗對(duì)家兔保護(hù)效果較好;最終確定了疫苗最小免疫劑量為0.5ml,二免后保護(hù)效果更佳。
【關(guān)鍵詞】：A型產(chǎn)氣莢膜梭菌 類毒素疫苗 間接ELISA 血清抗體
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S852.4
【目錄】：

• 符號(hào)說明4-8
• 中文摘要8-9
• 英文摘要9-11
• 1 前言11-18
• 1.1 產(chǎn)氣莢膜梭菌概述11-13
• 1.2 產(chǎn)氣莢膜梭菌病在國內(nèi)外的流行情況及其影響13-15
• 1.3 α毒素的生物學(xué)研究15-16
• 1.4 產(chǎn)氣莢膜梭菌疾病致病機(jī)理及防控措施16-17
• 1.5 研究的進(jìn)展和意義17-18
• 2 材料和方法18-25
• 2.1 菌種與培養(yǎng)基18
• 2.1.1 A型產(chǎn)氣莢膜梭菌種18
• 2.1.2 5%綿羊血瓊脂基礎(chǔ)平板18
• 2.1.3 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基FTG增菌液18
• 2.1.4 Gordon湯產(chǎn)毒培養(yǎng)基18
• 2.1.5 PBS的配制18
• 2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物18-19
• 2.3 主要儀器及試劑19
• 2.4 主要試劑配制19-20
• 2.5 試驗(yàn)方法20-24
• 2.5.1 菌種復(fù)蘇20
• 2.5.2 增菌20
• 2.5.3 毒素的制備20-21
• 2.5.4 A型產(chǎn)氣莢膜梭菌外毒素的提取21
• 2.5.4.1 外毒素的粗提21
• 2.5.4.2 應(yīng)用SephadexG-25方法對(duì)毒素透析除鹽21
• 2.5.5 聚丙烯酰氨凝膠電泳（SDS-PAGE)法檢測(cè)外毒素中的α毒素21-22
• 2.5.6 外毒素毒力的測(cè)定22
• 2.5.7 外毒素對(duì)家兔最小致死量的測(cè)定22
• 2.5.8 A型產(chǎn)氣莢膜梭菌類毒素疫苗的制備22
• 2.5.9 類毒素疫苗的檢測(cè)22-23
• 2.5.9.1 穩(wěn)定性檢測(cè)22
• 2.5.9.2 甲醛及硫柳汞的檢驗(yàn)22-23
• 2.5.9.3 安全性檢驗(yàn)23
• 2.5.10間接ELISA檢測(cè)方法的建立23-24
• 2.5.10.1 包被抗原最佳稀釋度確定23
• 2.5.10.2 最佳封閉條件的選擇23
• 2.5.10.3 樣品最佳反應(yīng)時(shí)間的確定23
• 2.5.10.4 酶標(biāo)二抗孵育時(shí)間的確定23
• 2.5.10.5 顯色底物作用時(shí)間的選擇23
• 2.5.10.6 間接ELISA方法的基本操作程序23-24
• 2.5.11 間接ELISA方法的性能評(píng)價(jià)24
• 2.5.11.1 特異性實(shí)驗(yàn)24
• 2.5.11.2 敏感性實(shí)驗(yàn)24
• 2.5.11.3 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)24
• 2.6 間接ELISA方法對(duì)疫苗免疫效果的評(píng)價(jià)24-25
• 2.6.1 免疫實(shí)驗(yàn)動(dòng)物24
• 2.6.2 攻毒保護(hù)試驗(yàn)24
• 2.6.3 血清抗體效價(jià)的測(cè)定24-25
• 3 結(jié)果與分析25-35
• 3.1 A型產(chǎn)氣莢膜梭菌外毒素的SDS-PAGE檢測(cè)結(jié)果25
• 3.2 A型產(chǎn)氣莢膜梭菌外毒素半數(shù)致死量測(cè)定結(jié)果25-26
• 3.3 A型產(chǎn)氣莢膜梭菌外毒素對(duì)家兔致死量的測(cè)定26
• 3.4 外毒素蛋白濃度的確定26
• 3.5 類毒素疫苗的檢驗(yàn)26-27
• 3.5.1 穩(wěn)定性檢測(cè)26-27
• 3.5.2 甲醛及硫柳汞的檢驗(yàn)27
• 3.5.3 安全性檢驗(yàn)27
• 3.6 間接ELISA方法最佳反應(yīng)條件的確立27-29
• 3.6.1 包被抗原最佳稀釋度的確定27
• 3.6.2 最佳封閉條件的選擇27-28
• 3.6.3 樣品最佳反應(yīng)時(shí)間的確定28
• 3.6.4 酶標(biāo)二抗孵育時(shí)間的確定28
• 3.6.5 顯色底物作用時(shí)間的選擇28-29
• 3.6.6 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)的確定29
• 3.7 間接ELISA方法的性能評(píng)價(jià)29-30
• 3.7.1 特異性實(shí)驗(yàn)29
• 3.7.2 敏感性實(shí)驗(yàn)29
• 3.7.3 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)29-30
• 3.8 疫苗保護(hù)效果評(píng)價(jià)結(jié)果30-35
• 3.8.1 血清抗體效價(jià)測(cè)定30-33
• 3.8.2 攻毒保護(hù)試驗(yàn)33-35
• 4 討論35-37
• 4.1 A型產(chǎn)氣莢膜梭菌外毒素的制備和提取35
• 4.2 間接ELISA方法的優(yōu)勢(shì)35
• 4.3 間接ELISA方法的實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用35-36
• 4.4 血清抗體消長規(guī)律和攻毒保護(hù)試驗(yàn)結(jié)果的研究36-37
• 5 結(jié)論37-38
• 參考文獻(xiàn)38-42
• 附錄42-44
• 致謝44

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 孫淑莉;徐桐春;張鳳蓮;;兒童疫苗接種后檢測(cè)兩對(duì)半的結(jié)果分析[J];石河子科技;2006年06期

2 夏來發(fā);;家禽疫苗與疫苗接種[J];國外畜牧學(xué)(豬與禽);1985年05期

3 王明俊;;談疫苗接種和免疫的有關(guān)問題[J];江西畜牧獸醫(yī)雜志;1986年01期

4 林建;疫苗——保持你的冷藏環(huán)境[J];江西畜牧獸醫(yī)雜志;2002年03期

5 張轉(zhuǎn)梅;陰君麗;;疫苗接種須避八個(gè)誤區(qū)[J];河南畜牧獸醫(yī)(綜合版);2008年09期

6 ;疫苗接種方面七大新聞[J];廣東農(nóng)業(yè)科學(xué);2011年12期

7 景力;丁瑞志;陳良坤;李凱;胡奇?zhèn)?;畜禽疫苗安全使用要點(diǎn)[J];中國動(dòng)物保健;2012年10期

8 郝林生;家禽疫苗接種[J];世界農(nóng)業(yè);1980年02期

9 葉波;David Shapiro;;禽病疫苗及其接種[J];國外畜牧科技;1983年03期

10 李立;;使豬長得快的疫苗[J];國外畜牧科技;1990年01期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 趙根明;袁正安;張濤;顧寶柯;陳健;于淼;蔡華;陳昕;五磐石;;上海市甲型H1N1流感疫苗接種的效果效益評(píng)估[A];華東地區(qū)第十次流行病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨華東地區(qū)流行病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議20周年慶典論文匯編[C];2010年

2 楊錫強(qiáng);;疫苗接種的不良反應(yīng)及其處理[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十五次全國兒科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編（上冊(cè)）[C];2010年

3 李明娟;王曉霞;;疫苗報(bào)道的困境與出路研究[A];2012年度中國健康傳播大會(huì)優(yōu)秀論文集[C];2012年

4 李鑫;滕繼軍;王軍紅;張晨;;疫苗接種后面部變異型吉蘭-巴雷綜合征1例報(bào)道[A];山東省2013年神經(jīng)內(nèi)科學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中國神經(jīng)免疫大會(huì)2013論文匯編[C];2013年

5 吳云紅;朱亮;初煒;孔祥金;;基于互聯(lián)網(wǎng)的動(dòng)態(tài)疫苗監(jiān)管模式[A];2010年中國藥學(xué)大會(huì)暨第十屆中國藥師周論文集[C];2010年

6 萬朝敏;;疫苗接種在流感大流行群體防控中的作用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十五次全國兒科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編（上冊(cè)）[C];2010年

7 唐秋艷;林興兵;劉麗;史楠;曹友聲;;疫苗發(fā)展現(xiàn)狀與挑戰(zhàn)[A];科技、工程與經(jīng)濟(jì)社會(huì)協(xié)調(diào)發(fā)展——河南省第四屆青年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（下冊(cè)）[C];2004年

8 劉柏林;熊亞軍;唐有智;唐孝富;;合川區(qū)適齡兒童卡介疫苗接種成功率調(diào)查分析[A];重慶市預(yù)防醫(yī)學(xué)會(huì)2012年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2012年

9 陳賢希;陳波;;疫苗藥品管理與應(yīng)用存在的問題及對(duì)策[A];2013年中國藥學(xué)會(huì)藥事管理專業(yè)委員會(huì)年會(huì)暨“醫(yī)藥安全與科學(xué)發(fā)展”學(xué)術(shù)論壇論文集（下冊(cè)）[C];2013年

10 熊仲祥;;“金苗通”:關(guān)注下一代從零開始[A];信息讓生活更美好——江蘇省通信行業(yè)信息化案例選編[C];2010年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 本報(bào)記者 耿興敏;“盡快恢復(fù)疫苗接種”[N];中國婦女報(bào);2013年

2 伊逸;“疫苗事件”漸行漸遠(yuǎn) 監(jiān)管警鐘仍須長鳴[N];中國改革報(bào);2005年

3 辛斌;異域旅游 先打疫苗[N];健康報(bào);2002年

4 王樂民;二類疫苗放開會(huì)帶來什么[N];健康報(bào);2005年

5 姚杰;中國疫苗市場(chǎng)硝煙四起[N];中國經(jīng)濟(jì)時(shí)報(bào);2003年

6 趙宗祥;別讓疫苗成為監(jiān)管盲點(diǎn)[N];中國醫(yī)藥報(bào);2003年

7 邵建國;全球巨頭重金下注疫苗[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2007年

8 徐李燕;多數(shù)二類疫苗都該打[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2008年

9 常賓;韓國發(fā)明舌下疫苗接種法[N];健康時(shí)報(bào);2008年

10 甘衛(wèi)華邋何松明;接種了疫苗為什么還會(huì)感染[N];家庭醫(yī)生報(bào);2008年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 倪德志;新型腫瘤化療和疫苗制劑的探索性研究[D];中國科學(xué)院研究生院(過程工程研究所);2015年

2 邵杰;EV71全病毒滅活疫苗免疫機(jī)制的系統(tǒng)生物學(xué)研究[D];吉林大學(xué);2016年

3 郭勝;激惹和乳化劑對(duì)疫苗接種后雌雄小鼠抗體應(yīng)答的影響[D];吉林大學(xué);2016年

4 李海鳳;新型結(jié)核病疫苗免疫組分和診斷分子標(biāo)識(shí)候選物的初步篩選及鑒定[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2016年

5 邢泉;靶向防齲DNA疫苗增強(qiáng)粘膜免疫的分子機(jī)制研究[D];武漢大學(xué);2010年

6 赫兢;治療性乙型肝炎病毒DNA疫苗的基礎(chǔ)研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2005年

7 許瑾;河北省正定縣農(nóng)村居民對(duì)菌痢疫苗接受性及影響因素研究[D];復(fù)旦大學(xué);2005年

8 王敏慧;異型M-CSF/M-CSFR DNA疫苗構(gòu)建及其免疫效應(yīng)的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2002年

9 邱志華;病毒樣顆粒構(gòu)建和治療性降壓疫苗的研究[D];華中科技大學(xué);2013年

10 朱中元;結(jié)核DNA疫苗的構(gòu)建、免疫功能及保護(hù)效果研究[D];華南熱帶農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 孔祥穩(wěn);風(fēng)險(xiǎn)社會(huì)視角下合規(guī)疫苗接種致害的國家責(zé)任研究[D];首都經(jīng)濟(jì)貿(mào)易大學(xué);2015年

2 朱芹;二類疫苗市場(chǎng)推廣模式研究[D];浙江工業(yè)大學(xué);2015年

3 鄭浩;疫苗冷藏運(yùn)輸策略的應(yīng)用研究[D];上海交通大學(xué);2014年

4 王麗娟;妊娠女性流感疫苗接種的健康信念調(diào)查及結(jié)果分析[D];吉林大學(xué);2016年

5 楊鳳嬌;豬帶絳蟲重組BCG-TSOL18疫苗構(gòu)建及其免疫學(xué)特性研究[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2016年

6 楊巍;水產(chǎn)疫苗新型輸送系統(tǒng)的建立[D];福州大學(xué);2014年

7 于小慶;具有復(fù)發(fā)期分布和接種的多族群模型的穩(wěn)定性分析[D];黑龍江大學(xué);2016年

8 曹學(xué)導(dǎo);多種豬圓環(huán)病毒2型疫苗臨床應(yīng)用效果比較研究[D];華南農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

9 翟羽佳;眼表滴種靶向DC的納米DNA疫苗pRSC-NLDC145·gD-IL-21治療復(fù)發(fā)性HSK的研究[D];東南大學(xué);2016年

10 林曉佳;A型產(chǎn)氣莢膜梭菌類毒素疫苗的臨床應(yīng)用和保護(hù)效果評(píng)價(jià)[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

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本文編號(hào)：720754